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提高RAPD稳定性的几点经验与探讨 总被引:8,自引:0,他引:8
随机扩增多态DNA(RAPD)技术自 1990年由Williams和Welsh建立以来 ,因其特异、快速、操作简便、敏感的优点 ,在微生物分型和检测[1 ,2 ] 、生物亲缘关系的鉴定[3] 以及遗传育种[4 ] 中已得到广泛应用 ,其原理与常规PCR基本相同 ,但RAPD采取的引物多为一条随机的十聚寡核苷酸序列 ,这种引物不属于已知遗传位点 ,它能通过PCR介导所有与其互补的基因区段进行扩增 ,产生一系列大小不同的片段 ,并通过琼脂糖凝胶电泳而呈现不同的DNA指纹图。由于RAPD不需要知道模板的序列 ,且引物序列无种属特异性 ,在对遗传… 相似文献
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毛立民 《国外医学:分子生物学分册》1998,20(6):275-278
cDNA示差分析技术是继mRNA差异显示技术之后又一种鉴别差异表达基因的方法。该技术利用双链DNA模板在PCR时呈指数扩增,而单链DNA模板为线性扩增原原理,先用常见的限制性内切酶将实验组与对照组消化成平均长度为256bp的cDNA片段,再用PCR技术使用组的cDNA片段富集,随后进行3次差减杂交去除共有基因,最后扩增实验组中的特异表达的基因。本概述了该技术的原理、基本方法及其应用前景。 相似文献
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关于植物随机引物扩增多态性DNA标记的可靠性问题 总被引:19,自引:1,他引:18
随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)技术是由Williams等[1]首先创立的一种DNA分子标记技术。由于RAPD技术具有快速、简便、通用性好,对DNA的需求量小,质量要求低等优点,一经问世,就受到了广泛的注意,并被成功地用于动物、植物、人和微生物的遗传多样性检测、基因定位、品系鉴定、医学诊断、遗传图谱构建和系统学研究等。在RAPD分子标记的应用研究过程中,人们得出了两种截然不同的结论:一部分人认为RAPD标记的遗传符合孟德尔分离规律,稳定… 相似文献
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应用随机扩增多态DNA(Random amplified polymorphic DNAs,RAPD)技术,对普通小麦细胞质雄性不育系(A)及其保持系(B)线粒体基因组(mitochondrial genome)的指纹图谱进行了分析。共使用引物41个,其中20个引物得到了扩增产物,部分引物扩增结果表现多态性。说明线粒体DNA(mitochondrial DAN,mt,DNA)序列在不育系和保持系之 相似文献
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普通小麦细胞质雄性不育系及其保持系线粒体DNA的RAPD分析 总被引:1,自引:0,他引:1
应用随机扩增多态DNA(RandomamplifiedpolymorphicDNAs,RAPD)技术,对普通小麦细胞质雄性不育系(A)及其保持系(B)线粒体基因组(mitochondrialgenome)的指纹图谱进行了分析。共使用引物41个,其中20个引物得到了扩增产物,部分引物扩增结果表现多态性。说明线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)序列在不育系和保持系之间存在差异,进一步明确了小麦细胞质雄性不育(cytoplasmicmalesterile,CMS)与mtDNA的关系。 相似文献
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扩增大段靶DNA的PCR方法 总被引:3,自引:0,他引:3
扩增大段靶DNA的PCR方法陈尚武,王章(中山大学生命科学学院,广州)PCR和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Taq(Thermusaquaticus)DNA聚合酶的应用以及PCR技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使DNA片段的PCR扩增成... 相似文献
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生物芯片技术及其应用 总被引:5,自引:0,他引:5
生物芯片是指包被在固相载体上的高密度DNA、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵,它是微电子学和分子生物学结合产生的新技术。该技术被评为1998年度世界十大科技进展之一。本文讨论了生物芯片技术的发展、技术参数、相关仪器的发展和在DNA序列测定、基因表达分析、基因分型、基因多态性分析、疾病的诊断、突变分析、药物筛选和微生物的鉴定等方面的应用。 相似文献
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以蚕豆根尖为材料,采用改良方法制备染色体标本,在光镜下切割分离一段大M染色体核仁组织区(NOR)特定区段,通过单一引物--聚合酶链式反应法随机扩同切DNA后,获得近60μgDNA。经琼脂糖电泳分析测定扩增产物分子片段大小介于200-900bp。以地主新标记蚕豆总体DNA。作为探针与扩增产物进行Southern杂交,证实扩增得到的DNA与蚕豆DNA同源,来自微切染色体。部分扩增产物经EcoRI酶切后 相似文献
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RAPD在植物育种上的应用及其技术校正 总被引:1,自引:0,他引:1
RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) ,是在PCR的基础上发展起来的一种DNA多态性检测技术 ,由Willams[1] 和Welsh[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组DNA进行PCR扩增 ,每个RAPD片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经PAGE或琼脂糖凝胶电泳分离和EB染色来检测DNA片段的多态… 相似文献
