脱落酸抗体的抗独特型抗体的制备与鉴定

用ABA多克隆抗体(Ab_1)以金黄色葡萄球菌菌体(SPA)作为载体,免疫家兔,制备的抗独特型抗体(Ab_2)初步纯化后用ELISA试验鉴定其特异性的结果表明,该抗独特型抗体具有良好的特异性,能阻断ABA抗体对ABA的结合反应,并与ABA结合蛋白结合,暗示其有模拟抗原的作用。 Jerne的免疫网络学说认为,特异性抗体(Ab_1)可变区中的独特型决定簇(Id)可诱导抗独特型抗体(Ab_2)的产生,Ab_2中的一部分可以模拟抗原的作用。Sege和Peterson提出,     

布鲁氏菌抗独特型抗体的研究

在建立布鲁氏菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有保护作用的单抗A7免疫家免制备抗独特型抗体(简称二抗)。经阻断试验和竞争抑制试验证实,该二抗具有抗原“内影象”。将其提纯后配制成甘油佐剂苗免疫豚鼠和小白鼠．检测结果表明：免疫豚鼠和小白鼠产生了布鲁氏菌凝集抗体;免疫小鼠的循环T ANAE-细胞百分数明显高于对照组;免疫豚鼠在免疫后4个月时强毒菌株攻击有79．2％获得保护。因此认为,该二抗不仅具有抗原的。内影象”结构,而且具有良好的免疫原性,可供作疫苗用。     

抗独特型抗体研究的新进展

独特型是存在于抗体分子某些部位上的一种特殊基因。该基因具有抗原性,能在自体或异体内诱导出针对该基因的特异性抗体——抗独特型抗体。近年大量的动物实验证明,抗独特型抗体可以作为新一代免疫制剂,用以弥补现有疫苗的不足。同时,它还可用于癌症和自身免疫性疾病的治疗。     

糖类抗原的抗独特型抗体疫苗

糖类抗原以其免疫性较弱,常规疫苗的免疫效果一般欠佳,特别是对新生儿的免疫更是如此。糖类抗原又以其本身结构上的复杂人工合成较为困难,也不能通过重组DNA技术由基因工程直接制得。为此,不少免疫学家都在探寻有效的抗糖疫苗。本文作者长期从事糖类抗原的抗位特型抗体研究,认为目前的研究为寻求一条糖类抗原的抗独特型抗体疫苗奠定了基础;列举了细菌的果聚糖,大肠杆菌K13多糖,克氏锥虫的表面糖蛋白, A组链球菌糖,脑膜炎奈瑟氏菌C组多糖,以及肿瘤相关抗原上的糖表位等的研究材料。本文为1991年出版的抗独特型抗体疫苗一书中的一章。     

一种抗AIV共有独特型抗体具有AIV血凝素分子的内影象

用纯化的鸡抗禽流感病毒(AIV)IgG作免疫原,通过单克隆抗体技术制备出1株分泌针对鸡抗AIV和兔抗AIV共有独特型抗体的杂交瘤细胞。竞争抑制试验、特异性检验和诱导产生血凝抑制抗体的功能实验证明,此抗体具有AIV血凝素分子的内影象。     

抗EHFV的独特型抗体在大鼠体内诱导免疫应答的研究

本文介绍用流行性出血热（EHF）病毒J10株制备单克隆抗体（McAb),以及用7个McAb免疫家兔,使其产生抗EHF病毒McAb的抗体即独特型抗体（Ab2）。Ab2能在体外同出血热病人恢复期血清和EHF病毒免疫的兔血清发生特异性结合。再经EHF－McAb亲和层析法分离提纯Ab2,免疫BALb/c小鼠,将所获得的免疫血清（Ab3）用荧光和ELISA分别加以测定,结果表明,抗－抗独特型抗体可在体外识别EHF病毒,而不能同病病人恢复期血清发生结合,从而支持免疫网络学说,可能为我们提供一种新型的抗原来源途径。     

