汉坦病毒空气传播感染的实验室和野外采样研究

本项研究是通过动物实验和现场采样研究汉坦病毒气溶胶传播感染。用感染的黑线姬鼠排泄物自然形成的病毒气溶胶进行实验。黑线姬鼠感染后第5天放入离乳小鼠和乳小鼠,暴露10?d,检测不到抗体,感染后第7天,放入离乳小鼠和乳小鼠,暴露10?d,可以检测出抗体;黑线姬鼠在暴露15?d时,可以检测出抗体。可见黑线姬鼠感染后,第7天可能是它向体外排毒的一个时间标志,且形成的病毒气溶胶具有感染性。对现场采集的空气样品和收集的打谷者佩戴的口罩样品的研究发现,在稻田堆放的稻捆根部和鼠栖息的草窝的空气中每350L空气中和打谷场脱粒机附近每96L空气中,含有至少一个具有生物活性的汉坦病毒粒子。结合流行病学调查结果,可以判定,汉坦病毒经空气传播吸入感染可能是秋冬季节肾综合征出血热发病的主要传播途径。     

汉坦病毒受体

汉坦病毒感染可引起两种严重威胁人类生命的传染性疾病:肾综合征出血热(HFRS)和肺综合征出血热(HPS)[1,2],这两种疾病都与急性血小板减少和血管渗透性变化有关[3].因此,弄清汉坦病毒与宿主细胞的相互作用及其机制,对控制汉坦病毒性疾病显得尤为重要.整合素对维持血管壁的渗透性和完整性具有重要作用.一种整合素可以在不同的细胞上表达,同一种细胞也可以表达多种不同的整合素,并且不同类型整合素的作用也各有不同.在汉坦病毒与内皮细胞相互作用研究中,细胞整合素受体起到了关键性的作用,致病性汉坦病毒通过细胞膜上β3整合素感染细胞,而非致病性汉坦病毒通过细胞膜上β1整合素感染细胞[4,5].这些都为汉坦病毒的受体和发病机制研究奠定了一定的基础.本文拟对该研究近况作一综述,为汉坦病毒致病机制的深入研究提供参考.     

汉坦病毒的基因分型及其序列分析

为了探讨从核苷酸水平耐汉坦病毒进行分型,设计两对型特异性引物,采用反转录和聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,对亚太地区１８株汉坦病毒进行了扩增鉴定,并对其中７株汉坦病毒的ＰＣＲ产物进行了测序分析。ＰＣＲ的分型结果表明,Ⅰ型引物只能扩增血清Ⅰ型病毒的ｃＤＮＡ;Ⅱ型引物也只能扩增血清Ⅱ型病毒,其间无交叉反应。采用巢式ＰＣＲ和限制性内切酶验证了ＰＣＲ产物的特异性。序列分析结果表明,Ｒ３６Ｍ片段Ｇ１区的核苷酸序列与血清Ⅰ型病毒代表株７６－１１８的同源性为７８．４％,而与血清Ⅱ型病毒Ｒ２２的同源性为６８．１％;Ｒ３６与汉坦病毒序列同源性的成对比较结果也表明,Ｒ３６与血清Ⅰ型病毒的同源性均高于血清Ⅱ型病毒;Ｌｅａｋｅｙ虽然能被Ⅱ型引物扩增,但其序列与血清Ⅱ型病毒Ｒ２２的同源性仅为４４．９％,故不属于血清Ⅱ型病毒。上述研究结果表明,反转录聚合酶链反应能对多数汉坦病毒准确分型,但最终结果尚有赖于序列分析。     

我国SEO型汉坦病毒全S基因核苷酸序列测定

为获得SEO型病毒基因组更为详尽的资料,也为局部暴发的原因提供科学的资料,我们采用病毒分离、McAbs分型.RT-PCR扩增及核苷酸序列测定的方法,在国内首次测出我国SEO型病毒较为完整的全S片段,并与76-118、Seoul、SRll株的核苷酸及氨基酸同源性进行比较,分别为64.2%、91.8%、96.8%及80.5%、95.4%、97.3%.表明病毒基因组间的重排不是造成发病高峰的原因.     

汉坦病毒的致病性和免疫应答以及抗病毒和疫苗研究进展——第四 …

第四届肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）和汉坦病毒国际会议于１９９８年３月５日￣７日在美国亚特兰大召开,会议共有９个专题。本文就汉坦病毒的致病性和免疫应答以及疫苗和抗病毒药物的研究现状以及最新进展作一简单介绍：研究较为深入的有美国引起汉坦病毒肺综合征的Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅ病毒,致今已确诊病例１７０多例,它的致病机理认为是由Ｔ细胞介导的免疫病理所致,而与我国由ＨＴＮ病毒引起的肾综合征出血热是由抗原抗体复合物     

浙江省汉坦病毒基因分子进化分析

为了分析浙江省汉坦病毒分子流行病学的特点,本文应用分子生物学软件对1981～2007年从浙江省不同地区不同宿主分离的12株汉坦病毒的S、M基因序列进行分子进化分析,结果显示:浙江省属汉滩(HTN)型和汉城(SEO)型的混合型疫区,病毒的基因差异和亲缘远近关系主要表现在地区性,而与病毒分离的年代与宿主关系并不大,表现出明显的地理聚集现象,该现象在HTNV中的表现尤为明显,同一地区分离的病毒表现为较高的基因同源性,系统进化树上分布于同一或临近分支。另外发现分离自浙江省建德地区的Gou3和ZJ5株在SEOV进化枝中构成一独立分支,而且与国内外SEOV其他毒株的基因差异均较大,在浙江省建德地区存在着SOEV的特殊亚型病毒。     

