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1.
发展了一种高效的、能将携带外源基因的质粒型EB病毒载体特异性地导入肝细胞表达的方法。将EB病毒复制子载体pDR2经改造得到携带外源基因的pEBluc质粒。将pEBluc与人工制备的、既保留了DNA结合活性又能为肝细胞受体识别并内在化的半乳糖基化组蛋白的fl组分结合,形成pEBluc-半乳糖基化组蛋白复合物。该复合物通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞进入肝细胞并表达。pEBluc质粒在细胞内能稳定存在并自主复制。该系统具有应用于以肝细胞为靶组织的基因治疗的前景。 相似文献
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受体介导的EBV复制子载体定向导入大鼠肝脏组织中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
在先前的体外实验中,我们利用半乳糖基化组蛋白与带荧光素酶报告基因的EB病毒复制子载体pEBluc,在体外组建了一种核酸蛋白质复合物。它可被肝细胞表面特异存在的脱唾液酸糖蛋白受体识别,并通过该受体介导的内吞作用将外源基因特异性导入培养的肝细胞素中表达。 相似文献
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为了探讨受体介导的基因转移技术在治疗血小板减少症方面的可行性,将促血小板生成素(TPO)基因克隆入质粒型EB病毒表达载体pDR2中,并与半乳糖化组蛋白结合,从而制备了一种为肝细胞表面特异的脱唾液酸糖蛋白受体识别并内吞的核酸-蛋白复合物。在经化疗药物卡铂诱发的血小板减少症的实验动物大鼠中,同时静脉注射该复合物,可将TPO基因特异地导入肝细胞并在其中得到表达。从而有效地阻止了血小板减少症的发生,提示了 相似文献
4.
为了探讨受体介导的基因转移技术在治疗血小板减少症方面应用的可行性,将促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)基因克隆入质粒型EB病毒表达载体pDR2中,并与半乳糖化组蛋白结合,从而制备了一种为肝细胞表面特异的脱唾液酸糖蛋白受体识别并内吞的核酸-蛋白复合物。在经化疗药物卡铂诱发的血小板减少症的实验动物大鼠中,同时静脉注射该复合物,可将TPO基因特异地导入肝细胞并在其中得到表达。从而有效地阻止了血小板减少症的发生,提示了一种以非病毒感染方式对化疗后血小板减少症进行有效基因治疗的可能前景 相似文献
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利用RT-PCR方法,从小鼠肝脏组织总RNA中扩增出4.5SRNA的cDNA。该cDNA被克隆到pGEM3Zf(+)质粒上,酶切鉴定并测序。然后将该序列插入以Luc基因作为报道基因的表达载体pSVluc20的PvuⅡ位点,构建了含4.2SRNA逆转座子的表达载体pSVluc20-4.5S。脂质转染法将表达载体导入小鼠骨髓瘤细胞NS-1、SP2/0和人乳腺癌细胞Bca61。结果表明,小鼠4.5SRN 相似文献
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将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白 相似文献
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霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达CTB与β-半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与GM1结合,说明融合蛋白保持CTB的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗-CTB抗体结合,说明融合蛋白具有CTB的抗原性。以上结果表明:通过将外源抗原决定簇基因融合至ctxB的3′端,在大肠杆菌中表达融合蛋白,构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响,构建了高效表达融合蛋白的载体-宿主系统。 相似文献
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人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备 总被引:23,自引:0,他引:23
痘苗病毒的基因组庞大,结构复杂而特殊,不可能将外源基因直接插入它的基因组,必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒,才能构建成功重组痘苗病毒.在分析了痘苗病毒质粒pJ120〔含有我国天花疫苗-痘苗病毒天坛株761的启动子和胸苷激酶(thymidinekinase,简称TK基因),及含有人癌胚抗原(carcinoembrynicantigen,简称CEA)cDNA全序列的质粒p91023B-cea-17结构的基础上,设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒pJ-CEA.经酶切及PCR鉴定pJ-CEA中CEAcD-NA的存在,进一步用同源重组方法构建了表达人CEA的重组痘苗病毒,并以人体成纤维细胞作为宿主细胞,对CEA-重组痘苗病毒进行了大量培养.再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体,可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白CEA. 相似文献
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Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
将Epstein-Bar病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的MA基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。 相似文献
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牛免疫缺陷病毒长末端重复序列(BIV—LTR)在大肠杆菌中的启动子功能 总被引:3,自引:1,他引:2
牛免疫缺陷病毒的长末端重复序列含有病毒的启动子,调控病毒在真核细胞中的表达。我们将BIV LTR与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒pBIV=Luc,该质粒能在E.coli中有效地表达出荧光素酶的活性,从而证明了BIV LTR在大肠杆菌中也具有启动子功能。 相似文献