抗EHFV的独特型抗体在小鼠体内诱导免疫应答的研究

本文介绍用流行性出血热（EHF）病毒J10株制备单克隆抗体（McAb）,以及用7个McAb免疫家兔,使其产生抗EHF病毒McAb的抗体即抗独特型 抗体（Ab2).Ab2能在体外同出血热病人恢复期血清和EHF病毒免疫的兔血清发生特异性结合。再经EHF－McAb亲和层析法分离提纯Ab2,免疫BALb/c小鼠,将所获得的免疫血清（Ab3）用荧光和ELISA分别加以测定。结果表明,抗－抗独特型抗体可在体外识别EHF病毒,而不能同病病人恢复期血清发生结合,从而支持免疫网络学说,可能为我们提供一种新型的抗原来源途径。     

一种抗AIV共有独特型抗体具有AIV血凝素分子的内影象

用纯化的鸡抗禽流感病毒(AIV)IgG作免疫原,通过单克隆抗体技术制备出1株分泌针对鸡抗AIV和兔抗AIV共有独特型抗体的杂交瘤细胞.竞争抑制试验、特异性检验和诱导产生血凝抑制抗体的功能实验证明,此抗体具有AIV血凝素分子的内影象.     

自身抗独特型抗体的产生及其在免疫应答调节中的作用

自身抗独特型抗体(auto—ald)广泛存在于机体对多种抗原的免疫应答过程中,并通过与独特型(Id)相互作用,参与体液和/或细胞免疫应答的调节。auto-aId的调节作用包括:(1)通过抑制B细胞合成相应的Id抗体或激活Id特异性T细胞,后者作用于效应细胞,而反馈性抑制机体对起始抗原的免疫应答(向下调节);(2)内影像auto-aId模拟抗原,促进相应Id的表达(向上调节)。其调节作用在多数情况下对机体有利,如维持体内Id—抗—Id网络的稳定性,促进某些自身免疫病的恢复等。但在某些情况下则对机体有害,甚至导致某些受体自身免疫病的发生。     

噬菌体呈现技术制备结肠癌抗独特型抗体

 以纯化的鼠抗人结肠癌细胞单克隆抗体 (简称单抗 )MC5与钥孔血蓝素 (KLH)的交联物经腹腔免疫Balb c小鼠 ,取脾分离mRNA .RT PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因片段 (VH 和VLcD NA ,大小分别约为 340bp和 32 0bp) ,二者经linkerDNA连接形成ScFv(singlechainvariablefragment)DNA(约 75 0bp) .将ScFvDNA与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体ScFv文库 .以单抗MC5对ScFv文库进行 4轮亲和筛选后 ,随机挑取 80个克隆经酶联免疫吸附实验 (ELISA)筛选出 2 2个呈现ScFv形式抗独特型抗体(抗 IdScFv)的噬菌体单克隆 .竞争抑制实验表明 ,在 2 2个阳性克隆中有 4个克隆所呈现的抗 IdScFv属β或γ型 .针对单抗MC5的噬菌体呈现型抗 IdScFv的制备 ,为筛选新的结肠癌重组抗 Id瘤苗候选分子奠定了基础     

经蛋白A连接于琼脂糖的单克隆抗体亲和层析柱用于抗独特型抗体的纯化

 以Sepharose CL-4B-Pro A吸附胃癌单克隆抗体(McAb)PD4,继之以交联剂二甲基庚二亚胺二盐酸盐(dimethyl pimelimidate dihydrochloride)处理,形成亲和介质(柱Ⅰ)。该亲和介质用于纯化抗PD4独特型抗体(aIdAb)具有明显的优点。与Sepharose CL-4B-PD4(柱Ⅱ)相比,前者的结合容量为后者的1.78～1.94倍。采用柱Ⅰ纯化的aIdAb,当其与McAb PD4的分子比分别为1:1及4:1时可50％或100％地抑制McAb PD4与靶细胞的结合,但采用柱Ⅱ获得的aIdAb,只有当分子比达到2:1及8:1时,才能达到同等的抑制效应。这可能是由于Pro A与McAb PD4的Fc片断结合,使后者的Fab端得以充分暴露,因而有更多的机会与aIdAb结合。     