汉坦病毒感染者血清病毒RNA的临床意义

汉坦病毒感染啮齿类动物,但不引起疾病。人类可通过接触这些宿主动物的尿、粪等排泄物中携带的病毒而感染。汉坦病毒RNA检测技术已经由核酸分子杂交,发展为实时荧光定量PCR,敏感性、特异性和可重复性明显提高。汉坦病毒感染为急性感染性疾病,病程早期可以在患者血清中检出病毒RNA。汉坦病毒感染者血清中病毒RNA与凝血功能、炎症因子、疾病严重程度、疾病预后等密切相关。在肾综合征出血热(HFRS)患者的发热期和低血压休克期病毒载量较高,随着病程进展,病毒载量逐渐下降,直至消失。检测汉坦病毒感染者血清中病毒RNA载量有重要临床价值。     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

肾综合征出血热 (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属 (Hantavirus,HV)中的病毒引起的急性传染病,该病的病死率较高,早期诊断和治疗尤为重要.     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

To establish a rapid, sensitive and specific diagnostic assay for Hantavirus with microarray techniques, specific primers and probes were designed according to the conservative and specific DNA sequence of 76-118 strain and R22 strain. The probes were spotted on glass slides to form microarrays.The Cy3-1abled single stranded DNA fragments prepared by dissymmetical PCR were hybridized with the probes on the glass slides. The microarrays were scanned and analyzed with a scanner. The results showed that the DNA microarray could detect the different typed DNA of HTN and SEO with adequate specificity and sensitivity. The developed DNA microarray and techniques might be a very useful method for diagnosis and prevention, and could be widely applied in specific pathogens detection ofinfectious diseases such as hemorrhagic fever with renal syndrome.     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

湖北省不同地区汉坦病毒M片段的分析研究

参考汉坦病毒（ＨＶ）的基因文库软件设计Ｍ片段Ｇ－１区型特异性引物,以ＨＶ　７６／１１８、Ｈ－１１４、Ａ－９及Ｒ－｛２２｝株ＲＮＡ为阳性模板,建立ＨＶ的分型方法──逆转录一半巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ）,对湖北省不同地区分离的３０株ＨＶ进行分　型。结果显示：（１）建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ分型方法对ＨＶ两型的代表株７６／１１８（ＨＴＮ）、Ａ－９（ＨＴＮ）、Ｈ－１１４（ＨＴＮ）及Ｒ－｛２２｝（ＳＥＯ）ＲＮＡ进行了特异性扩增,其大小与理论值一致;此　法只能检测ＨＶ　ＲＮＡ,不能检测其它病毒ＲＮＡ。（２）分离于湖北省不同地区的３０株ＨＶ的分型结果　为汉滩型２１株、汉城型９株,其中长江以南汉滩型１２株、汉城型２株;长江以北汉滩型９株、　汉城型７株。这表明建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ用于ＨＶ的检测特异性好;分析湖北省不同　地区分离的３０株ＨＶ,显示湖北省ＨＦＲＳ流行为混合疫区;且在湖北地区具有一定的地理聚集性。     

流式细胞术检测汉坦病毒抗原血症的临床应用

在我国,肾综合征出血热(HFRS)是严重威胁人民身体健康乃至生命安全的急性传染病.及时有效的实验室检查对于指导临床尽早实施抗病毒治疗、进行预后评估,从而减轻患者临床症状、改变病程甚至降低死亡率都有极其重要的意义.本研究旨在建立流式细胞术定量检测外周血单个核细胞(PBMC)中汉坦病毒抗原血症,并观察其在HFRS的诊断和预后评价中的作用,现报告如下.     

流式细胞术检测汉坦病毒抗原血症的临床应用

在我国,肾综合征出血热(HFRS)是严重威胁人民身体健康乃至生命安全的急性传染病。及时有效的实验室检查对于指导临床尽早实施抗病毒治疗、进行预后评估,从而减轻患者临床症状、改变病程甚至降低死亡率都有极其重要的意义。本研究旨在建立流式细胞术定量检测外周血单个核细胞(PB     

三种提取RNA的方法对汉滩病毒检测敏感性影响的研究

分别采用标准法、ＧＰ法和ＭＢＰ法抽提汉滩病毒ＲＮＡ,结合套式ＰＣＲ比较这三种方法的敏感性。结果表明,所用引物对这两株病毒具有相同的特异性。这三种提取ＲＮＡ的敏感性差异不大,敏感性从高到低依次为：ＧＰ、ＭＢＰ和标准法,检测汉滩病毒的效价分别为０．０１、０．０１和０．１ＴＣＩＤ５０／２００μｌ;提取ＲＮＡ的时间长短分别为：标准法为２．５ｈ,ＧＰ为１ｈ,ＭＢＰ为０．５ｈ,可见ＭＢＰ用时最少。使用ＧＰ和ＭＢＰ提取ＲＮＡ时,可以在室温下进行,不需要低温离心。所以,ＭＢＰ最适合于实验室和临床病原体的快速检测,特别是对采集的环境样品的快速检测