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将丙型肝炎病毒C+E1区基因插入到原核高效表达载体pBV221质粒中,构建了质粒pBV221HCV/C+E1作为表达载体,然后,将含有该质粒的宿主大肠杆菌进行升温诱导表达HCV/C+E1区基因,并对表达产物进行了生物活性的检测。结果表明,插入到表达载体pBV221中的HCV/C+E1基因片段能够得到有效的表达,表达产物主要为非融合蛋白形式存在于细胞中,同时这种C区和E1区连接共表达的产物保持了良好的抗原活性 相似文献
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利用突变的绿色荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体 总被引:3,自引:0,他引:3
将三位点替换突变的绿色荧光蛋白(GFP_S65T、V68L、S72A)基因插入到pBluescriptSK(+)的XbaⅠ和SacⅠ之间,构建为新型的克隆载体pGreenLD。此质粒载体在E.coli中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色,而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光,当外源DNA片段插入该载体的多克隆位点使gfp基因表达受阻时,转化的E.coli菌落为白色。因此可以用E.coli菌落黄绿色/绿色荧光的消失作为检测指标来筛选含有重组质粒的克隆。 相似文献
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应用硫氧还蛋白促进外源蛋白在大肠杆菌的可溶性表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为了观察硫氧还蛋白(TrxA)促进外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的作用,我们从质粒pET-32a(+)上克隆了trxA基因,构建了TrxA表达质粒pT-TrxA。将该质粒与其它蛋白基因的表达质粒共同转化E.coli并同时获得表达。结果表明,共表达TrxA可以明显促进外源蛋白,如甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、PTHrP受体(PTHrP-R)的血管内皮生长因子(VEGF)的可溶性表达。说明共表达 相似文献
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汉滩病毒A9株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定 总被引:7,自引:0,他引:7
为发展国产化肾综合征出血热(HFRS)病毒基因工程疫苗,选择了汉滩病毒A9株M基因片段为目的基因,构建转染质粒pJSBA9M。以携带Lac基因的重组病毒为亲本,使表达载体pJSB-A9M上的M片段与痘苗病毒内的Lac基因重组,将Lac置换成A9M片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒,经PCR扩增证实A9M片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的Vero E6细胞,用抗糖蛋白单克隆抗体(HCO2、 相似文献
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外源质粒(基因)导入花生根瘤菌的行为分析 总被引:7,自引:1,他引:6
利用二亲本或三亲本杂交的方法,将携带有共生固氮基因的外源重组质粒或外源载体质粒导入慢生型花生根瘤菌[Bradyrhzobiumsp.(Arachis)]147-3和快生型花生根瘤菌[Rhizobiumsp.(Arachis)]85-7中。探讨了转移接合子中外源质粒在人工培养条件下和共生条件下的稳定性,发现外源质粒在花生根瘤菌中的稳定性与质粒的类型、受体菌的特性和环境条件有关。同时还探讨了外源质粒上的共生基因对受体菌147-3共生固氮效率的影响。结果表明,外源共生基因对共生固氮能力的影响是复杂的,既可以产生正效应,也可以产生负效应。 相似文献
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嗜麦芽假单胞菌酪氨酸酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:6,自引:0,他引:6
酪氨酸酶基因(mel)编码的酪氨酸酶是合成黑色素的关键酶。用鸟枪法分离嗜麦芽假单胞菌的mel基因:以pUC18为载体,E.coli HB101为受体菌,在加有一定量的Amp和L-tyr的酪素平板上筛选到分泌可溶性黑色素的转化子,所含重组质粒pWSY约700bp的外源DNA片段上携有mel基因,该片段无BamHI、HindIII、EcoRI、BclI等酶的识别位点。Southern杂交证实此片段确实 相似文献
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利用突变的绿化荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体 总被引:1,自引:0,他引:1
将三位点替换突变的绿色荧光蛋白(GFP-S65T、V68L、S72A)基因插入到pBluescript SK(+)的XbaⅠ和SacⅠ之间,构建为新型的克隆载体pGreenLD。此质粒载体在E.coli中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色,而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光,当外源DNA片段插入该载体的多克隆位点使gfp基因表达受阻时,转化的E.coli菌落为白色。因此可以用E.coli菌落黄绿色/绿色 相似文献
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大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用 总被引:3,自引:0,他引:3
利用分子生物学方法,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100,研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽S-转移酶抗原基因在卡介苗中的表达,以含人结核杆菌热休克蛋白70基因全长序列的质粒pMT-70为模板,扩增出hsp70启动子,测序选出无错配的启动子,将其定向克隆入E.coli-Mycobactrium穿梭质粒pBCG-2000中,构建成E.coli-Mycobacterium穿梭表达 相似文献