研究报告: 42℃热疗抑制U251细胞增殖并诱导凋亡

目的 艾灸是一种经典的中医治疗手段,集合了物理疗法（热疗）和化学疗法,目前已经证明对多种癌症有抑制作用,但是具体的细胞生物学机制尚不明确。本研究旨在研究热疗对星形胶质细胞癌细胞系U251的作用,来揭示艾灸通过热疗对癌细胞的作用。方法 通过显微缩时摄影技术,记录了42℃热疗处理U251细胞系108 h中细胞形态的变化,并用细胞计数法检测了热疗3 d时全细胞数、活细胞数及活细胞比例的变化,来评价热疗对细胞增殖和死亡的影响。通过检测细胞凋亡标志物Annexin V和Caspase-3,来评价热疗对细胞凋亡的作用。结果 热疗明显抑制细胞的增殖,细胞死亡明显增加。热疗处理后的U251细胞较对照组存在明显的核固缩,标志物Annexin V和PI明显升高,PI阳性细胞呈Annexin V阳性,提示热疗导致的细胞死亡以细胞凋亡为主,PI阳性的细胞为凋亡终末期,细胞膜通透性增加所致。同时大部分收缩变圆的细胞中,Caspase-3和Annexin V呈共同阳性,提示热疗可能通过Caspase途径介导细胞凋亡。结论 本研究明确了热疗可以抑制星形胶质细胞癌U251细胞系的细胞增殖并诱导Caspase途径相关的凋亡。     

双氢青蒿素联合奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡的影响北大核心CSCD

研究双氢青蒿素(DHA)与奥沙利铂(L-OHP)联合对人结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡的影响,初步探讨凋亡的作用机制。运用MTT法检测不同浓度DHA、L-OHP及DHA与L-OHP联合对HCT116细胞的抑制作用,计算DHA与L-OHP是否发挥协同作用。实验结果显示DHA与L-OHP均对HCT116细胞增殖有抑制作用,二者联合在一定浓度下发挥协同作用。应用Annexin V-FITC/PI双染检测药物联用后细胞凋亡情况,结果显示联合组比DHA组和L-OHP组凋亡率提高(P <0. 01)。通过检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax含量及casepase-3、casepase-8活性发现,与单药组比较DHA、L-OHP联合组Bcl-2/Bax降低,casepase-3、casepase-8活性提高(P <0. 01)。研究结果表明DHA与奥沙利铂联合能够显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,在一定浓度下发挥协同作用,且能诱导细胞凋亡,其机制可能与加重DNA损伤,下调Bcl-2/Bax,激活casepase-3、casepase-8有关。     

局部热疗联合替吉奥及奥沙利铂治疗胃癌腹腔转移的疗效观察

目的:评价局部热疗联合替吉奥及奥沙利铂治疗胃癌腹腔转移的疗效、患者生存质量及不良反应。方法:选择2011年1月-2016年1月来我院就诊的82例胃癌腹腔转移患者,随机分为观察组和对照组各41例。对照组采用替吉奥及奥沙利铂治疗,观察组在此基础上加用局部热疗,疗程为4周,治疗后对比两组患者的疗效、生存质量及不良反应情况。结果:治疗后,两组均有一定疗效,观察组的有效率为58.5%,明显高于对照组的31.7%,差异具有统计学意义(P0.05);观察组的生存质量提高率为73.2%,明显高于对照组的48.8%,差异具有统计学意义(P0.05);观察组发生呕吐13例,腹泻1例,口腔粘膜炎8例,对照组发生呕吐12例,3例腹泻,口腔粘膜炎9例,差异均无统计学意义(P0.05);观察组白细胞减少7例,对照组15例,差异有统计学意义(P0.05)。结论:局部热疗联合替吉奥及奥沙利铂治疗胃癌腹腔转移的疗效较好,患者生存质量改善,不良反应较轻。     

华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究华蟾素联合顺铂对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡的影响,并探寻联合治疗增敏的可能分子机制。方法:采用不同浓度的华蟾素、顺铂单药和华蟾素联合顺铂处理人骨肉瘤U2OS细胞1-3天,通过CCK-8法检测其对U2OS细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对U2OS细胞集落形成能力的影响;流式细胞仪检测其对U2OS细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting检测Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9等凋亡相关分子mRNA及蛋白水平的表达。结果:单用华蟾素或顺铂均可以浓度和时间依赖的方式抑制骨肉瘤U2OS细胞的增殖并诱导其凋亡,两药联合应用具有协同效应,并可以上调促凋亡基因Bax下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达;联合用药组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9的表达较单药组明显增加。结论:华蟾素联合顺铂与单一用药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞U2OS细胞的增殖,促进其凋亡,两药联合应用对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同效应,其机制可能与激活凋亡通路有关。     

