葛根素对糖尿病致肺损伤的保护作用及其机制的研究

目的:探讨糖尿病对肺脏损伤及葛根素对肺组织影响的可能机制。方法:腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病(DM)模型,SD大鼠随机分为对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病 葛根素组(DM Pur组)。检测注药前及模型成立后第20d、40d、60d的血糖及体重的改变。检测肺组织中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结合光镜、电镜、免疫组织化学染色方法综合评价。结果:①DM组NO、MDA高于C组(P<0.01),SOD活性低于C组(P<0.01),DM Pur组NO含量明显低于DM组(P<0.01),MDA含量40d开始显著降低(P<0.01),SOD活性高于DM组(P<0.01)。②光镜下见肺泡隔增厚,炎性细胞浸润;电镜下见Ⅱ型肺泡上皮细胞微绒毛数量明显减少,嗜锇性板层小体数量明显减少,细胞间质胶原纤维增生,葛根素可减轻肺组织上述病理性改变。③免疫组织化学染色结果:DM组细胞胞质中可见ONOO-特征性代表物硝基酪氨酸(ni-trotyrosine,NT)黄染阳性信号表达,且较对照组略为增强,DM Pur组黄染信号较DM组略为减弱。结论:①DM时可发生肺组织损伤,可能与长期高血糖诱导产生大量自由基有关。②NO/ONOO-通路是DM造成肺组织细胞损伤的机制之一。③初步证实葛根素能在一定程度上抑制高血糖诱导肺组织中自由基的过量生成,降低肺组织中的ONOO-的过度表达,这可能是其抗DM时肺组织损伤的作用机制之一。     

葛根素对小鼠心肌细胞CVB3诱导心率失常的影响及其作用机制

本研究旨在确定葛根素对CVB3诱导心肌炎的治疗作用,并探讨其分子机制。通过测量生理指标和超声心电图检查,探讨葛根素对VMC小鼠心脏功能的影响;借助ELISA检测血清中H2S、TNF-α、hs-CRP和cTnI水平,并结合Western blotting分析葛根素对L-10、STAT3、NF-κβp65和NF-κβp50表达水平的影响。ELISA检测结果显示,葛根素处理可降低血清TNF-α、hs-CRP和cTnl水平,上调IL-10和STAT3的表达,并升高血清H2S含量;Western blotting分析结果表明,葛根素处理下调了NF-κβp65和NF-κβp50的表达水平,并降低P13K和AKT在心脏组织中的磷酸化水平。此外,葛根素处理还增加了心脏组织中Iκβα的表达水平。综上,葛根素通过激活CSE/H2S途径和IL-10/STAT3途径,并抑制NF-κβ信号传导途径来抑制VMC的发展。     

葛根素对糖尿病心肌细胞的保护及其机制研究

观察葛根素（Puerarin）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病大鼠心肌细胞的保护作用,并探讨血小板反应素1（Thrombospondin-1,TSP-1）的表达改变及其作用。雄性SD大鼠45只随机分为三组（n=15）：糖尿病组和葛根素治疗组采用一次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）65mg／kg制备糖尿病模型,其中葛根素治疗组于造模后葛根素腹腔注射4周（100mg/kg/day）,正常对照组仅腹腔注射等量生理盐水（6ml／kg）,同样喂养4周。四周后各组大鼠处死。H—E染色及透射电子显微镜观察三组大鼠心肌细胞纤维显微结构和超微结构的病理改变．免疫组化和实时荧光定量PCR法观察大鼠心肌细胞中TSP-1蛋白和mRNA表达的变化．同时利用Langendorff离体心脏灌流法测定各组大鼠心室肌细胞功能。结果发现葛根素治疗组较糖尿病组大鼠的体重增加明显,同时血糖下降,有显著性差异（P〈0．01）。H—E染色显示糖尿病大鼠多处心肌肌丝紊乱伴少量炎症细胞浸润,电镜下发现有线粒体嵴消失溶解,肌丝排列紊乱等病理改变,而葛根素治疗组大鼠偶见上述病理变化。免疫组化显示葛根素治疗组心肌内TSP-1阳性细胞密度小于糖尿病大鼠,TSP-1 mRNA表达也比糖尿病大鼠要低。此外葛根素治疗组大鼠的左室收缩末压（LVSEP）、左心室舒张末期压（LVEDP）等心功能指标均明显低于正常组（P〈0．01）,但较糖尿病组有显著改善（P〈0．01）。上述结果显示葛根素能保护糖尿病大鼠心肌细胞的高糖损伤和维持心室肌细胞的功能,而该机制可能与抑制心肌细胞TSP-1表达的水平有关。     

