Nell-1基因启动子区甲基化在胃癌中的研究*

目的:探讨Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌患者术后病理分期及淋巴结转移度之间相关性。方法:收集2012年4月至2012年9月在哈尔滨医科大学附属第四临床医院肿瘤外科25例接受胃癌根治术的病人资料,运用配对t检验及线性回归统计方法,分析Nell-1基因启动子区不同甲基化位点与胃癌患者临床病理资料之间的相关因素。结果:Nell-1基因启动子区不同甲基化位点的胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差别有统计学意义(第1号位点及第38号位点),简单线性回归结果分析显示在第1号位点随着患者术后病理分期逐渐降低,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(负相关);而在第38号位点随着淋巴结转移度的逐渐增大,胃癌组织组和胃正常组织组甲基化率之间的差值会逐渐增大(正相关)。结论:胃癌的发生受诸多因素的影响,不同甲基化位点其甲基化率不同,其与胃癌患者临床病理资料之间存在一定相关性。     

DACT2基因启动子甲基化与宫颈癌细胞化疗敏感性的相关性研究

摘要 目的：探讨与研究DACT2基因启动子甲基化与宫颈癌细胞化疗敏感性的相关性。方法：人宫颈癌顺铂耐药细胞系SIHA/DDP根据实验目的分为三组-对照组、DACT 1组与DACT 2组,组分别加入含0.0 μmol/L、1.0 μmol/L、10.0 μmol/L DACT2基因启动子甲基化抑制剂-5-aza-dC进行治疗,采用MTT法检测细胞增殖指数,流失细胞法检测细胞凋亡指数,PCR法检测甲基化水平,流式细胞仪检测胞周期,Western Blot检测Wnt蛋白与TGF-β1蛋白表达情况。结果：治疗后24 h、36 h的DACT 1组与DACT 2组DACT2基因启动子甲基化相对水平低于对照组(P<0.05),DACT 2组低于DACT 1组(P<0.05)。治疗后24 h、36 h的DACT 1组与DACT 2组细胞增殖指数低于对照组(P<0.05),细胞凋亡指数高于对照组(P<0.05),DACT 2组与DACT 1组对比差异都有统计学意义(P<0.05)。治疗后24 h、36 h的DACT 1组与DACT 2组G2/M期细胞比例高于对照组(P<0.05),G0/G1期细胞比例低于对照组(P<0.05),DACT 1组与DACT 2组对比差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后24 h、36 h的DACT 1组与DACT 2组的Wnt蛋白与TGF-β1蛋白相对表达水平低于对照组(P<0.05),DACT 2组低于DACT 1组(P<0.05)。结论：抑制DACT2基因启动子甲基化能抑制宫颈癌细胞的Wnt/TGF-β1信号通路的激活,能调节宫颈癌细胞周期平衡,能抑制顺铂耐药性宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强化疗敏感性,且在本研究设置范围内,作用剂量越高,效果越显著。     

肿瘤微环境对胃癌化疗耐药的影响

胃癌是一种消化道高发恶性肿瘤，化疗耐药是其相关性死亡的主要原因之一。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)通过各种途径与机制促进胃癌化疗耐药，因而TME可能是评估肿瘤发展方向和克服治疗耐药的关键。鉴于治疗胃癌化疗耐药缺乏有效的临床方案，本文综述了TME中的细胞成分、非细胞成分与胃癌细胞化疗耐药之间的联系，以及TME中主要成分与化疗耐药相关联的生物标志物和治疗靶点。此外，本文进一步讨论了TME中不同细胞促进胃癌化疗抵抗的机制，总结了潜在的调节因子与药物，旨在为临床解决胃癌化疗耐药性提供新的角度，并为胃癌防治提供新思路。     