奥沙利铂联合卡培他滨或替吉奥对晚期结肠癌患者血浆miR-21表达的影响

目的:探讨奥沙利铂联合卡培他滨或替吉奥对晚期结肠癌患者血浆微小RNA-21(mi R-21)表达水平的影响及疗效。方法:选择2013年6月至2016年6月我院接诊的90例晚期结肠癌患者,随机分为替吉奥组和卡培他滨组,每组45例。替吉奥组患者采用奥沙利铂联合替吉奥治疗,卡培他滨组患者采用奥沙利铂联合卡培他滨治疗。观察并比较两组患者治疗前后血清白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)及mi R-21水平变化、客观缓解率(ORR)以及不良反应。结果:治疗后,替吉奥组患者血清IL-2,TNF-α及INF-γ水平均高于卡培他滨组,而血浆mi R-21水平低于卡培他滨组,差异具有统计学意义(P0.05);替吉奥组客观缓解率(ORR)高于卡培他滨组,而不良反应总发生率低于卡培他滨组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:与卡培他滨相比,奥沙利铂联合替吉奥治疗晚期结肠癌的效果显著,可有效提高患者免疫力,抑制肿瘤发展,且不良反应较少,值得临床推广。     

热疗联合一氧化氮供体硝酸异山梨酯诱导Hep-A细胞凋亡的研究

研究热疗联合硝酸异山梨酯(Isosorbide dinitrate,ISDN)体外诱导Hep-A细胞凋亡,并探讨其机理.本实验中,应用MTT法检测Hep-A细胞增殖抑制作用;扫描电镜、透射电镜和流式细胞仪观察Hep-A细胞凋亡;Westernblot法检测Bcl-2蛋白表达.结果显示,热疗组、ISDN组和热疗联合ISDN组对Hep-A细胞具有明显增殖抑制作用(p＜0.05),热疗联合ISDN组的抑制作用较其他各组更显著(p＜0.05);电镜观察可见细胞表面微绒毛明显减少或消失、胞膜发泡、细胞固缩和核染色质浓缩边集,并出现凋亡小体.在相同时间点,热疗联合ISDN组诱导Hep-A细胞凋亡率高于ISDN组和热疗组.各实验组均使Bcl-2蛋白表达下调.研究结果提示,热疗联合ISDN诱导Hep-A瘤细胞凋亡有协同作用,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有密切关系.     

姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素、顺铂和姜黄素联合顺铂处理人骨肉瘤细胞MG-63不同时间,通过MTT法检测其对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测其对MG-63细胞凋亡的影响。结果:单用姜黄素或顺铂均可以时间和浓度依赖性方式抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖。与空白对照组相比,单用10μmol/L姜黄素和2、4μmol/L顺铂可抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.05);而与姜黄素和顺铂单用处理相比,10μmol/L姜黄素分别与2、4μmol/L顺铂联合应用,可更显著抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.01)。结论:姜黄素联合顺铂与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞的增值,促进其凋亡,两药对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同性。     

ASPP2增强结肠癌HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

为研究ASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌细胞系HCT116 p53+/+(野生型)凋亡及周期的影响.利用ASPP2（rAd-ASPP2）及p53腺病毒（rAd-p53）感染HCT116 p53+/+细胞,经奥沙利铂50 μmol/L诱导细胞凋亡及周期改变.Western印迹检测ASPP2及p53的表达水平;MTT法检测ASPP2腺病毒对奥沙利铂诱导的HCT116细胞活性的影响;Calcein/PI吸收试验检测细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期分布. 结果显示,ASPP2、p53共同过表达,或者ASPP2单独过表达均能增强奥沙利铂诱导的HCT116 p53+/+细胞增殖抑制,以及S期抑制并伴有细胞凋亡水平的升高;而无奥沙利铂诱导时,ASPP2对HCT116 p53+/+细胞的活性、细胞周期及细胞凋亡水平的影响无统计学意义. 上述结果表明,ASPP2能够增强奥沙利铂诱导HCT116 p53+/+细胞的增殖抑制、细胞周期抑制和细胞凋亡.     

奥沙利铂联合常规化疗治疗晚期结肠癌的临床观察

目的:研究奥沙利铂(L-OHP)联合化疗治疗晚期结肠癌的疗效.方法:选取60例晚期结肠癌患者,随机分为治疗组和对照组,每组各30例,对照组给予常规化疗治疗,治疗组给予L-OHP联合化疗治疗,观察比较两组的疗效和不良反应.结果:治疗组治疗总有效率(53.3％)显著高于对照组(36.7％)(P＜0.05);治疗组中初治患者治疗有效率(63.2％)显著高于复治患者(36.3％)(P＜0.05),也显著高于对照组中的初诊患者治疗有效率(38.9％)(P＜0.05).对照组中初治患者治疗有效率(38.9％)和复治患者(30.0％)相当(P＞0.05),复治患者的治疗有效率与对照组复治患者相当(P＞0.05).治疗组白细胞减少和神经毒性的发生率要高于对照组(P＜0.05),而治疗组出现口腔炎的比例低于对照组(P＜0.05),恶心呕吐、腹泻、血小板减少、手足综合征和肾毒性的发生率均相当(P＞0.05).结论:L-OHP联合化疗治疗晚期结肠癌初治患者具有较好的近期疗效和安全性,但其远期疗效和预后尚需进一步研究观察.     

