一氧化氮在防止心肌肥厚反应中的作用及其机制

本工作从整体和细胞水平探讨一氧化氮（ＮＯ）在防止心肌肥厚反应中的作用及其机制。压力超负荷心肌肥厚大鼠左心室肌ＮＯ含量减少。内源性ＮＯ可能通过非ｃＧＭＰ依赖机制减轻压力超负荷引起的心肌肥厚。在培养的新生大鼠心肌细胞中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）、内皮素－１（ＥＴ－１）和去甲肾上腺素（ＮＥ）通过各自的受体和偶连的Ｇ蛋白,一方面引起心肌细胞肥大;另一方面抑制一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性和ＮＯ生成。心肌细胞和非心肌     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo …

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮（ＮＯ）对血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）和内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的心肌细胞肥大和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定心肌细胞总蛋白含量（作为心肌细胞肥大的指标）;用基因特异性引物和ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ一步法进行逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测大鼠心肌细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达（以ＧＡＰＤＨ为内标）。结果显示,ＡⅡ和ＥＴ－１分别作     

蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞——氧化氮合成中的作用

实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠内肌细胞亚硝酸盐（ＮＯ２）和硝酸盐（ＮＯ３）总量（ＮＯ２／ＮＯ３）,反映心肌细胞一氧化氮（ＮＯ）生成情况,观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对凡肌细胞ＮＯ生成的及其蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在该效应中的作用。结果显示：ＡｎｇⅡ可减少心肌细胞ＮＯ的含量,并具有明显的剂量－效应关系;ＡｎｇⅡ受体拮抗剂ｓａｒａｌａｓｉｎ可明显抵制ＡｎｇⅡ对ＮＯ生成的影响;Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）明     

止血带休克时主动脉舒缩功能与一氧化氮合酶活性的关系

目的：为探讨止血带休克发生过程中血管舒缩功能的改变及意义,以及与血管一氧化氮（ＮＯ）产生的关系。方法：采用Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ方法复制大鼠止血带休克（ＴｏＳ）模型,分别测定对照组和ＴｏＳ组大鼠血浆中,主动脉孵育液中亚硝酸盐（ＮＯ－２）含量及主动脉组织中ｃＧＭＰ含量,一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性,同时观察了主动脉血管环舒缩功能的改变。结果：ＴｏＳ大鼠离体主动脉环对去甲肾上腺素的反应性降低;其血浆和主动脉孵育液中ＮＯ－２明显增加;主动脉ｃＧＭＰ含量增多;主动脉血管总ＮＯＳ活性加强,其中主要是诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）活性增加。结论：ＴｏＳ大鼠主动脉ＮＯＳ活性加强,产生ＮＯ增多,造成血管低反应性。     

银杏叶提取物和槲皮素对心肌细胞肥大的防治作用及其机制

目的：探讨银杏叶提取物（EGb）及其单体槲皮素（Que）对心肌细胞肥大的防治作用及其机制。方法：采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型;分别在培养液中加入EGb（40／μg／ml）或Que（4／μg／m1）,观察Lowry法测定心肌细胞蛋白质含量的变化;测定SOD活性和MDA含量观察心肌细胞氧自由基代谢的变化;Western blot方法检测心肌细胞p-ERK1／2、p-JNK和p-P38蛋白表达;应用RT-PCR法检测心肌细胞c-fos mRNA表达。结果：①EGb和Que能明显抑制AngⅡ引起的心肌细胞总蛋白质含量的增加;②EGb和Que可显著提高SOD活性,降低MDA含量;③AngⅡ诱导的心肌细胞p-ERK1／2、p-JNK和p-P38表达均明显增强,Que能明显抑制AngⅡ诱导的p-JNK表达;④EGb、Que、可降低AngⅡ诱导心肌细胞c-fos mRNA表达的上调水平。结论：EGb和Que对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大有明显的防治作用,Que的作用机制可能与ROS／JNK／c-fos信号通路有关。氧化应激参与了心肌肥大的发生发展过程。     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞c-fos表达和蛋白质合成的作用

本实验在培养新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ对心肌细胞ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达和蛋白质合成的影响。结果显示,血管紧张素Ⅱ能诱导ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达,增加蛋白质含量,并呈量－效关系,还能加速＾３Ｈ－亮氨酸的掺入速度。上述这些作用可血管紧张素Ⅱ受体拮抗ｓａｒａｌａｓｉｎ所阻断,提示这些作用是受体介导的。     

一种兼具NO和ACEI性质的新药斯诺普利的研究设计

一氧化氮（ＮＯ）在生物体内以巯－亚硝基类化合物的形式储存和释放。ＲＳＮＯ生物半衰期（ｔ１／２）生物半衰期（ｔ１／２）长,化学性质稳定,并保留了载体ＲＳ的生物功能。在内源性ＲＳＮＯ构效关系的启发下,我们把卡托普利（Ｃａｐ）的ＳＨ改造成Ｓ－ＮＯ,即斯诺普利,ＣａｐＮＯ具有Ｃａｐ的作用和ＮＯ的特性：（１）直接舒张离体血管,对抗血管紧张素Ⅱ,肾上腺素的缩血管作用;（２）在整体动物,ＣａｐＮＯ显著扩张血管,     

