表达尼帕病毒G囊膜糖蛋白重组牛痘病毒的研究

采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。rWR-NiV-G感染NiV敏感的BHK细胞系,并与NiV融合蛋白F共同表达,可形成强烈细胞融合现象。rWR-NiV-G感染免疫BALB/c小鼠,可诱导显著的NiV G蛋白特异体液免疫反应。以原核表达NiV G蛋白片段为包被抗原,间接ELISA检测rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体,具有良好的敏感性和特异性。同时,rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明,重组牛痘病毒表达的NiV G蛋白有良好的免疫原性和生物学活性功能,为进一步深入研究NiV G蛋白生物学功能、免疫原性及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。     

尼帕病毒F糖蛋白在重组牛痘病毒中的表达及鉴定

尼帕病毒(NiV)F蛋白在病毒侵入细胞和诱导中和抗体等方面具有重要作用。通过over-lapping PCR合成密码子优化的F蛋白基因构建了表达NiV F蛋白的重组牛痘病毒(WR株)rWR-NiV-F。利用兔抗NiV血清为检测抗体,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了F蛋白在重组病毒感染细胞中的表达。SDS-PAGE和Western blot检测证明重组蛋白F0被裂解为F1和F2。以rWR-NiV-F感染瞬时转染共表达NiV受体结合囊膜糖蛋白G的BHK细胞,可诱导细胞膜融合及合包体形成,证明该重组病毒表达F蛋白保持良好的抗原性及生物学活性,为NiV诊断及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。     

牛痘病毒感染人巨噬细胞基因表达谱的RNA-Seq分析

[目的]利用RNA-Seq,分析人巨噬细胞在牛痘病毒(VACV)感染前后基因表达的变化,探索牛痘病毒与宿主细胞相互作用的机制.[方法]用牛痘病毒感染人巨噬细胞,采用RNA-Seq比较感染组和对照组的差异表达基因,并进行KEGG、GO以及STRING网络分析.[结果]感染组与对照组相比,筛选出显著性差异表达基因4796个...     

重组牛痘病毒介导的微小基因表达产物OVA257—264在真核细胞中的抗原呈递效率

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的诱导能力。结果表明四聚体的构建是成功的 ,进一步用已被重组牛痘病毒感染的L92 9 Kb 细胞作为抗原呈递细胞以诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的产生 ,并对活化后特异性CTL进行检测 ,从胞外IFN γ的分泌情况看 ,诱导后的整个群体细胞发生了活化与增殖 ,H 2Kb OVA四聚体对特异性T细胞进行的结合分析与经典的细胞毒效应相一致。可见 ,重组牛痘病毒介导的微小基因产物OVA2 57～ 2 64不仅能为MHC I类分子的合成提供更有效的肽来源 ,且能更有效诱导特异性CTL的产生。     

牛痘病毒/疱疹疫苗在小鼠体内起作用

<正> 在今后几年内还不能期望疱疹疫苗在市场上出现,但是由美国国家卫生研究院(简称NIH)的一个研究组研究的,一个结合有疱疹病毒的一个基因的活牛痘病毒来看是有希望的。牛痘病毒习惯上用作天花的预防注射,但在研制防治其他疾病方面的疫苗亦越来越引起     

关于新冠病毒疫苗研发的思考

新冠病毒(SARS-CoV-2)疫苗能否研发成功引起全社会关注。目前,大多数新冠肺炎病人可以自然康复,没有明确证据证明新冠病毒可以长期在体内潜伏,而且康复的患者血清可以治疗新冠肺炎病人,这些都预示着新冠病毒疫苗研发可能会成功。另一方面,新冠病毒疫苗研发也可能失败,主要原因是疫苗可能引起抗体依赖增强(antibody-dependent enhancement, ADE),即疫苗诱导的抗体可能增强病毒的感染能力。另外,疫苗也可能引起免疫性肺损伤。当前,疫苗的种类很多,包括传统型的疫苗和新型疫苗。从理论上来说,所有已经有的疫苗种类和技术都可以尝试用在新冠病毒疫苗的研究上。     

诺如病毒疫苗研究概况

诺如病毒（norovirus,NoV）是引发急性胃肠炎疾病的主要病原体之一。NoV易发生突变产生多种毒株,对人类健康造成严重威胁。由于缺乏成功的动物模型,抗NoV药物和疫苗的后续评价受到了限制,目前尚没有上市的疫苗用于NoV的预防。对NoV疫苗的研究进展进行了综述,重点阐述了病毒样颗粒（virus like particles,VLP）疫苗、病毒载体疫苗和基于P颗粒疫苗的研究现状和发展前景,以期为NoV疫苗的研发提供新思路。     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制上的应用