复合益生菌粉对功能性便秘小鼠润肠通便的作用

探究由乳双歧杆菌V9、干酪乳杆菌Zhang、植物乳杆菌P9组成的复合益生菌粉对便秘模型小鼠的排便情况、肠动力水平的改善及肠道菌群结构的调整作用。

将100只Balb/c小鼠随机分为A、B两大组,每组又随机分为空白组、模型组以及复合益生菌粉低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中A组50只用于排便情况测定,B组50只用于结肠HE染色及肠道菌群的检测。实验共进行15 d,空白组与模型组小鼠灌胃蒸馏水15 d,复合益生菌粉各剂量组小鼠灌胃相应剂量的复合益生菌粉15 d;同时,除空白组外,于第7天、第15天灌胃盐酸洛哌丁胺（4 mg/kg）进行造模。

与空白组相比,模型组小鼠首次排便时间显著延长（P＜0.01）,6 h内粪便质量显著减轻（P＜0.05）,肠推进率显著降低（P＜0.05）,提示造模成功;与模型组相比,复合益生菌粉低、高剂量组首次排黑便时间显著缩短（P＜0.05）,肠推进率显著升高（P＜0.05）,同时高剂量组小鼠6 h排便量增加（P＜0.05）。HE结果显示,复合益生菌粉可以增厚结肠肌层,恢复受损的结肠黏膜组织,并且腺管排列恢复至正常水平。菌群测序结果显示,与空白组相比,模型组小鼠肠道菌群结构发生显著改变;与模型组相比,复合益生菌粉中、高剂量组显著提高便秘模型小鼠肠道菌群的丰富度,其中Patescibacteria、厚壁菌门、放线菌门、疣微菌门、Eubacterium xylanophilum_group等丰度增加,另枝菌属、Odoribacter等丰度降低。

复合益生菌粉能够通过促进肠蠕动,调整肠道菌群结构发挥缓解小鼠便秘的作用。

     

玉环柚调节血脂和润肠通便的作用研究

本实验以200mg／kg、400mg／kg、1200mg／kg三个剂量组分别用预防型大鼠脂质代谢紊乱模型法和小肠推进实验、排便实验进行了柚粉调节血脂和润肠通便的研究。结果：证明柚粉能显著降低高血脂模型大鼠血清甘油三酯、血清胆固醇水平,能缩短便秘模型小鼠的首次排便时间,能增加便秘模型的排便粒数和排便重量。     

葛根素对冷激诱导的高血压小鼠的影响

目的：检测葛根素灌胃对冷激诱导的高血压小鼠的血压血脂及肾脏结构的影响。方法：小鼠分为正常对照组、冷激对照组、冷激葛根素饲喂组（2,5,10ms／kg bw3组）（n=12）。以寒冷刺激（4±2℃）建立小鼠高血压模型,每天定时灌胃葛根素治疗,对照组给予聚乙烯吡咯烷酮溶液。连续饲喂18d．检测各组小鼠血压、血脂含量,石蜡切片观察肾脏结构。结果：冷激对照组小鼠血压显著高于正常对照组（P〈0．01）,葛根素饲喂组血压显著低于冷激对照组（P〈0．05）。冷激对照组TG含量显著高于正常对照组（P〈0．01）,而冷激饲喂组TG含量明显降低（P〈0．05）;冷激饲喂组TC含量与冷激对照组相比有所降低但无统计学意义;2mg／kg BW葛根素组LDL-C显著低于冷激对照组（P〈0．01）,各组间HDL-C含量比较无统计学意义,但葛根素饲喂组HDL-C／LDL-C值显著高于冷激对照组。冷激对照组肾小管上皮细胞水肿,内腔极度缩小,肾小球明显胀大,肾小囊腔显著变窄,葛根素饲喂组肾小管水肿基本消失,内腔明显增大,肾小球、肾小囊结构趋于正常。结论：葛根素灌服具有降血压、降血脂、改善病变肾脏结构的作用。     

首荟通便胶囊对术后肠麻痹小鼠肠道功能的影响及机制研究

探讨首荟通便（Shou-Hui Tongbian,SHTB）胶囊对小鼠术后肠麻痹（postoperative ileus,POI）的作用,并从肠道菌群平衡方面探讨其可能的作用机制。