碱性成纤维细胞生长因子增加大鼠血管一氧化氮及内皮素的生成

研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和ＷＫＹ大鼠血管一氧化氮（ＮＯ）及内皮素生成的影响。取ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠主动脉制成血管薄片,以１０、１００ｎｇ／ｍｌ ｂＦＧＦ（终浓度）分别孵育６ｈ,测定血管组织中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及孵育液中亚哨酸盐（ＮＯ２）和内皮素含量。结果显示：ＳＨＲ主动脉组织ＮＯＳ活性较Ｗ     

急性压力超负荷后心肌cAMP与肾素血管紧张素系统活化的关系

为阐明急性压力超负荷后心肌细胞内ｃＡＭＰ浓度升高和心肌肾素血管紧张素系统活化之间是否存在内在因果联系,用腹主动脉缩窄的方法建立急性压力超负荷大鼠模型。发现在术后１ｈ心肌组织中血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）ｍＲＮＡ及蛋白表达均显著增加,ＡＣＥ活性及血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量也明显升高,并在高水平。同时,心肌组织ｃＡＭＰ含量于术后０．５ｈ明显增加,术后５ｄ时达峰值,术后３０ｄ降至正常。在心肌细胞培养的基     

脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达及细胞增殖的影响

应用ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查脂多糖（ＬＰＳ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因表达及ＮＯ合成的影响,用３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＬＰＳ对细胞ＤＮＡ合成的影响．结果表明,ＬＰＳ在诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和促进ＮＯ合成的同时,抑制ＶＳＭＣＤＮＡ合成．证明ＬＰＳ的作用与其浓度和作用时间有关     

尾加压素对新生大鼠心肌细胞一氧化氮合成的影响

应用半定量逆转录－多聚酶链反应法,观察尾加压素（urotensin Ⅱ,UⅡ）对培养的新生SD大鼠心肌细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS)mRNA表达的影响,并测定UⅡ对心肌细胞内一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS)活性和一氧化氮（nitric oxide,NO)释放的影响。结果显示：UⅡ抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达、抑制NOS的活性及NO释放;0.1μmol/L浓度的UⅡ呈时间依赖性抑制心肌细胞NOS的活性及NO生成。上述实验结果提示UⅡ的心血管作用可能与NO合成系统有关。     

HMG-CoA reductase inhibitor fluvastatin prevents angiotensin II-induced cardiac hypertrophy via Rho kinase and inhibition of cyclin D1

HMG-CoA reductase inhibitors, so called statins, decrease cardiac events. Previous studies have shown that HMG-CoA reductase inhibitors inhibit cardiomyocyte hypertrophy in vitro and in vivo by blocking Rho isoprenylation. We have shown that the G1 cell cycle regulatory proteins cyclin D1 and Cdk4 play important roles in cardiomyocyte hypertrophy. However, the relation between Rho and cyclin D1 in cardiomyocyte is unknown. To investigate whether HMG-CoA reductase inhibitors prevent cardiac hypertrophy through attenuation of Rho and cyclin D1, we studied the effect of fluvastatin on angiotensin II-induced cardiomyocyte hypertrophy in vitro and in vivo. Angiotensin II increased the cell surface area and [(3)H]leucine uptake of cultured neonatal rat cardiomyocytes and these changes were suppressed by fluvastatin treatment. Angiotensin II also induced activation of Rho kinase and increased cyclin D1, both of which were also significantly suppressed by fluvastatin. Specific Rho kinase inhibitor, Y-27632 inhibited angiotensin II-induced cardiomyocyte hypertrophy and increased cyclin D1. Overexpression of cyclin D1 by adenoviral gene transfer induced cardiomyocyte hypertrophy, as evidenced by increased cell size and increased protein synthesis; this hypertrophy was not diminished by concomitant treatment with fluvastatin. Infusion of angiotensin II to Wistar rats for 2 weeks induced hypertrophic changes in cardiomyocytes, and this hypertrophy was prevented by oral fluvastatin treatment. These results show that an HMG-CoA reductase inhibitor, fluvastatin, prevents angiotensin II-induced cardiomyocyte hypertrophy in part through inhibition of cyclin D1, which is linked to Rho kinase. This novel mechanism discovered for fluvastatin could be revealed how HMG-CoA reductase inhibitors are preventing cardiac hypertrophy.     

