抗原特异性CTL检测新技术--可溶性MHC-肽四聚复合物法的功能和应用

可溶性MHC-肽四聚复合物法是近年来发展起来的一种定量检测抗原特异性CTL的新方法.该法将特异性抗原肽段、可溶性MHC分子及β2微球蛋白在体外正确折叠构建四聚体,并结合流式细胞仪定量检测外周血及组织中抗原特异性CTL的比率,广泛用于感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病的研究,是一种很有前景的科研工具.     

胰岛细胞与供者抗原特异性调节性T细胞共移植

胰岛移植是治疗1型糖尿病（ Type 1 diabetes, T1DM）的一种很有前途的方法。近年来按照 Edmond 方案进行的移植,已大大提高了1年不依赖胰岛素率,但远期疗效仍然很低[1]。即使在目前全球效果最好的加拿大？Edmonton？Alberta？大学,其5年不依赖胰岛素率也只有8.5﹪[2]。远期疗效欠佳的重要原因之一便是成功的胰岛移植除了要克服同种排斥反应外,还必须控制糖尿病个体的自身免疫损伤[3],这与心脏、肝脏和肾脏等其它脏器移植是绝然不同的。     

CTP-BCR-ABL抗原肽负载树突状细胞体外致敏T淋巴细胞靶向杀伤CML细胞

BCR-ABL为慢性髓细胞白血病特异胞质抗原,为良好的免疫治疗靶标.该研究选择BCR-ABL融合位点的两段抗原肽SSKALQRPV(SS)、GFKQSSKAL(GF)为靶点,与胞质转导肽融合表达,负载小鼠骨髓源性树突状细胞.在胞质转导肽介导下,SS、GF短肽进入树突状细胞并定位于内质网,具备了被树突状细胞识别为内源性抗...     

CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究

目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。     

免疫检查点分子在慢性HBV感染中对T细胞功能影响的研究进展

阻断免疫检查点分子的信号通路可以增强免疫系统功能,这在肿瘤治疗中获得了显著效果。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染的原因之一为HBV在体内通过一系列方式来减弱、抑制免疫系统的功能,从而逃避免疫识别和杀伤。HBV可以通过上调病毒特异性T细胞表面的抑制性受体来抑制T细胞活化、增殖和效应。本文总结了HBV导致的人体内T细胞上免疫检查点程序性死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA-4)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing molecule-3,Tim-3)、淋巴细胞活化基因3(Lymphocyte-activation gene 3,LAG-3)、T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain,TIGIT)的异常表达以及它们影响T细胞功能的机制,揭示了免疫检查点在治疗慢性乙肝中的良好应用前景。     

抗原特异性滤泡辅助性T细胞的活化与诱导在流感减毒活疫苗所诱导的人黏膜免疫抗体应答中发挥关键作用

当前,抗呼吸道感染的鼻内疫苗开发项目正日益吸引着越来越多的关注。对疫苗所诱导的保护力而言,抗体应答是决定性的,而人们普遍认为滤泡辅助T细胞(TFH)对于介导抗体应答非常重要。绝大多数支持TFH在免疫应答中作用的数据均来自于动物研究,而除血液中存在TFH样细胞外,来自人体的直接证据则十分有限。研究者考察了在人类鼻咽相关淋巴组织(NALT)中TFH细胞的活化与诱导,及其在流感减毒活疫苗(LAIV)所诱导的抗体应答中的作用。腺扁桃体组织的TFH细胞活化情况使用流式细胞仪分析,同时在LAIV刺激扁桃体单核细胞(MNC)后检测抗流感血凝素(anti-HA)抗体。通过使用流式细胞仪对被诱导的TFH细胞和CD154表达进行分析,研究者对由LAIV诱导的抗原特异性TFH细胞活化情况展开研究。LAIV诱导了与抗HA抗体产生有关的TFH细胞增殖,同时研究显示TFH细胞对于抗体应答至关重要。表达BCL6和CD21新诱导的TFH细胞以及随后抗HA抗体的测定表明,初始T细胞被LAIV诱导成为TFH细胞。     

多表位肽抗原诱导特异性CTL抗慢性髓性白血病细胞的体外实验研究

目的：在应用基因工程技术人工表达获得多表位BCR-ABL融合蛋白的基础上,对该融合抗原在体外诱导对自血病细胞的特异性杀伤效应进行检测,探索慢性髓性自血病（CML）免疫治疗的新途径。方法：从外周血单个核细胞培养树突细胞（DC）,以BCR-ABL融合抗原脉冲刺激DC,诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）产生;MTT法检测CTL对白血病靶细胞的特异性杀伤活性。结果：以BCR-ABL融合抗原刺激产生的CTL能特异性抑制b3a2＋的靶细胞生长,包括K562细胞（P〈0．01）和HIJA-A2＋／b3a2＋的CML原代细胞（P〈0．05）,而对HIA-A2-或b2a2＋靶细胞无明显抑制作用。结论：设计表达的多表位BCR-ABL融合抗原能在体外诱导特异性抗CML免疫反应,抑制b3a2＋自血病细胞生长,有望为进一步的体内实验奠定基础。     

Epstein-Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以~(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14～28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。     

猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白在干酪乳杆菌中的共表达及免疫小鼠特异性抗体的测定

将分别编码猪瘟病毒T细胞表位E290多肽和猪细小病毒主要保护性抗原VP2蛋白的重组基因插入干酪乳杆菌分泌型表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2-E290,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白的乳酸菌共表达系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,对诱导表达的菌体及培养上清液进行SDS-PAGE检测表明,有约70kDa蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western blot分析结果表明所表达的蛋白具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性。以诱导表达上清液作为抗原进行的间接ELISA实验也表明,重组的目的蛋白获得了分泌表达。将该重组干酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c小鼠,收集粪便样品检测小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体,采集血液样本检测血清中抗PPV及抗E290的特异性IgG。结果表明分泌型的重组菌pPG-VP2-E290/L.casei 393免疫小鼠能够产生明显的抗体水平,为重组猪瘟与猪细小病毒乳酸菌口服活菌疫苗的研制奠定了重要的物质基础。