采用经典小肠干扰术建立小鼠POI模型,将30只小鼠随机分成对照组（Control组）、模型组（POI组）、阳性参照莫沙必利组（MSBL组）、SHTB胶囊低剂量组（SHTB-L组）和SHTB胶囊高剂量组（SHTB-H组）,每组6只。Control组和POI组小鼠灌胃生理盐水、MSBL组小鼠灌胃莫沙必利溶液（2.6 mg/kg）、SHTB-L组与SHTB-H组小鼠灌胃SHTB溶液（0.619 g/kg、1.238 g/kg）,每天1次,连续给药2 d。采用墨汁推进法检测小鼠的肠道蠕动能力;应用H&;E染色法观察小鼠肠道组织结构;利用16S rRNA基因高通量测序技术解析肠道菌群结构并确定SHTB胶囊发挥作用的关键菌。

与Control组相比,POI组小鼠肠道蠕动能力显著减弱（q=7.263,P＜0.001）,小肠黏膜中性粒细胞和淋巴细胞增多并伴有充血,组织发生水肿,肠道菌群物种总数降低,有益菌Parvibacter等的相对丰度显著降低（t=3.340,P=0.008）,有害菌Rikenellaceae_RC9_gut_group等的相对丰度显著升高（U=2,P=0.009）;药物治疗后上述变化有不同程度的减轻,与POI组相比,SHTB-L组、SHTB-H组和MSBL组小鼠肠道蠕动能力均显著提升（均P＜0.010）,炎症、水肿和充血等肠道病理改变明显好转;SHTB组小鼠肠道菌群物种总数有所提高,其中Parvibacter等的相对丰度显著升高（U=5,P=0.041）,Rikenellaceae_RC9_gut_group相对丰度显著降低（U=3,P=0.015）。

SHTB胶囊可通过调节小肠黏膜关键菌的平衡来改善POI小鼠肠道病理改变,促进肠道蠕动。

     

葛根素对帕金森病细胞模型的保护作用研究

目的:研究葛根素对帕金森病细胞模型的保护作用及其具体的作用机理.方法:用0.16mM的MPP+处理PC12细胞48h建立帕金森病细胞模型.实验分为对照组、损伤组和保护组,损伤组用MPP+(0.16mM)处理PC12细胞;保护组用葛根素提前预处理PC12细胞1h,后加MPP+.检测PC12细胞存活率、Caspase-3活性及ERβ的转录活性.结果:葛根素能够抑制caspase-3的激活,且其依赖于ERβ的表达,雌激素受体拮抗剂ICI182,780可阻断上述效应;其次葛根素可提高ERβ的转录活性.结论:葛根素对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有抗细胞凋亡的保护作用,且具体的作用机理可能依赖于ERβ介导的经典的基因组作用模式.     

柑橘橘络提取物通便作用的实验研究

目的：研究富含柑橘多糖和黄酮的橘络提取物的润肠通便作用。方法：依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）“通便作用检验方法”,将小鼠随机分为模型对照组、阴性对照组和三剂量实验组（低、中、高剂量组）,经口给予柑橘橘络提取物1w后,通过测定小肠墨汁推进率、首粒便排出时间和6h内排便粒数及重量,判断柑橘橘络提取物对小鼠肠道蠕动和排便功能的影响。结果：与模型对照组相比,低剂量和中剂量组提高小肠墨汁推进率分别为65.29%和62.90%;3个剂量组的小鼠排首粒便时间显著低于模型对照组,6h内排便数及重量明显增多。结论：柑橘橘络提取物具有良好的促进肠道蠕动功能和排便的作用,其中中剂量组效果较好。     

葛根素对中枢神经系统神经细胞保护作用的研究进展

葛根素（puerarin）是从中药葛根中提取的主要有效成分之一,为一种异黄酮化合物。它具有抑制脑细胞凋亡,保护神经细胞的能力,还能够提高神经元抵抗损伤的能力,可用于治疗脑损伤以及神经退行性疾病。本文就葛根素对中枢神经系统神经细胞的保护作用及机制方面的研究进展做一综述。     

葛根素预防雌激素缺乏性骨质疏松的机制探讨

目的观察葛根素对去卵巢大鼠股骨骨密度、颌骨骨密度和血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）及雌二醇（E2）水平的影响。方法 3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组（sham group）、单纯去势组（OVX group）、去势＋雌二醇治疗组（OVX-estrogen group）和去势＋葛根素治疗组（OVX-puerarin group）。给药3个月后测量各组大鼠股骨和颌骨骨密度,血清中TNF-α和CRP及雌二醇（E2）水平。结果 OVX-puerarin组较sham组体重明显增加（P〈0.01）;较OVX-estrogen组的TNF-α（P〈0.01）、CRP（P〈0.05）及E2（P〈0.01）水平显著下降;其下颌骨和股骨远端骨密度与OVX组、sham组之间无显著性差异,但其股骨近端骨密度较OVX-estrogen组明显增加（P〈0.05）。结论葛根素作为抗炎因子,能够显著降低TNF-α和CRP的水平,但并不会提高雌激素的水平;葛根素对卵巢切除所致的骨质疏松症有一定的治疗作用,但会明显提高机体体重。     

