一株凡纳滨对虾源维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏特性

【目的】凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界范围内最主要的对虾养殖品种之一,2017年5-6月上海某凡纳滨对虾养殖场出现不明原因的死亡病例,发病急,死亡率高。从患病凡纳滨对虾体内分离到一株优势菌AVZ01,旨在确定病因并筛选出敏感药物,为今后凡纳滨对虾维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的防治提供参考。【方法】从患病凡纳滨对虾肝胰腺和肠道中分离致病菌,通过理化特性及16S r RNA基因序列分析进行鉴定,通过人工感染试验确定病原,使用Bliss法计算出半数致死剂量(LD50),并通过纸片扩散法进行药敏试验。【结果】从患病凡纳滨对虾体内分离到一株优势菌AVZ01,进行人工回归感染试验后,对虾发病症状与自然发病症状相似,凡纳滨对虾的LD50为8.7×105 CFU/m L。根据该菌株的形态特征、理化特性、16S r RNA基因序列分析,综合判断该病原菌为维氏气单胞菌。药敏试验结果显示,该菌株对米诺环素、诺氟沙星、庆大霉素等16种抗生素高度敏感,对青霉素、苯唑西林、头孢氨苄等9种抗生素耐药。【结论】分离菌株AVZ01对凡纳滨对虾有较强的致病性,养殖过程中可选用庆大霉素及新霉素等药物进行防控。     

凡纳滨对虾各月龄性状的主成分与判别分析

为了研究凡纳滨对虾各性状增长规律和判定最佳生长季节凡纳滨对虾的体格与月龄的关系,选择1～6月龄凡纳滨对虾各1000只,选择全长、体长、第一腹节背高、第三腹节背高、第一腹节背宽、头胸甲长和体重共7个性状,进行主成分与判别分析.结果表明:各月龄凡纳滨对虾性状之间均呈现显著的正相关(P<0.01), 其中以全长与体长的相关性最为明显,1月龄凡纳滨对虾体重与形态性状的相关系数较小.各月龄凡纳滨对虾的主成分有所不同,1～2月龄凡纳滨对虾的第一主成分为长度因子,第二主成分为宽度因子,第三主成分为高度因子;3月龄凡纳滨对虾的第一主成分与1～2月龄凡纳滨对虾一致,但第二主成分为高度因子,第三主成分为体重因子;4～6月龄凡纳滨对虾的第一主成分为体重因子,第二主成分为高度因子,第三主成分为宽度因子.1～3月龄凡纳滨对虾形态性状的增长优先于体重, 4～6月龄凡纳滨对虾体重优先于形态性状的增长.错过最佳生长季节的凡纳滨对虾的与体格大小相符的月龄可通过建立的判别式来判断,总的判别准确率为98.98%,其中2～4月龄凡纳滨对虾的判别准确率为100%.     

海水和淡化水养殖凡纳滨对虾饲料蛋白需求量的比较研究

本研究从生长、饲料利用和体成分等指标综合评价饲料蛋白质含量对凡纳滨对虾的影响。研究发现,在海水养殖环境下,饲料蛋白水平对凡纳滨对虾的存活率、增重率、特定生长率、饵料系数、蛋白效率和虾体粗蛋白含量均有显著性影响(p<0.05)。摄食饲料蛋白含量38%的海养凡纳滨对虾有较高的存活率、增重率以及最高的特定生长率。饵料系数随蛋白含量的增加而减小,虾体粗蛋白含量随饲料蛋白水平升高而增加,而蛋白含量38%和41%实验组饵料系数和虾体粗蛋白含量均没有显著性差异(p>0.05)。淡化水养殖条件下,凡纳滨对虾的存活率随饲料蛋白水平的增加而提高,而增重率和特定生长率均在饲料蛋白含量35%实验组最高,饵料系数随蛋白含量的增加先减小后增大,蛋白含量35%实验组饵料系数显著小于其他实验组。海水养殖条件下,凡纳滨对虾的存活率、末体重、增重率、特定生长率和蛋白质效率均高于淡水养殖的对虾。对虾虾体粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量均随盐度升高而升高,而虾体水分随着盐度的升高而降低。     