抗独特型抗体与T细胞记忆的关系

记忆T细胞作为人体免疫系统中的一个组成部分,在免疫应答中发挥着至关重要的作用,因此利用抗独特型抗体制备诱导产生记忆T细胞的疫苗是免疫学领域的一个重要方向。抗独特型抗体Fab段具有与特异性抗原相似的抗原决定簇的结构,其作为抗原替代物制备的疫苗所激发机体产生的记忆T细胞具有特异性强和安全性高的特点,成为一种比较理想的疫苗.就抗独特型抗体与T细胞记忆之间的联系及其应用效果作一简要综述。     

HBV感染中抗-(抗-HBs)独特型抗体的研究

1.75％聚乙二醇(MW6000)沉淀血清免疫复合物后,采用ELISA法检测上清中抗独特型抗体〔抗-(抗-HBs)〕。56例急性HBV感染患者血清IgM抗-(抗-HBs),第一周检出率最高(60.00％),1个月后大部分阴性,IgG抗-(抗-HBs)维持时间略长。IgM抗-(抗-HBs)较HBsAg/IgM和IgM抗-HBc消失早,将有利于急性HBV感染的诊断。27例CAH和29例CPH,IgM和IgG抗-(抗-HBs)阳性率约为38～52％,两型间无显著差异(p>0.5)。3例无症状HBsAg携带者和12例HBsAg血清疫苗接受者血清,抗-(抗-HBs)阴性。115例HBV感染者中,IgM抗-(抗-HBs)阳性者HBsAg阳性率(93.62)显著高于IgM抗-(抗-HBs)阴性者(52.31％),p<0.005;反之,HBsAg阳性血清IgM抗-(抗-HBs)阳性率(55.5S％)显著高于HBsAg阴性血清(9.68％),p<0.005;IgM抗-(抗-HBs)阳性和阴性血清的HBVDNA阳性率有显著差异(p<0.025),IgG反应到类似的结果。以上资料表明,抗-(抗-HBs)提示了一些HBV感染患者体内可能存在一种缺陷的反馈机制,导致抗-HBs产生不足而容许更活跃的HBV复制。本文证明了HBV感染患者血清中存在的抗-(抗-HBs)可能是共同决定簇“a”特异性的,还表明抗-HBs人抗-Id反应可能被纯化人血清HBsAg抑制,提示人抗-(抗-HBs)与抗-HBs结合的位点可能在HBsAg与抗-HBs结合位点内或在其附近,这和一些动物抗-(抗-HBs)的研究结果是一致的。     

肺炎支原体抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定

目的制备肺炎支原体(M.pneumonia)抗独特型卵黄抗体(vitelline Ab2),鉴定其生物学特性,探讨其作为动物疫苗的潜在应用价值。方法首先制备兔、小鼠抗肺炎支原体抗体(Ab1),筛选出对肺炎支原体有免疫中和性的兔抗体和小鼠抗体,再用兔抗体免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用蒸馏水稀释和酸化提取抗独特型卵黄抗体。用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体。用ELISA检测肺炎支原体抗独特型卵黄抗体(Ab2)的效价、质量浓度和特异性。用竞争抑制试验和动物免疫检测卵黄Ab2β。结果兔抗肺炎支原体抗体的效价为1×10~(-6),Ab1的效价为1×10~(-4)～1×10~(-5);以上抗体均只和肺炎支原体发生免疫反应,不和解脲支原体发生免疫反应;它们和肺炎支原体混合后能中和肺炎支原体的活性,使其不能在条件培养基生长。Ab2效价为1×10~(-5),质量浓度为8 mg/mL。该抗独特型卵黄抗体只和Ab1发生免疫反应,不和小鼠抗解脲支原体抗体发生免疫反应。该Ab2和Ab1结合能被肺炎支原体竞争抑制,且Ab2能诱导小鼠产生肺炎支原体抗体(Ab3),该Ab3能和肺炎支原体发生免疫反应。结论成功制备了特异性强、效价高的β型Ab2,具有作为动物肺炎支原体疫苗的潜在应用价值。     