痘苗病毒作为真核表达载体已广泛应用于外源基因的表达,并日益受到重视,本文就痘苗病毒的生物学特性,重组痘苗病毒的构建原则,外源基因在重组痘苗病毒中的表达情况及重组痘苗病毒作为活疫苗的优缺点等方面作一概括性综述。     

研制狂犬病病毒疫苗的新途径

由于人们对狂犬病病毒的病原性和免疫原性了解尚不够透彻,因此进一步提高常规疫苗的免疫原性和降低成本还面临着许多问题。例如,干扰素(IFN)在抗狂犬病免疫中有何作用?一旦病毒进入神经系统,抗体是否还具有保护作用?狂犬病毒糖蛋白(Rabies Virus Glycoprotein, R. G)是不是唯一的保护性抗原?暴露前和暴露后两种疫苗的发展前景如何?近年来     

叩开现代免疫学大门--琴纳牛痘接种术的发明

天花是由天花病毒引起的烈性传染病 ,患者全身发炎、长满脓疮 ,绝大部分患者在发病后的半个月内死亡 ,侥幸逃生者也要留下一脸麻子。欧、亚、非三大洲都曾几度流行成疫 ,历史上充满了天花大规模流行的悲惨记录。 16世纪欧洲天花蔓延 ,发病人数每年以 10万计 ,病死率高达 2 5 %～ 4 0 %。直到18世纪 ,当时总人口仅为 4 0 0 0万的欧洲 ,每年死于天花的竟达 4 4万 ,其中尤其是 1～ 5岁的儿童 5 0 %～70 %死于该病 ;18世纪中叶一年 ,天花流行得很厉害 ,仅在俄国就死了 2百万人。面对天花 ,人类几乎是束手无策。若干世纪以来 ,天花的广泛流行使人…     

寨卡病毒新型疫苗的研究进展

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染可造成胎儿小头症及成人格林巴利综合症,世界卫生组织已将其定为世界公众健康紧急事件。因此急需要发展新型Zika疫苗。本文简要介绍寨卡病毒生物学性状、流行病学、临床表现,并重点对寨卡病毒3种新型疫苗(DNA、病毒载体、mRNA疫苗)研究进展进行综述与应用展望。     

人类免疫缺陷病毒疫苗的研究进展

人类免疫缺陷病毒疫苗是控制艾滋病的最佳方法,动物模型证实该病毒疫苗是可行的。人类免疫缺陷病毒中和抗体可达到足够高的水平以预防该病毒感染,但有型特异性,人类免疫缺陷病毒特异性细胞毒T淋巴细胞不能单独预防该病毒感染,但能将病毒血病控制在低水平,目前,人们研究重点集中于病毒特异性抗性体和T细胞反应。现有疫苗尚不能诱导对原发性病毒株具有广泛中和能力的抗体。然而,重组痘病毒疫苗和DNA疫苗提示细胞毒T淋巴细胞反应对来自不同进化分支的原发病毒株有广泛的交叉反应力,人们需找到新的免疫原来诱导中和抗体,以取得最佳细胞毒T淋巴细胞反应。     

牛痘病毒对发展新疫苗的作用

<正> 重组DNA技术、肽化学和免疫学的进展为开发新疫苗提供了有力的工具。而完成这些工作还依赖于体液免疫和细胞免疫靶子的鉴别及它们在保护机体中所起作用的评价。由于牛痘病毒可以作为载体表达外源基因,对有效靶抗原的测定具有重要作用。牛痘病毒基因表达水平的提高使得在哺乳类细胞中繁殖牛痘病毒而制备蛋白亚单位疫苗成为可能。能否用重组牛痘病毒作为一种活疫苗,即象消灭天花所使用的牛痘疫苗那样应用,仍是目前争论的焦点。 重组牛痘病毒构建 牛痘病毒基因组约为20万碱基对,具有单一调控序列的病毒编码转录系统,无RNA     

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制中的应用

痘苗病毒载体在病毒疫苗研制中的应用孙劲（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）随着分子生物学技术的发展及日臻完善,病毒疫苗的制备出现了一些新的动向,继亚单位疫苗、多肽疫苗和抗独特型抗体疫苗之后,又出现了重组病毒活疫苗,即应用基因工程技术,以...