一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用

实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L－精氨酸（L－Arg）和NO供体硝普钠（SNP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）激活蛋白激酶C（PKC）的作用,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径,实验结果如下：（1）无血清DMEM培养心肌细胞24h后加入AngⅡ,PKC活性呈剂量依赖性增高;（2）培养基中加入L－Arg,PKC活性呈剂量依赖性降低;（3）用L－Arg100μmol/L进行预处理,30min后分别加入AngⅡ0.1μmol/L或PMA10μmol/L,PKC活性均明显降低,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异;用NOS抑制剂L－NAME预处理后,再加入L－Arg,可明显阻断L－Arg对上述两个效应的影响;（4）培养液中加入NO供体SNP,PKC活性呈剂量依赖性地降低;（5）用SNP10μmol／L预处理心肌细胞,5min后分别加入AngⅡ或PMA,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性;NOS参与L－Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点（cross talk）。     

一氧化氮抑制AngⅡ介导的心肌肥大反应的信号机制

本文主要利用培养的新生大鼠心肌细胞,从细胞学及分子生物学角度研究一氧化氮（NO）信号系统在AngⅡ介导的心肌肥大反应中的作用及机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、心房钠尿肽（ANP）的表达作为心肌肥大反应的指标,以硝酸盐及亚硝酸盐含量反映心肌细胞NO水平,以免疫印迹法测定MKP－1蛋白表达,以RT－PCR测定eNOS mRNA水平。结果发现：（1）L－精氨酸（L－Arg)10,100μmol/L分别增加心肌细胞NO水平16％及31％,L－Arg(100μmol/L）还可增加心肌细胞eNOS mRNA表达,其作用可被NOS抑制剂L－NAME所抑制;（2）L－Arg(100μmol/L）可降低AngⅡ(0.1μmol/L）诱导的心肌细胞ANP mRNA表达水平和蛋白合成速率,而在L－Arg处理之前用针对MKP－1的反义寡核苷酸转染心肌细胞,蛋白合成速率明显增加,可取消L－Arg的抑制作用,甚至超过AngⅡ组;（3）L－Arg(100μmol/L）明显增加MKP－1蛋白表达,比对照组增加225％,NOS抑制剂L－NAME及蛋白激酶G（PKG）抑制剂KT－5823皆可抑制L－Arg诱导的MKP－1蛋白表达,分别抑制88％、83％,而AngⅡ能增加L－Arg诱导的MKP－1的表达,较对照组增加365％,增强了L－Arg的作用。以上结果表明,NO抑制AngⅡ介导心肌肥大反应的机制可能是通过激活PKG,促进MKP－1的表达,从而增加MAPK去磷酸化实现的。     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素-1诱导的心肌细胞原癌基因c-fos表达

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上, 探讨一氧化氮 (NO)对血管紧张素Ⅱ (AⅡ)和内皮素-1 (ET-1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达的影响.用Bradford 法测定心肌细胞总蛋白含量 (作为心肌细胞肥大的指标); 用基因特异性引物和 SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR), 检测大鼠心肌细胞原癌基因c-fos的表达 (以GAPDH为内标).结果显示, AⅡ和ET-1分别作用5 d和3 d后, 心肌细胞总蛋白含量显著增加; 硝普钠 (NO供体)可抑制AⅡ或ET-1诱导的心肌细胞总蛋白增加.AⅡ,ET-1和PMA (蛋白激酶C激动剂)均可诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达; L-精氨酸可抑制AⅡ,ET-1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达, L-NAME (NOS抑制剂)可抑制L-精氨酸的这一作用; 硝普钠对可抑制AⅡ,ET-1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达.结果表明, NO可抑制AⅡ或ET-1诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达, 其作用机制可能与蛋白激酶C这一环节有关.     

EPA effect on NOS gene expression and on NO level in endothelin-1-induced hypertrophied cardiomyocytes

Cardiomyocytes release (or metabolize) several diffusible agents (e.g., nitric oxide [NO], endothelin-1 [ET-1], and angiotensin II) that exert direct effects on myocyte function under various pathologic conditions. Although cardiac hypertrophy is a compensatory mechanism in response to different cardiovascular diseases, there can be a pathologic transition in which the myocardium becomes dysfunctional. Recently, NO has been found to be an important regulator of cardiac remodeling. Specifically, NO has been recognized as a potent antihypertrophic and proapoptotic mediator in cultured cardiomyocytes. We demonstrated that ET-1-induced hypertrophic remodeling in neonatal cardiomyocytes was arrested by pretreatment with eicosapentaenoic acid (EPA), a major component of fish oil. In some recent studies, EPA has demonstrated cardioprotective effects by modulating NO. This study investigated the changes in NO synthase (NOS) in ET-1-induced hypertrophied cardiomyocytes and in total levels of nitrates and nitrites. Ventricular cardiomyocytes were isolated from 2-day-old Sprague-Dawley rats and were cultured in D-MEM/Ham F12 supplemented with 0.1% fatty acid-free bovine serum albumin for 3 days. At Day 4 of culture, the cardiomyocytes were divided into three groups: control group, ET-1 (0.1 nM) group, and ET-1 pretreated with EPA (10 microM) group. NOS gene expression was evaluated 24 hrs after treatment using real-time polymerase chain reaction. Endothelial NOS (eNOS) mRNA expression was decreased in the ET-1 group compared with controls and was unchanged by pretreatment with EPA. mRNA expression of inducible NOS (iNOS) was significantly increased in ET-1-treated cardiomyocytes and was suppressed by EPA pretreatment. Neuronal NOS gene expression and total NO level did not exhibit a statistically significant change in any of the groups. There may be some interaction between ET-1, eNOS, and iNOS in ET-1-induced and EPA-regressed hypertrophied cardiomyocytes that suppress iNOS expression without modulating total NO level or eNOS gene expression.