葛根素延缓动脉粥样硬化进展的机制研究

目的:明确葛根素(Pur)对小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的治疗作用及其潜在机制。方法:用高脂饮食喂养成年小鼠诱导动脉粥样硬化模型,将小鼠分为Con组,ApoE~(-/-)组,ApoE~(-/-)+Pur组。采用HE染色分别检测各组小鼠中动脉粥样硬化斑块面积,免疫荧光染色检测斑块中MMP2的阳性区域面积。用50μg/mL ox-LDL干预巨噬细胞诱导动脉粥样硬化细胞模型,并用Ad-sh-Sirt3干扰Sirt3表达,将细胞分为Con组、ox-LDL组、ox-LDL+Pur组、ox-LDL+Pur+Ad-sh-Sirt3组。Western-blot检测Sirt3表达含量,TUNEL法检测巨噬细胞凋亡。结果:动物水平,与Con组相比,ApoE~(-/-)组小鼠出现了显著的动脉粥样硬化斑块,ApoE~(-/-)组小鼠MMP2阳性区域面积显著高于Con组(P0.05);Pur处理后,ApoE~(-/-)+Pur组动脉粥样硬化斑块面积明显低于ApoE~(-/-)组(P0.05),MMP2的阳性区域面积显著低于ApoE~(-/-)组(P0.05)。细胞水平,Western结果显示,与对照组相比,ox-LDL组Sirt3表达量显著降低(P0.05),ox-LDL+Pur组Sirt3表达水平显著高于ox-LDL组(P0.05)。相比于Con组,ox-LDL组巨噬细胞凋亡水平显著升高(P0.05);给予Pur处理后,相比于单纯ox-LDL组,ox-LDL+Pur组巨噬细胞的凋亡水平显著降低(P0.05)。Ad-sh-Sirt3处理消除了葛根素对于巨噬细胞凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:外源性Pur可能通过激活Sirt3表达,进一步降低巨噬细胞凋亡水平,减少巨噬细胞的浸润,增加动脉粥样硬化斑块稳定性。     

葛根素对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的 :观察葛根素对豚鼠单个心室肌细胞钾离子通道的影响。方法 :采用内面向外膜片钳单通道记录技术。结果 :葛根素 2 0 μmol/L ,4 0 μmol/L ,80 μmol/L对单个心肌细胞钾离子通道的开放概率 (P0 )有抑制作用 ,在 80μmol/L时 ,P0 值从 0 .86 7± 0 .13降至 0 .0 19± 0 .0 1,与用药前比较有显著差异 (n =5 ,P <0 .0 1)。结论 :葛根素能抑制心肌细胞钾离子通道是其抗心律失常的分子机制     

葛根素对糖尿病视网膜细胞凋亡作用的研究进展

糖尿病的发病率逐年上升,其并发症的严重性日趋明显,特别是糖尿病视网膜病变导致视力下降和丧失已经引起了广泛关注,所以研究糖尿病视网膜病变的发病机制及其防治是必要的。糖尿病视网膜病变是一种多种机制共同作用的复杂性疾病,而细胞凋亡在糖尿病视网膜病变的发生和发展中起着重要的作用,所以研究细胞凋亡对糖尿病视网膜病变的治疗有着重要意义。由于细胞凋亡研究的深入,人们将注意力集中于糖尿病视网膜细胞凋亡能否得到抑制和逆转的问题上。研究发现,糖尿病视网膜病变细胞凋亡可能与视网膜新生血管形成、VEGF水平增高等因素有关。当前对葛根素的研究表明,葛根素能有效抑制视网膜新生血管形成,并且对于缺血、缺氧等因素引起的损害有很强的改善作用,葛根素还可以降低糖尿病糖基化终产物水平,甚至对视网膜超微结构的损害具有一定的保护作用,所以葛根素可能是治疗糖尿病性视网膜病变的新策略。本文就近期糖尿病视网膜病变中细胞凋亡的有关研究和葛根素的抗细胞凋亡作用做一综述,提示在糖尿病视网膜病变中葛根素的不可忽视的作用。     

