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人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
在大肠杆菌中,利用新构建的含T7噬菌体g-10核糖体结合位点(RBS),以及λ噬菌体PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24(CA)的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N-端7个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致,在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95%以上的纯度。ELISA分析表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。 相似文献
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利用聚合酶链式反应(PCR)获得了萝卜(Raqhanus sativus L.)抗真菌蛋白1(Rs-AFP1)基因编码区核苷酸序列。将整个阅读框架片段和云除了N-端信号肽序列的片段分别装入原核表达载体pET-32g(+)中,在大肠杆菌中表达,发现带有信号 的Rs-AFP1不能在大肠杆菌中表达,而当这一序列去除后,表达出约27kD的Rs-AFP1的融合蛋白。用凝血酶处理融合蛋白以云除N-端His.t 相似文献
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人免疫缺陷病毒HIV-1gag和env基因片段在大肠杆菌中的表达祁自柏,谷金莲,李河民(中国药品生物制品检定所,北京100050)由于引起艾滋病的HIV-1病毒的多变性,使得艾滋病的预防和治疗遇到很大困难。我们从一株用艾滋病人外周血淋巴细胞感染的细胞... 相似文献
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Gag和Env蛋白是人I型免疫缺陷病毒(Human immunodeticiency virus type 1,HIV-1)的结构蛋白,是HIV-1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多交亚克隆,将env基因以正确的三联密码读框插入gag基因的下游制备了HIV-1 gag-env嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒p7.5启动子和牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子的下游,经过同源 相似文献
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紫云英根瘤菌胞外多糖合成基因exo1的序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
对互补紫云英根瘤菌Exo-Ndv-Fix-变种的2.6kbDNA片段进行序列测定。分析结果表明,该片段内存在一个完整的阅读框架(ORF)exo1。exo1编码340个氨基酸,为细胞质蛋白。Exo1蛋白序列与苜蓿根瘤菌的糖基转移酶ExoU有较强的同源性。利用启动子检测质粒,分析exo1基因的表达,发现在exo1基因上有两个启动子活性区段,Pexo1a位于基因前端,Pexo1b位于基因中间。Pexo1a很可能包含了exo1基因的启动子。 相似文献
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将系列缺失的HIV1长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘苗病毒载体中,经同源重组和血球吸附试验,成功地构建了6株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明,6株重组病毒的Gag蛋白表达量因LTR不同而有明显差异,表明HIV1的LTR及其下游基因置于痘病毒启动子控制下,在痘苗病毒中表达时有下述特点:(1)不同的痘苗病毒启动子与全长LTR相互作用,对gag基因表达有显著不同的调控效果;(2)NR序列对Gag蛋白表达没有明显影响;(3)EN序列不能被重组痘苗病毒表达系统识别;(4)TAR序列可提高Gag蛋白的表达量;(5)U5区及下游非翻译序列不影响Gag蛋白的表达。 相似文献
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Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白(LMP)基因在哺乳动物传代细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术,把含有LMP基因(BNLF1)3个外显子(exon)开放阅读框架(ORF)的长1.80kbp的DNA片段,和能分解HygromycinB的含有SV40早期启动子和HgryomycinB磷酸转移酶全基因(长1025bp)的DNA片段(长1.60bp),同时重组于亚克隆载体pBluescriptSK(pBS)中,并使该重组质粒pBS-LMP-Hyg(长5767bp)在乳地鼠肾传代细胞(BHK)中获得表达。BHK细胞在经此重组质粒转染后,LMP阳性细胞是2%,在HygromycinB的持续压力下,LMP表达细胞率可达20%。3个月后,LMP表达细胞逐渐减少。5个月后,不能测到LMP表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹(Westemblot)实验证实,人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗LMP抗体。 相似文献
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HIV—1 SF2株env基因(120)在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