卵巢癌抗独特型单链抗体3D_5ScFv的高效表达

对 3D5卵巢癌抗独特型单链抗体进行原核系统的高效表达 .采用DNA重组技术 ,将 3D5ScFv克隆到原核表达载体pTMF中 ,重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ;IPTG诱导表达 ,SDS PAGE鉴定蛋白质的分子量约为 2 8kD ;通过直接ELISA、竞争抑制实验和Western印迹分别检测其活性 .3D5ScFv以包涵体的形式获得高效表达 ,占菌体总蛋白 36 % ,变性复性后蛋白的纯度大于 90 % ,表达蛋白能与卵巢癌抗体OC12 5特异性结合 ,并能有效抑制卵巢癌抗原CA 12 5与卵巢癌抗体OC 12 5的特异性的结合 .3D5ScFv在原核系统中获得了高效表达 ,并具有较好的活性 ,为抗独特型抗体的人源化改造提供必要的元件     

卵巢癌抗独特型单链抗体的人源化——抗独特型微抗体的构建与表达

为了降低人抗鼠抗体反应 ,获得满意的免疫原性 ,将模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体人源化 .采用重叠PCR和基因工程的技术 ,将 6B11ScFv基因的轻链和重链颠倒 ,成为 6B11VL VH.再与人IgG1铰链区和CH3区的基因进行融合 (VL VH CH3) ,构建抗独特型微抗体的原核表达载体 .转化E .coliBL2 1(DE3)后用IPTG诱导表达 .经SDS PAGE分离显示 ,在 5 0kD左右处有一诱导蛋白带 .不连续非变性凝胶电泳显示 ,表达产物分子量为 10 0kD左右 .采用ELISA、竞争抑制实验、West ern印迹对其进行活性测定 .结果表明 ,人源化的抗独特型微抗体具有特异性双价结合卵巢癌单克隆抗体COC16 6 9和识别人免疫球蛋白IgG1的活性 ,成功地将鼠源的scFv的人源化     

乙肝患者抗HBs独特型抗体特异性免疫复合物的检测与意义

根据用终浓度分别为35.0g/L和17.5g/L聚乙二醇沉淀循环免疫复合物,去除游离抗HBs-Ab_2,再以胰蛋白酶解离复合物的原理,建立了检测抗HBs-Ab_2-ICs的ELISA法。结果表明,38例急性乙型肝类和83例慢性活动性乙肝患者的IgG、IgM类抗HBs-Ab_2-ICs总阳性率分别为13.2％(5/38)和18.1％(15/83)。IgG、IgM类抗HBs-Ab_2-ICs检出率无显著差异(P>0.05)。实验证实乙肝患者体内存在含抗HBs-Ab_2-ICs。提示抗HBs-Ab_2尚可与抗HBs结合,抑制其中和HBV的作用而利于HBV复制。     

鼠单克隆抗-HBs的单克隆抗独特型抗体的制备及其免疫原性的研究 Ⅱ.Ab_2—1的免疫原性研究

用一株单克隆抗独特型抗体细胞株,Ab_2-1免疫4只BALB/c小鼠和2只家兔。每只小鼠每次经腹腔接种100#gAb_2-1,共接种4次;每只家兔每次经皮下注射1mgAb_2-1,共注射4次。经免疫的小鼠和家兔都产生了抗-HBs,经两种竞争性抑制试验证实,这些抗-HBs是特异性的。小鼠抗-HBs滴度为2~(-6)至2~(-9);家兔抗-HBs滴度从2~(-10)至2~(-12)。这些资料提示:单克隆抗独特型抗体能模拟HBsAg,具有类似HBsAg的免疫原性。