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野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了提高RAPD方法检测野大豆群体DNA多态性的能力,随机扩增产物用限制性内切酶消化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物。结果发现:1.有的限制性内切酶能够消化野大豆群体DNA的随机扩增产物,有的却不能。2.有的限制性内切酶消化无RAPD个体的扩增产物后能够产生多太性DNA片段,有 内切酶不能产生。3.有的引物的无RAPD个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的DNA片会面 相似文献
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噬菌体6肽随机表面表达文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
体外合成编码6肽的随机DNA片段以及用于随机DNA片段扩增了一对PCR引物,再经PCR扩增,BgII酶切扩增产物,获得编码6肽的随机DNA克隆片段,并利用已构建的噬菌体表面表达载体,经抗性和插入复活筛选,获得1.6×10^8个独立克隆,构成库的克隆经酶切,PCR扩增,斑点杂交,序列测定,亲和素富集等方法的综合鉴定和评定,以及6肽随机克隆体外增殖和表达特性观察,结果均表明,我们成功构建了编码6肽的 相似文献
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DNA分子标记技术及其在植物遗传多样性研究中的应用 总被引:24,自引:0,他引:24
本文阐述了DNA限制性片段长度多态性、DNA指纹图谱、单位点小卫星、单位点微卫星及随机扩增多态DNA等主要的DNA遗传标记技术的基本原理和方法.综述了不同DNA标记的优缺点及其在植物遗传多样性研究中的应用前景. 相似文献
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用PCR—RFLP方法研究藏族HLA0—DQA1和—DQB1基因多态性 总被引:4,自引:1,他引:3
应用目前HLA研究领域中成熟的、有效的PCR-RFLP基因分型技术,从DNA水平对藏族健康群体进行了HLA-DQA1(49人)和-DQB1(49人)基因分型,这在国内外属首次。所采用的PCR-RFLP基因分型技术是在HLA-DQA1和-DQB1各等位基因全部序列已知的情况下,对其第2个外显子碱基序列扩增进而进行RFLP分析的方法。这种方法得到的RFLP的所有片段都是已知序列,因而精确度很高,同时为 相似文献
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任意引物PCR及其应用研究进展 总被引:5,自引:0,他引:5
任意引物PCR技术又称为随机扩增多态性DNA技术,它是在PCR技术基础上发展起来的一项分子检测技术。它具有简便、快速,一套引物可用于多个物种的分析,不需预知分析对象的核酸序列,可以显示差异表达基因等特点,已广泛应用于病原微生物的分型鉴定、物种亲源关系分析、遗传育种研究和特异表达基因的克隆与鉴定等方面。 相似文献
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香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析 总被引:10,自引:1,他引:10
运用随机扩增多态性DNA技术对源于两个香菇双核菌的孢子单核体,原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组DNA多态性分析,用9个随机引物共扩增出116条DNA片段,其中82.5%具有多态性,综合分析9个随机引物的扩增谱带,可将所有供试亲本单核本清楚地工,且单聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外,用两个双核亲本菌株的各4个不同酱 孢子单核体两两酱所得的所有杂交组合,也均可与双核亲本菌株明确地区分 相似文献
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采用引物延伸预扩增方法,可普遍提高微量模板DNA的考贝数,便于进行基因分析时克服标本时少、来源困难的制约,采用常规扩增、检测248bp的DYZ1片段体系为观察对象,其最小模板量需1.5ng/20μl体系。以15个碱基随机寡核苷酸为引物,对最小模板量进行预扩增,再以其产和1/10为模板,特异扩增DYZ1片段。进行了相对定量分析,判断源模板DNA拷贝数增加的程度。结果1.5ng男性DNA,经随机扩增后 相似文献
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利用RAPD技术对木耳属菌株进行分类鉴定的研究 总被引:23,自引:0,他引:23
利用RAPD技术对木耳属不同种和种内不同菌株进行了分子鉴定。结果表明,在供试的26个随机引物中,有10个引物可扩增出清晰、稳定的DNA带型,其中引物S4和S6与供试木耳属菌株的基因组DNA结合位点少而保守,扩增图谱具有种的特异性,可用于种的快速准确鉴定;其综随机引物的扩增DNA多态性较强,可用于种内不同菌株的鉴定;聚类分析表明,在75%相似水平下,可将供试的木耳属菌株分成四大类,其中有三大类各代表 相似文献
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分子生物学技术在环境微生物监测中的应用 总被引:13,自引:0,他引:13
随着环境生物学的发展,对环境中复杂的混合微生物群落进行及时监测和准确鉴定变得越来越重要。但是传统的研究方法因为检测速度慢、准确性差等缺点,在某种程度上已经不适应于这方面的研究;而以PCR(polymerase chain reaction)技术为主的一些分子生物学技术因具有快速、灵敏的特点,正被越来越多的人所采用。目前,这些分子生物学技术已能在rDNA测序和有关结构基因分析的基础上监测和定量复杂的混合微生物群落中的一些特殊的微生物,而且其中许多技术都是在PCR扩增的基础上来检测混合微生物群落中原本… 相似文献
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RAPD技术在水稻上的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
RAPD技术在水稻上的应用李文海(浙江农业大学核农所,杭州310029)1RAPD的原理及特点RAPD是随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)的简写,系1990年由美国科学家Wiliams和Welsh几乎... 相似文献