运用基因重组技术,将HIV-1 SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在大肠杆菌(E.CoilDH10b)中获得表达,经Westemblot反应证实,该重组蛋白与来自HIV-1感染者的血清(含多克隆抗体)发生特异性反应。 相似文献
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用杆状病毒表达系统重组病毒,在昆虫细胞中表达了完整的含有EBV-LMP1基因3个外显子开放读码框架的长2.3kb的cDNA片段。用重组病毒感染Sf9细胞,用免疫荧光染色,结果表明:48小时表达重组蛋白,72小时细胞较完整,免疫荧光染色强阳性,96小时后细胞出现破碎。我们采集72小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液,分别采用SDS-PAGAE、HPLC分子筛法,用免疫蛋白印迹法实验证明,表达的蛋白能被 相似文献
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应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI的酶切位点,经双酿切法把该DNA片段重组到pUC118质粒中。对插入片段的DNA序列测定和分析结果证实该片段为H-1NS-1基因序列。以此重组质粒为探针,采用分子杂交的方法,分别测定了H-1及MVMDNA在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备H-1的质量监测、H-1及MVMNS-1蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。 相似文献
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以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒的核衣壳蛋白基因vp39设计引物,用PCR技术扩增了家蚕核型多角体病毒中国株(BmNPV-Ch)-1.3kb片段并测定了其全序列长1230bp。推导的氨基酸351个,其与BmNPV日本株(BmNPV-Ja)vp39基因核苷酸序列同源性达97.5%,氨基酸同源性达97.1%。该片段在E.coliBL21中诱导表达能产生分子量约为38kD的特征性蛋白带,证明所扩增片段为Bm 相似文献
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鸡减蛋综合征病毒(EDSV—76)基因组E1区结构特点分析 总被引:1,自引:0,他引:1
EDSV-76病毒中国株AA-2经常规方法提取其病毒DNA后,建立了限制性内切酶PstI水解片段的全基因文库。对其中PstI-G片段和PstI-A片段的正反链进行序列测定,获得EDSV E1区(0-8.8m.u)的核苷酸序列。经分析,EDSV E1区具有与其他腺病毒E1区类似的结构。以大于60个氨基酸残基为标准,EDSV E1区共有7个开放读码框架(ORF),其中R1、R2、ElbsT和E1b1T 相似文献
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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以马传染性贫血病毒(ELAV)驴白细胞弱毒疫苗株(DLA)病毒基因组RNA为材料,用RT-PCR方法扩增出EIAV gag基因,以平端针其克隆到质粒载体pUC19中,由于疫苗不是克隆株,因此通过5次单独克隆与测序,推导出EIAV-DLA gag基因的优势序列。gag基因全长1458个碱基,编码一486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAV Wyoming1369株比较,核苷酸同源性为80%,氨基酸 相似文献
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6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
早期收集保藏的6株A型口蹄疫病毒(FDMV)(AL1-AL6),适应BHK21单层细胞后,提取6株细胞增殖病毒的RNA。用一对FMDV通用引物经反转录(RT)-PCR法扩增了约500bp的期望的DNA片段。克隆目的的基因后,采用双脱氧DNA链末端终止法测得了6株病毒的VP1基因210-639核苷酸序列。分析表明,3株病毒缺失3个核苷酸,从推导的氨基酸序列比较,确定缺失的3个核苷酸正好是一个密码子, 相似文献
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我国首次发现的HIV—1和HIV—2双重感染样品中病毒部分基因的序列特 … 总被引:1,自引:0,他引:1
上海市卫生检疫局送检了一例HIV-1和HIV-2抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的HIV前病毒的gag和env基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的HIV双重感染样品的HIV部分基因特征。从HIV感染者淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中提取前病毒DNA,分别使用HIV-1和HIV-2特异性引特用套式PCR扩增HIV-1和HIV-2 相似文献
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HIV-1外膜(env)基因在重组痘苗病毒中的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用重组痘苗病毒作载体,在ATI、P7.5突变型早期启动子控制下,高效表达了(经定点突变去除一处早期终止信号的)HIV-1env基因。经Westernblot证明,晚期启动子活性强的pSFJ2-38能更高效地表达env基因。经Lentil-Lectin提取以及SDS-PAGE后的激光扫描测定结果,在107个感染细胞中可产生50-70μg的Env蛋白。 相似文献