饲料中添加壳聚糖季铵盐对凡纳滨对虾生长及非特异免疫的影响

实验研究壳聚糖季铵盐对凡纳滨对虾生长性能及非特异性免疫能力的影响。在饲料中分别添加0、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的壳聚糖季铵盐, 制成5组等氮等能饲料。将900尾[初体质量(3.820.34) g]健康的凡纳滨对虾随机分成5组(45尾4平行), 养殖时间56d。结果表明:饲料中添加壳聚糖季铵盐显著影响凡纳滨对虾的生长, 0.15%实验组凡纳滨对虾的增重率和特定生长率最佳(P0.05)。饲料中添加壳聚糖季铵盐0.1%、0.15%和0.20%能显著提高凡纳滨对虾血清溶菌酶和碱性磷酸酶及酚氧化酶的活性(P0.05)。饲料中添加壳聚糖季铵盐可显著提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力(P0.05), 0.15%组的保护效果最好, 其相对免疫保护率为33.24%。壳聚糖季铵盐能显著提高凡纳滨对虾的生长性能和抗病能力, 本实验条件下适宜的添加量为0.15%。     

凡纳滨对虾ANT2 基因的克隆及低温表达谱分析

为研究凡纳滨对虾适应低温的分子机理, 实验对从低温处理凡纳滨对虾抑制性消减文库中筛选出的一个360 bp EST 序列进行了研究。首先, 同源比对显示该EST 片段与其他物种的ANT2 基因高度同源, 命名为凡纳滨对虾ANT2 基因(LVANT2); 其次, 通过构建凡纳滨对虾肝胰腺全长cDNA 文库, PCR 扩增获得LVANT2 基因的全长cDNA1540 bp, 其中包括1011 bp 的完整开放阅读框, 编码336 个氨基酸残基。然后, 对基因进行了不同组织和低温处理的表达谱分析: (1)组织表达谱的结果显示, 该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量最高; (2)在不同低温处理下的表达结果显示, 该基因在15℃处理下基因表达量发生显著变化, 13℃开始呈下调表达, 11℃时表达量又升高; 13℃低温处理不同时间发现该基因在12h 内表达量发生显著变化,48h 后表达量最高。LVANT2 基因的低温诱导表达模式说明其可能在凡纳滨对虾低温适应中发挥作用       

维生素C对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响

以不同水平维生素C 2 磷酸酯 (添加量分别为 0、75、15 0、30 0和 6 0 0mg/kg)的饲料喂养凡纳滨对虾 10周 ,研究维生素C 2 磷酸酯对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响。结果显示 :在养殖前 4周 ,饲料中添加维生素C 2 磷酸酯显著促进凡纳滨对虾的生长 ,然而对对虾的成活以及饲料利用不产生影响 (P >0 0 5 ) ;而到实验后期添加维生素C 2 磷酸酯不能促进凡纳滨对虾的生长 ,却显著提高凡纳滨对虾的成活率 (P <0 0 5 )。维生素C 2 磷酸酯对对虾体水分、脂肪、蛋白质和维生素C在肝胰脏中的积累量的影响显著 (P <0 0 5 ) ,对对虾体灰分影响不显著 (P >0 0 5 )。维生素C 2 磷酸酯对对虾血清中超氧化物歧化酶活力无显著影响 ,饲料中未添加维生素C或过量添加 (超过 30 0mg/kg饲料 )均导致血清中酚氧化酶活力、血细胞总数和溶菌酶活力的显著下降。以生长、成活和酚氧化酶活力为指标 ,饲料中维生素C 2 磷酸酯的适宜添加量为 15 0mg/kg。     

碳酸盐碱度和pH值对凡纳滨对虾仔虾存活率的影响

采用静态急性毒理学方法,探讨了碳酸盐碱度和pH值对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)仔虾存活率的影响。结果表明:在pH值为7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0及10.5的试验组中,凡纳滨对虾仔虾存活率随着pH值的升高而下降,碳酸盐碱度在3mmol·L-1、pH值在9.0以上时,凡纳滨对虾仔虾的存活率受到影响显著;在碳酸盐碱度0～44.43mmol·L-1各试验组中,随着碳酸盐碱度升高,凡纳滨对虾仔虾的存活率下降,凡纳滨对虾仔虾对碳酸盐碱度的耐受性随着pH的升高明显下降;pH值为8.8时,碳酸盐碱度的48hLC50为36.81mmol·L-1,pH值为9.2时,碳酸盐碱度的48hLC50为33.05mmol·L-1,pH值为9.6时,碳酸盐碱度的48hLC50为5.55mmol·L-1;在本试验范围内,凡纳滨对虾对高碳酸盐碱度显示出较强的耐受性,是一种适宜移植到盐碱水域的养殖品种;碳酸盐碱度和pH对凡纳滨对虾的致毒作用是一个综合致毒效应,其中CO32-为主要致毒因子。     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)盐度调控相关基因CLCA1的克隆及表达分析