胃癌组织中MEG3 基因甲基化状态及其临床意义

目的：探讨胃癌中MEG3基因差异性甲基化区域甲基化水平及其与MEG3 表达之间的关系,并分析其临床病理意义。方法： 利用荧光定量PCR 检测38 例胃癌组织及其对应癌旁正常组织中MEG3 的表达水平,并利用甲基化特异性PCR 检测MEG3 基 因差异性甲基化区域的甲基化水平。结果：①胃癌组织中MEG3 表达水平明显低于正常癌旁对照组织（P＜0.05）;②胃癌组织 MEG3差异性甲基化区域的甲基化率（21/38,55.3%）显著高于正常对照组织（10/38,26.3%,P＜0.05）③胃癌组织MEG3差异性甲 基化区域的甲基化率在性别、年龄、发病部位的差异无统计学意义（P＞0.05）;在肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度上差异有统计 学意义（P＜0.05）。结论：胃癌组织中MEG3 呈低表达水平,其差异性甲基化区域的甲基化与肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度 有关。     

胃癌组织中MEG3基因甲基化状态及其临床意义

目的：探讨胃癌中MEG3基因差异性甲基化区域甲基化水平及其与MEG3表达之间的关系,并分析其临床病理意义。方法：利用荧光定量PCR检测38例胃癌组织及其对应癌旁正常组织中MEG3的表达水平,并利用甲基化特异性PCR检测MEG3基因差异性甲基化区域的甲基化水平。结果：①胃癌组织中MEG3表达水平明显低于正常癌旁对照组织（P〈0.05）;②胃癌组织MEG3差异性甲基化区域的甲基化率（21/38,55.3%）显著高于正常对照组织（10/38,26.3%,P〈0.05）③胃癌组织MEG3差异性甲基化区域的甲基化率在性别、年龄、发病部位的差异无统计学意义（P〉0.05）;在肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度上差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：胃癌组织中MEG3呈低表达水平,其差异性甲基化区域的甲基化与肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度有关。     

RASSF1A和Runx3基因启动子区甲基化在胃癌组织中的表达及意义

目的：检测胃癌组织中RASSFlA和Runx3基因启动子区甲基化状态,探讨二者与胃癌发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测57例胃癌组织和相应癌旁组织及30例正常胃黏膜组织中RASSFlA和Runx3基因启动子区甲基化状态。结果：RASSFlA和Runx3甲基化在正常组未见表达。胃癌组RASSFlA基因甲基化率为64．9％（37／57）,明显高于癌旁组的7．0％（4／57）,差异有统计学意义（P〈0．05）,胃癌组Runx3基因甲基化率为49．1％（28／57）,明显高于癌旁组5．3％（3／57）,差异有统计学意义（P〈O．05）。胃癌组RASSFlA和Runx3基因甲基化率为68．4％（39／57）,明显高于癌旁组的8．8％（5／57）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：RASSFlA和Runx3基因启动子区高甲基化与胃癌的发生密切相关,有望为胃癌的早期诊治提供理论依据。     

胃癌组织中微小RNA-375基因甲基化及其表达与临床病理特征的关系研究

目的:研究胃癌组织中微小RNA-375(miRNA-375)基因甲基化及其表达与临床病理特征的关系。方法:选择从2015年9月到2017年6月在我院接受手术治疗的胃癌患者60例纳入研究对象,将术中切除的癌组织标本60例作为观察组;另选同期在我院治疗的浅表性胃炎患者60例,将经内镜采集到的正常胃黏膜标本60例作为对照组。检测并对比两组患者miRNA-375基因甲基化及表达水平,分析胃癌患者的miRNA-375基因表达水平及甲基化与其病理特征的关系,并采用Spearman法分析miRNA-375基因表达水平、基因甲基化与其分化程度的相关性。结果:观察组miRNA-375基因的表达水平为(0.034±0.021),明显低于对照组的(0.187±0.104),差异有统计学意义(P0.05)。miRNA-375基因甲基化的阳性率为61.67%(37/60),明显高于对照组的20.00%(12/60),差异有统计学意义(P0.05)。低分化胃癌患者的miRNA-375基因表达水平明显低于中、高分化者,差异有统计学意义(P0.05)。低分化胃癌患者的miRNA-375甲基化阳性率明显高于中高分化者,差异有统计学意义(P0.05)。根据Spearman相关性分析发现,胃癌患者的miRNA-375基因表达水平与其分化程度呈正相关(P0.05),基因甲基化与其分化程度呈负相关(P0.05)。结论:胃癌组织中的miRNA-375基因的表达水平明显下降,而基因甲基化的比例明显上升,且二者均与肿瘤的分化程度有关,可考虑在临床上将其作为监测靶点,从而更好地评价患者的病情及预后。     