葛根素对极低频电磁辐射下HFSF细胞中MMP-2 与COL1A1 的影响

目的：研究葛根素对极低频电磁场(ELF-EMFs)诱导的人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与I型胶原(COL1Al)的影响。方法：体外培养HFSF 细胞,并将其分为对照组、辐射组、葛根素组,通过明胶酶谱法检测MMP-2的活性,Western-Blot 检测MMP-2、COL1A1 蛋白的表达。结果：暴露于0.2 mT、50Hz 的电磁辐射系统24 h 后,HFSF 细胞(辐照组)MMP-2酶活性较对照组增高20%,MMP-2 蛋白表达升高45%,而COL1A1的蛋白表达下降40%,差异有统计学意义(P<0.05);而与辐射组比较,葛根素组HFSF细胞MMP-2 酶活性下降33 %,MMP-2 蛋白表达降低44.1 %,COL1A1 蛋白升高80%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：极低频电磁辐射可提高HFSF 细胞中MMP-2 的活性与蛋白表达,抑制COL1Al的合成,葛根素可在一定程度上逆转这一作用。     

黄连素对肥胖小鼠肠道菌群的影响及其机制

为了探索黄连素对肥胖小鼠肠道菌群的影响和作用机制,本研究将40只雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、黄连素高剂量组、黄连素中剂量组和黄连素低剂量组,每组8只,除空白组外,其余4组给予高脂饮食,建立实验性肥胖小鼠模型。造模14 d后,全部给予正常饮食,黄连素高、中、低剂量组灌胃给予每天0.1～0.3 mL/10 g的药物干预,空白组和模型组给予等剂量的生理盐水,给药持续14 d。每周称量两次体质量,并分别于实验第0、14、28天从眼眶取血测定血脂和炎性因子的含量,收集小鼠粪便测定乳酸杆菌和双歧杆菌的数量。研究结果表明:空白组和模型组小鼠的体质量在第14天时有明显差异,造模成功;实验第28天,黄连素各给药组小鼠的体质量与模型组相比有显著性差异。模型组双歧杆菌、乳酸菌的数量和血脂水平与空白组比较有显著性差异,黄连素给药组能显著改善肥胖小鼠的血脂水平和双歧杆菌、乳酸杆菌的数量。本研究结果初步得出结论认为:黄连素改善肥胖小鼠的作用机制可能与脂质代谢、炎性反应和肠道微环境的改变密切相关。     

葛根素对肥胖型高血压大鼠血压和血管功能影响的实验研究

目的:本研究旨在观察饮食中添加葛根素对肥胖型高血压大鼠的心血管代谢指标的影响,尤其关注其对于血压和血管功能的效应。方法:①自发性高血压大鼠24只,分正常饮食对照组(8只)、高脂饮食组(8只)、高脂饮食+葛根素组(8只),大鼠先进行1周的适应性喂养,1周后进行干预,干预时间为14周;②每周测1次体重、鼠尾血压;③实验结束时空腹取血浆测血脂、血糖值,取胸主动脉观察主动脉的内皮依赖性及非内皮依赖性舒张功能。结果:①葛根素可防止高脂饮食导致的自发性高血压大鼠体重的增加及血压、血糖的升高,与高脂饮食组比较,P<0.05或P<0.01。②长期葛根素喂养可有效防止高脂饮食导致的高血压大鼠的血脂水平升高;③长期的葛根素喂养可显著改善肥胖型高血压大鼠的血管舒张功能及降低血压。结论:葛根素可有效改善肥胖型高血压大鼠的相关代谢指标,并可明显降低血压及改善血管功能,提示葛根素对肥胖型高血压有较好的防治作用,值得进一步深入研究。     

阿加曲班与葛根素联合治疗糖尿病下肢动脉硬化闭塞症的临床研究

目的:研究阿加曲班与葛根素联合治疗糖尿病动脉硬化闭塞症的临床效果。方法:选择糖尿病动脉硬化闭塞症患者124例。随机分为观察组与对照组,各62例。观察组给予阿加曲班与葛根素联合治疗,对照组单用阿加曲班治疗。治疗前使用降糖和降压药物使血糖和血压保持稳定。观察治疗前后临床症状改善的情况,检测治疗前后足背动脉血流量及踝/肱动脉压比值。结果:单用阿加曲班组及联合葛根素组在改善糖尿病动脉硬化闭塞症的临床症状方面均有良好的效果,但联合葛根素组比单用阿加曲班组的治疗效果更佳(P<0.01)。在足背动脉血流量,踝/肱动脉压比值治疗前后各项指标的改善方面,联合葛根素组比单用阿加曲班组的治疗效果更佳,差异亦有统计学意义(均为P<0.05)。两组治疗期间和治疗后均无明显不良反应,耐受性好。结论:糖尿病动脉硬化闭塞症患者经使用阿加曲班与葛根素联合治疗,效果良好,二者具有协同作用。