钙激活氯离子通道调节剂(calcium-activated chloride channel regulator,CLCA)为一类金属蛋白酶依赖家族,在哺乳动物上皮组织杯状细胞的粘液产生和粘液平衡中起重要作用.为了探究CLCA1基因在凡纳滨对虾渗透压中的作用机制,本研究采用RACE技术在凡纳滨对虾中克隆出了CLCA1基因,该基因总长度为3129 bp,5'端非编码区长度为175 bp,3'端非编码区长度为107 bp,开放阅读框ORF长度为2847 bp,共编码984个氨基酸,有1个跨膜区域,膜外有VMA结构域.与其他物种氨基酸序列比对结果显示,凡纳滨对虾CLCA1氨基酸与其他物种相似性都较低,相似度最高的为刀额新对虾(Procambarus clarkii) CLCA2氨基酸序列,为47.83％.RT-qPCR结果显示,CLCA1基因在凡纳滨对虾各组织中均有表达,其中肠道、肝胰腺和鳃中的表达量较高;对不同盐度下凡纳滨对虾4个组织中CLCA1基因的定量结果显示,随着盐度的下降,CLCA1基因的表达量在4个组织中呈下调趋势,表明CLCA1基因与凡纳滨对虾的渗透压调节相关.本研究初步阐明了CLCA1基因的理化性质,对CLCA1基因在凡纳滨对虾体内各组织和不同盐度下各组织的表达定量可为CLCA1基因在今后甲壳动物的渗透压调节及免疫调节的研究提供基础支持.     

凡纳滨对虾优势腐败菌鉴定及其群体感应现象

为了鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌并研究其是否存在以N-酰基高丝氨酸内酯类化合物(AHLs)介导的群体感应系统,采用16S rRNA序列鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌,并采用紫色杆菌CV026对优势腐败菌的AHLs活性进行检测.结果发现凡纳滨对虾优势腐败菌菌株1(Aci-1)和菌株2 (Aci-2)均为不动杆菌属,均存在以AHLs为信号分子的群体感应系统.添加外源信号分子AHLs能促进Aci-1菌株生物膜的形成,且呈浓度依赖性.在一定的贮藏范围内,凡纳滨对虾腐败菌信号分子AHLs浓度与细菌总数、挥发性盐基氮含量存在正相关性,其相关系数r分别为0.846 6和0.986 7,分别在P＜0.05与P＜0.01水平上显著,结论是凡纳滨对虾优势腐败菌不动杆菌菌株存在以AHLs介导的群体感应系统,且与凡纳滨对虾的腐败密切相关.     

两种微藻对凡纳滨对虾幼体成活率的影响

试验旨在研究钝顶螺旋藻(Sprinulian platensis)和Picochlorum sp.两种微藻培育凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼体效果, 为开发凡纳滨对虾开口饵料提供参考依据。实验对照组D0 投喂商品螺旋藻粉, 实验组D1、D2 分别投喂钝顶螺旋藻和Picochlorum sp., 每组3 个重复,每个重复2 万尾凡纳滨对虾幼体, 在300 L 育苗桶中饲养七天。 结果表明, D0 和D1 组间凡纳滨对虾存活率无显著差异(P＞0.05), 但两组极显著高于D2 组(P＜0.01)。在凡纳滨对虾育苗过程中, 水体总氨氮浓度小于50 umol·L^-1、亚硝酸盐氮浓度小于2 umol·L^-1。钝顶螺旋藻可以保证较高的幼体变态存活率, 可以作为凡纳滨对虾开口饵料新资源开发利用。     

性病后慢性前列腺炎的病原菌及其耐药性研究

目的:探讨本地区性病后慢性前列腺炎的病原菌分布及其对抗生素的耐药性状况.方法:对131例性病后慢性前列腺炎患者的前列腺液细菌培养和药物敏感试验结果进行统计分析.结果:131例性病后慢性前列腺炎患者的前列腺液细菌培养阳性率为86.3%,从113例阳性标本中共分离培养出14种117株细菌,其中以凝固酶阴性表皮葡萄球菌最为常见(45.2%),其构成比显著高于其他病原菌,药物敏感试验结果显示前列腺液分离菌对临床常用的多种抗生素耐药,而对万古霉素、丁胺卡那霉素、呋喃唑酮、多粘菌素B等耐药率相对较低.结论:凝固酶阴性表皮葡萄球菌是性病后慢性前列腺炎的主要病原菌,病原菌检查和药敏试验对临床诊断和治疗性病后慢性前列腺炎具有重要作用.     