宫颈癌中相关基因启动子高甲基化研究进展

本文主要从分子水平介绍了在宫颈癌发生发展过程中抑癌基因的甲基化的作用.以往认为人乳头状病毒高危型的的感染是导致宫颈癌发生的主要因素.随着科技的发展,宫颈癌组织中抑癌基因的甲基化越来越备受关注.既往认为基因内突变和染色体物质缺失是肿瘤抑制基因失活的主要原因.但是,启动子CPG岛异常甲基化导致的基因失活在肿瘤发生发展过程中起着非常重要的作用现已确切证明,DNA甲基化是肿瘤抑制基因失活的第三种机制,而且在某些情况下是抑癌基因失活的惟一机制.对宫颈癌组织中的对相关抑癌基因甲基化的筛选并作为标记应用在检测宫颈癌中,这在防止宫颈癌的发生起到重大作用,还可有望作为宫颈癌治疗疗效检测的一项手段.     

PIG11、Caspase-3蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨PIG11、Caspase-3蛋白在胃癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测80例胃癌组织、36例正常胃黏膜组织、30例肠上皮化生组织及31例异型增生组织中PIG11、Caspase-3蛋白的表达水平,并分析其表达与胃癌临床病理特征的关系及两者之间的相关性。结果:胃癌组织中PIG11、Caspase-3蛋白的阳性表达率均显著低于正常胃黏膜、肠上皮化生及异型增生组织(P0.01);PIG11、Caspase-3蛋白表达水平与胃癌的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移及远处转移密切相关(P0.05),但与患者的年龄、性别及肿瘤的浸润深度无关(P0.05);PIG11、Caspase-3蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.859,P0.01)。结论:PIG11、Caspase-3蛋白在胃癌中明显表达下调,且与胃癌的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移及远处转移密切相关,可能作为胃癌预后评估的参考指标。PIG11表达下调可能通过抑制Caspase-3的表达促进胃癌的发生和发展。     

循环肿瘤细胞在胃癌化疗预后评估中的临床意义

目的:探讨检测循环肿瘤细胞对评估胃癌患者化疗敏感性和预后的临床价值。方法:选取行根治术的胃癌患者112例,术前留取血液标本进行循环肿瘤细胞检测。选取病理分期为Ⅲ期的36位患者进行术后6周期Xelox化疗,在化疗前和化疗结束后检测循环肿瘤细胞。分析循环肿瘤细胞检测值和肿瘤分期、化疗预后的关系。结果:在胃癌患者中,循环肿瘤细胞阳性率(2)为39.29%(44/112),并且和肿瘤分期与淋巴结转移明显相关(P0.05)。在术后行辅助化疗的胃癌患者中,循环肿瘤细胞阳性率和化疗敏感性明显相关,循环肿瘤细胞检测值动态增高的患者比降低的患者预后差(P0.05)。结论:循环肿瘤细胞的动态监测有助于预测胃癌患者的化疗预后。     