养殖大菱鲆溃疡症病原菌的分离鉴定及系统发育分析

2004年夏季山东海阳一带养殖大菱鲆(Scophthalmus maximusL.)暴发溃疡病。症状主要表现为体表病灶部位出血、肌肉溃烂、眼球凸出等,解剖可见鳃丝贫血,肝脏充血,肾脏和胆囊肿大,肠壁充血并呈透明状,从出现发病症状起,大约一周后开始出现死亡。从病鱼体表溃疡部位及内脏分离出优势菌并命名为H1,经人工感染证实H1即为引起本次养殖大菱鲆体表溃疡症的病原菌。对病原菌进行鉴定揭示该菌革兰氏染色阴性,菌体呈短杆状,极生单鞭毛。综合该菌在形态、生理生化、API20NE与API20E自动鉴定结果、16S rDNA同源性等方面的特性,确认H1为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi),该菌对呋喃妥因、菌必治等多种抗生素敏感。哈维氏弧菌是海水养殖鱼类的常见致病菌,但作为养殖大菱鲆的病原菌属首次报道。     

棘胸蛙致病性蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及病理组织观察

试验从患烂皮病棘胸蛙(Quasipaa spinosa)中筛选出3种致病性菌株BS₁、BS₂和BS₃, 对其进行革兰氏染色、形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析, 鉴定上述3株菌均为蜡样芽孢杆菌。同时观察人工感染棘胸蛙的组织病理切片, 发现经病原菌感染的棘胸蛙肝、肺、舌和肌肉的损伤较严重, 表现出明显变性、坏死和炎症细胞浸润, 且在肺部组织内发现嗜碱性包涵体。药敏试验表明, 在所试的7种抗生素中, 致病性蜡样芽孢杆菌对庆大霉素和链霉素高度敏感, 对妥布霉素、卡那霉素和四环素中度敏感, 对氨苄西林和头孢他啶产生抗药性。实验初步探究了棘胸蛙烂皮病的发病机理, 为棘胸蛙烂皮病的防治提供理论依据。     

Interaction of bacteria and red blood cells

The interaction of staphylococci, streptococci, meningococci, enterobacteria, leptospires and other microorganisms with red blood cells is considered. Three forms of the interaction of bacteria and red blood cells are discussed: adhesion, the influence of secretory factors on red blood cells, the action of pathogenic bacteria on hemoglobin. The applied aspects of the interaction of bacteria and red blood cells in the human body are presented in accordance with the results of clinical and laboratory studies.     

慢性化脓性中耳炎患者耳道分泌物的病原菌检测及药物敏感性分析

目的分析慢性化脓性中耳炎(CSOM)患者耳道分泌物的病原菌分布及其药敏情况,为临床合理应用抗菌药物提供参考。方法收集浙江省立同德医院100例(116耳)CSOM患者耳道分泌物标本进行常规病原菌分离、鉴定及药敏试验。结果 116耳中有97耳培养出病原菌,检出率为83.6%。共检出病原菌103株,其中革兰阳性菌占53.4%(55/103),革兰阴性菌占41.7%(43/103),真菌占4.9%(5/103)。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对青霉素和磺胺甲唑/甲氧苄啶耐药性较高,对利福平和莫西沙星敏感性较高,对呋喃妥因和万古霉素完全敏感。铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌对头孢唑啉、氨苄西林、头孢吡肟、头孢曲松、哌拉西林/舒巴坦耐药性均较高,对妥布霉素、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高,对阿米卡星、美罗培南及亚胺培南完全敏感。真菌对氟胞嘧啶、两性霉素B及制霉菌素均敏感,而对酮康唑和氟康唑有一定的耐药性。结论 CSOM患者耳道分泌物中病原菌以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌及肺炎克雷伯菌为主,这4种病原菌对多数常用抗菌药物有较强的耐药性,治疗时需根据细菌培养及药敏分析结果合理选用抗菌药物。     