胃癌的过继性免疫治疗研究进展

胃癌是目前世界上发病率及致死率较高的恶性肿瘤之一,在东亚地区尤其显著。针对胃癌的治疗手段仍是传统的手术联合化疗、放疗为主,尽管靶向药物治疗提供了新的选择,但其对晚期胃癌的疗效仍然有限。胃癌的免疫治疗作为独特的治疗手段,在近十多年发展较为活跃,特别是过继性免疫治疗手段不断有创新。过继性免疫治疗主要依赖回输具有抗肿瘤活性的细胞,目前回输的细胞由具有非特异性抗肿瘤作用向具有特异性抗肿瘤作用演变,特别是嵌合性抗原T细胞治疗的出现,为进展期胃癌患者提供了有一种潜在的选择。本文对胃癌过继性免疫治疗中采用的不同免疫活性细胞的作用机制、临床应用等进行总结,并针对其不足提出利用基因工程技术增强治疗靶向性、降低免疫逃逸的研究方向。     

APRO家族基因在胃癌中的表达及预后意义

目的:基于大数据挖掘分析BTG/Tob抗增殖蛋白家族(anti-proliferativeprotein family,APRO)基因在胃癌组织的表达及其对胃癌患者预后的影响。方法:采用Oncomine数据库分析APRO家族6个成员在胃癌组织中的m RNA表达情况,通过Kaplan-Meier Plotter数据库进行胃癌患者总生存期的分析。结果:相比正常胃组织,BTG2在胃癌组织中呈低表达;BTG3在肠型胃癌组织中呈高表达,而在总体胃癌组织中呈低表达。BTG3低表达的患者总生存期较短;对5-氟尿嘧啶辅助化疗的胃癌患者,低表达BTG2的预后较差。结论:BTG2、BTG3的m RNA表达在胃癌和正常胃组织中有明显差异。BTG3低表达的胃癌患者预后较差;BTG2可能参与调节胃癌患者5-氟尿嘧啶治疗的敏感性。     

胃癌FOXQ1与Snail相关性表达及其临床意义研究

摘要 目的：探讨胃癌组织中FOXQ1和Snail的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测178例胃癌组织中FOXQ1和Snail的表达,比较FOXQ1和Snail的表达与临床病理特征和生存期的关系。结果：在178例胃癌中,FOXQ1和Snail过表达分别为103例（57.8%）和87例（48.9%）,76例（42.7%）同时表达FOXQ1和Snail。FOXQ1的表达与胃癌pTNM分期（P<0.001）、浸润深度（P<0.001）、淋巴结转移（P<0.001）、远处转移（P=0.001）、分化程度（P=0.002）和肿瘤直径（P=0.001）有关。Snail的表达与胃癌pTNM分期（P<0.001）、浸润深度（P<0.001）、淋巴结转移（P<0.001）、远处转移（P=0.001）、Borrmann分型（P=0.016）、分化程度（P=0.037）和肿瘤直径（P< 0.001）有关。结果表明,FOXQ1高表达与Snail表达呈正相关（r= 60.705,P<0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示,FOXQ1或Snail表达与OS相关（P< 0.001）。单因素分析显示FOXQ1、Snail、pTNM分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤直径分别与5年OS显著相关。多因素COX分析显示,FOXQ1（HR 2.621,95%CI 1.571-4.374,P< 0.001）、Snail（HR 2.925,95%CI 1.767-4.841,P<0.001）和淋巴结转移（HR 1.345,95%CI 1.130-1.601,P=0.001）是胃癌的独立预后因素。结论：FOXQ1与Snail的表达密切相关,FOXQ1与Snail的联合表达模式可作为胃癌患者更有效的预后指标。FOXQ1与Snail在胃癌上皮间质转化过程中的确切作用机制有待进一步研究。     

成纤维细胞生长因子23在胃癌中的表达及作用研究

目的:探讨成纤维细胞生长因子23(Fibroblast growth factor 23, FGF23)在胃癌中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:收集2014年7月-2017年12月来我院手术治疗的胃癌患者,免疫组化检测FGF-23和Ki-67的表达;采用Transwell小室进行胃癌细胞侵袭实验;MTT实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:免疫组化的结果显示胃癌组FGF-23的平均光密度是477.5,对照组为46.65(t=10.53,P0.0001),相关性分析的结果显示胃癌组织中FGF-23与Ki-67增殖指数具有正相关性(r=0.6489,P=0.0020);Transwell侵袭实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞侵袭的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞侵袭,相对于对照组和低浓度组,侵袭的细胞数目分别上升了2.19倍和74.77%,结果差异明显(t=16.24,P0.0001;t=9.811,P0.0001);MTT实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞增殖的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞增殖,相对于对照组和低浓度组,吸光度分别上升了1.70倍和37.37%倍,结果差异明显(t=13.81,P0.0001;t=4.227,P=0.0018)。结论:我们的研究发现FGF-23在胃癌组织中高表达,其能促进胃癌细胞的增殖和侵袭,我们的研究为胃癌的诊断和精准治疗提供了一个新的靶点。     

HOXB7在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析同源异型盒基因B7(Homeobox B7,HOXB7)在人胃癌组织中的表达情况,并探讨HOXB7的表达与胃癌患者临床病理特征和预后的关系。方法:收集行手术切除的胃癌组织及对应癌旁组织共120例,采用实时定量PCR(q RT-PCR)技术、蛋白印迹(Western blot)和免疫组化染色分别检测HOXB7m RNA水平及蛋白水平在胃癌及对应癌旁组织中的表达,通过卡方检验分析HOXB7表达水平与胃癌患者临床病理因素间的相关性,采用单因素及多因素Cox回归模型评估HOXB7在胃癌风险评估中的作用,Kaplan-Meier生存曲线分析HOXB7表达水平与胃癌患者无瘤生存期和总生存期的关系。结果:胃癌组织中HOXB7 m RNA和蛋白表达水平均显著高于对应癌旁组织(P0.05);HOXB7蛋白表达与肿瘤临床分期、浸润深度及淋巴结转移均具有显著相关性(P0.05),而与患者性别、年龄、分化程度及远处转移均无显著相关性(P0.05)。单因素和多因素Cox分析提示HOXB7可以作为评估胃癌患者预后的独立风险因素。Kaplan-Meier生存分析结果显示高表达HOXB7的胃癌患者无瘤生存时间和总生存时间均显著低于HOXB7低表达患者组(P0.01)。结论:HOXB7蛋白在胃癌组织中高表达,并与胃癌的恶性表型有关,可能参与胃癌发生及恶性进展过程,可作为判断胃癌患预后的重要参考指标。     

腹腔镜与传统开腹胃癌D2根治术式的临床分析

目的:比较远端胃癌应用腹腔镜辅助技术行D2根治术与传统开腹远端胃癌D2根治术安全性、近期生存差异。方法:回顾性分析2010年1月-2012年12月在我院行远端胃癌根治术的158例患者,其中行腹腔镜辅助远端胃癌根治手术75例(腹腔镜组),与开腹远端胃癌根治手术83例(开腹组)。对比分析腹腔镜组与开腹组病人术中情况和术后并发症及近期生存差异。结果:腹腔镜组与传统开腹组病人一般资料、病理学类型、肿瘤位置、肿瘤浸润深度、转移淋巴结数目、总清扫淋巴结数目、肿瘤TNM分期比较差异无统计学意义(P0.05),腹腔镜组手术时间较传统开腹组长(P0.05),切口长度、离床活动时间、排气时间、进流食时间、总住院时间短于开腹组,差异有统计学意义(P0.05),腹腔镜组与开腹组术中出血量、术后并发症发生率、近期生存率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜辅助胃癌D2根治性手术安全可行,可达到开腹手术相同的根治效果,但较开腹组具有术中创伤小、术后恢复快优势。     