人体泌尿系微生物感染与耐药及宿主状态分析

目的了解泌尿系感染常见病原细菌和真菌分布、耐药性及宿主相关状态,为理解相关微生物感染影响因素及临床合理用药提供资料和依据。方法对门诊及住院患者中段尿培养分离的179株病原细菌和真菌进行微生物学鉴定和K-B法药敏试验,同时记录门诊和住院的菌株相关的泌尿系感染患者情况。结果泌尿系感染微生物以大肠埃希菌居首位,占62.4%,其次为真菌和肠球菌,各占12.4%、14.0%。药敏结果显示,大肠埃希菌产ESBLs占62.2%;肠杆菌科细菌对亚胺培南、美罗培南的敏感率为100%,其次敏感性较好的为氨基糖苷类阿米卡星、头孢头霉类头孢西丁及第三代头孢类头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶,敏感率均大于80%。革兰阳性球菌万古霉素敏感率为100%,对呋喃妥因敏感率为70.8%。大肠埃希菌感染率与患者的身体状态和行为具有显著的相关性(P<0.01)。结论革兰阴性杆菌是泌尿系感染的主要病原菌,机体免疫状态低下、不洁等生活行为与尿路微生物感染密切相关,但与耐药性不相关。维护机体正常免疫力、注意合适的生活行为,对预防泌尿道病原细菌与真菌的感染十分重要。     

908株烧伤患者病原菌分布特征及耐药性分析

目的：了解本院2011 年-2013 年烧伤患者分离病原菌的分布特征及耐药性,为合理使用抗生素提供依据。方法：对患者创面 分泌物、痰液、血液中的细菌进行分离鉴定和药敏试验,药敏数据分析用WHONET5.6 软件。结果：共分离908 株病原菌,其中最 常见的病原菌依次为：鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌。在革兰阴性杆 菌中,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率较高,铜绿假单胞菌对氨基糖苷类、喹诺酮类的耐药率较低。在肠杆菌科细菌中,未发现 耐碳青霉烯类大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株。在葡萄球菌中,未发现耐万古霉素、利奈唑胺菌株。结论：我院烧伤患者分离的病原 菌以非发酵菌为主,医院应重视对其病原菌耐药性监测,指导临床合理使用抗生素。     

胸腹水培养中的病原菌分布及耐药性分析

目的了解胸腹水培养中病原菌的分布和耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法通过回顾性分析中山市第二人民医院住院部自2011年1月至2013年11月送检的胸腹水标本细菌培养及药敏资料。结果在494份胸腹水标本中共检出47株病原菌,总阳性率为9.5%;其中326例胸水分离出病原菌28例,阳性率为8.59%,胸水培养中革兰阳性菌占67.86%,革兰阴性菌占32.12%,菌种较为分散;168例腹水分离出病原菌19例,阳性率为11.31%,腹水培养中革兰阴性菌占73.68%,革兰阳性菌占26.32%。检出革兰阴性病原菌对氨苄西林和四环素耐药率较高,对阿米卡星、美罗培南和亚胺培南敏感。检出革兰阳性病原菌对氨苄西林、头孢西丁和红霉素耐药率高,对万古霉素、替考拉宁和吗啉噁酮敏感。结论应重视胸腹水标本的细菌学检查,依据药敏试验合理使用抗菌药物,减少细菌的耐药率。     

大鲵细菌性败血症病原分离及生物学特性研究

利用湖南润孚生物工程公司大鲵人工养殖场10尾具有典型症状的患病大鲵,从体表病灶和体内器官肠、胃、肝、脾、肾等共分离得到9株细菌。通过人工感染试验、细菌形态观察和生理生化实验对其进行鉴定,结果显示引起该养殖场大鲵发病的病原为嗜水气单胞菌。通过回归感染试验发现,其中一菌株对大鲵的致病力很强,死亡率达到100%。药物敏感性试验结果显示,菌株对环丙沙星、头孢曲松、头孢他啶、头孢孟多、头孢哌酮、庆大霉素、头孢西丁药物相对比较敏感,而对克林霉素、头孢唑林、甲硝唑和复方新诺明具有耐药性。     

血培养中病原菌的分布及其耐药状况分析

目的:了解血培养中病原菌的菌群分布及其耐药状况.方法:血培养标本用Bact/Alert-120自动血液分析系统和Vitek60鉴定仪进行血培养及鉴定,药敏用K-B法,用Whonet 5软件进行分析.结果:在3 680份血培养标本中分离出细菌348株,阳性检出率为9.4%,病原菌中以革兰阴性杆菌为主共分离出189株,占54.3%,其中主要为大肠埃希菌占15.5%,肺炎克雷伯菌占12.4%;革兰阳性菌138株,占39.7%,主要为凝固酶阴性葡萄球菌占14.9%,金黄色葡萄球菌占12.1%;链球菌占6.6%.血培养中的革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦治疗较为敏感:革兰阳性球菌对万古霉素和替考拉宁较为敏感.结论:肠杆菌科细菌和葡萄球菌是血培养中的主要病原菌,而产ESBLs菌株、MRSA、MRCNS耐药严重,提示应高度重视合理使用抗生素,减少细菌耐药性产生,以提高临床治疗效果.