PRKAA1和UNC5CL基因位点多态性与胃癌的相关性研究

目的:研究PRKAA1和UNC5CL基因位点多态性与胃癌发病的关系。方法:以我院2014年1月~2016年12月收治的90例胃癌患者为观察组,选择同期在我院进行治疗的90例胃炎患者作为对照组。提取分析患者的全血DNA样品,对其PRKAA1和UNC5CL基因位点基因分型进行检测,并进行组间比较。结果:(1)与对照组比较,观察组PRKAA1基因的rs13361707位点的CC型基因出现频率、rs10074991位点的GG基因出现频率、rs10036575位点的TT基因出现频率均显著高于对照组,rs10036575位点的CT+CC基因出现频率显著低于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。(2)观察组UNC5CL基因的rs2294693、rs742494位点的各基因分型的出现频率与对照组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:胃癌患者的发病与PRKAA1基因多态性表达有一定的相关性,当rs13361707位点为CC型、rs10074991位点为GG型、rs10036575位点为TT型时,胃癌的发病率增加,当rs10036575位点为CT+CC型时,胃癌发病率降低。而胃癌患者的发病与UNC5CL基因位点多态性表达无明显相关性。     

胃癌相关的幽门螺杆菌铁摄取调节蛋白基因多态性及进化分析

摘要 目的：探寻幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）铁摄取调节蛋白（ferric uptake regulator,Fur）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）和进化分型与胃癌的相关性。方法：选取2011-2018年青岛市市立医院保存的150株Hp（胃癌来源59株和胃炎来源91株）,运用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法扩增fur基因,并进行一代测序及SNP分析。通过NCBI数据库下载226株东亚亚群Hp菌株fur基因序列,应用MEGA 5.0软件分析SNP并构建fur基因Neighbour-Joining系统进化树,建立进化分型。结果：98.7 %（148/150）Hp菌株fur基因PCR扩增阳性。序列分析发现fur基因351位点存在碱基A→G的同义SNP（SNP A351G）,胃癌来源的菌株中G等位基因的变异频率明显高于胃炎来源的菌株,差异有统计学意义（χ²=5.161,P=0.023）;携带该等位基因的菌株发生胃癌风险明显升高（OR=2.4）。在东亚Hp fur基因的Neighbour-Joining系统进化树中,依据进化距离将东亚Hp菌株分为Ⅰ型和Ⅱ型两个亚型,fur基因进化Ⅰ型中的胃癌来源Hp菌株比例明显高于Ⅱ型,差异有统计学意义（χ²=41.8,P=9.9×10^-11）;感染furⅠ型Hp的患者发生胃癌的风险显著升高（OR=4.7）。结论：携带fur SNP A351G的Hp菌株导致胃癌发生风险显著升高,fur基因进化Ⅰ型与胃癌发生风险具有一定相关性。     

组织因子阳性的细胞和微粒在胃癌高凝状态中的作用

目的:探讨胃癌患者血浆中组织因子阳性的血小板、白细胞和微粒的数量及其促凝活性。方法:将45例胃癌患者根据TNM分期分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,同时选取30例健康人作为对照组。采用流式细胞术检测组织因子阳性的细胞和微粒数。凝血酶生成实验检测细胞和微粒的凝血活性。结果:胃癌Ⅲ/Ⅳ期患者血浆中组织因子阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒的数量明显高于胃癌Ⅰ/Ⅱ期和健康对照组。胃癌Ⅲ/Ⅳ期患者血小板、白细胞和微粒的促凝活性与其他组相比显著升高,与增加凝血酶的生成速度和生成总量有关。用抗组织因子抗体抑制TF后,细胞和微粒的凝血活性明显下降。然而,使用抗膜连蛋白V抑制PS后,细胞和微粒的凝血活性虽然有下降趋势,但是并不明显。此外,根治性手术治疗可以降低组织因子阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒的数量。结论:组织阳性的血小板、中性粒细胞、单核细胞和微粒是胃癌Ⅲ/Ⅳ患者高凝状态的原因之一,通过抑制TF和凝血酶的生成可能降低胃癌患者的血栓发生率。