康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养宫颈癌Siha细胞,分别将康莱特(浓度为1,2,4,6,8 mg/mL),顺铂(浓度梯度为1.5,3,6,9,12μg/mL),单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h用噻唑蓝(MTT法)检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测康莱特组和顺铂组细胞24h凋亡率,选取合适的药物浓度(康莱特6 mg/mL,顺铂3μg/mL),进行联合用药,加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果:①MTT法显示加药后两组的24h、48h,宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组(P0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。②联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P0.01)。结论:康莱特、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且康莱特联合顺铂的作用要显著高于单独用药,康莱特与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

UBE2T基因对结直肠细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人类泛素结合酶E2T(Ubiquitin-conjugating enzyme E2T,UBE2T)基因对结肠细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人正常结直肠粘膜细胞FHC,采用将UBE2T基因慢病毒质粒转染至FHC细胞48 h后,通过MTT法检测细胞增殖情况,western blotting检测细胞中增殖相关蛋白UBE2T蛋白、Ki67、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与转染空质粒的FHC细胞相比,UBE2T基因慢病毒质粒转染FHC细胞48 h后,细胞增殖能力显著上调(P0.05),UBE2T蛋白明显增加,Ki67的表达明显增加(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),且Bax的表达明显下调而Bcl-2的表达上调(P0.05)。结论:UBE2T基因能够促进正常结肠粘膜细胞的增殖,并抑制其凋亡。     

去乙酰化酶抑制剂TSA介导Ku70乙酰化对结肠癌HT29细胞凋亡和自噬的影响

目的:探讨不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对结肠癌HT29细胞的增殖、凋亡和自噬影响及其机制研究。方法:取对数生长期人结肠癌HT29细胞,采用MTT法检测不同浓度TSA处理对其细胞活力影响,并根据IC50值确定适宜给药浓度;采用流式细胞术检测不同浓度TSA处理后结肠癌HT29细胞的凋亡情况;Western blot验证空白对照组与TSA给药处理组中凋亡标志蛋白Ku70、acetrl-Ku70、Caspase3、Bax、Bcl-2和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达。结果:MTT法实验结果表明TSA对结肠癌HT29细胞具有时间和浓度依赖性抑制作用,根据IC50=1.12μM,本研究中TSA的给药浓度为0.5μM和1μM;流式细胞凋亡检测结果表明TSA能够显著促进结肠癌HT29细胞凋亡,且其促凋亡作用存在浓度依赖性;此外,Western blot检测结果证实,与空白对照组相比,TSA给药处理可显著上调上述细胞中acetrl-Ku70以及促凋亡蛋白Caspase3、Bax和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)的体外抗结肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡和自噬作用与其上调Ku70蛋白乙酰化密切相关,有望成为临床潜在抗癌靶点。     

KANK1对子宫内膜癌细胞增殖及迁移的影响

摘要 目的：研究KANK1在子宫内膜癌中的表达以及对子宫内膜癌细胞增殖及迁移的影响。方法：（1）TCGA数据库分析KANK1在子宫内膜癌中的表达和生存期分析。（2）采用实时荧光定量聚合酶链反应验证转染KANK1质粒的效果。采用Ishikawa和ECC1这两种子宫内膜癌细胞来探讨KANK1对子宫内膜癌的细胞周期和凋亡的影响。通过Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达,以及流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平。（3）通过Transwell小室实验和划痕实验检测细胞的侵袭和转移能力。结果：TCGA数据库分析发现KANK1在子宫内膜癌中低表达且与患者预后良好相关。过表达KANK1下调了Cyclin D1和Cyclin D2的蛋白水平,并将细胞周期阻滞在G1期。流式细胞术检测发现过表达KANK1组的细胞凋亡水平（Ishikawa：22.7%;ECC1：19.0%）比对照组（Ishikawa：18.1%;ECC1：15.3%）高,差异具有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验结果表明过表达KANK1组的子宫内膜癌细胞侵袭和转移能力减弱。结论：本研究证明了KANK1在子宫内膜癌中发挥抑癌作用。KANK1高表达与子宫内膜癌的预后良好成正相关。KANK1通过抑制癌细胞周期和促进肿瘤细胞凋亡发挥抑制子宫内膜癌增殖的作用。此外,KANK1抑制了子宫内膜癌的侵袭和转移。     

microRNA-145表达对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨微小核糖核酸145(micro RNA-145)表达对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法:实验室常规培养宫颈癌Hela细胞并分为4组,空白(Blank)组(Hela细胞+RPMI1640)、micro RNA-145组(Hela细胞+RPMI1640+micro RNA-145-5p mimics)、阴性序列(NC)组(Hela细胞+RPMI1640+NC)、Mock组(Hela细胞+RPMI1640+Lipofectamine 2000),记录各组Hela细胞转染率,采用实时荧光定量聚合酶链锁反应(QRT-PCR)检测各组Hela细胞中micro RNA-145的表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Hela细胞增殖情况,采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法判断Hela细胞凋亡情况。结果:本研究中,各组Hela细胞转染率均80%;micro RNA-145组micro RNA-145的表达显著高于Blank组、NC组和Mock组,差异有统计学意义(P0.05)。转染24 h、48 h、72 h后,micro RNA-145组490 nm波长处的光密度值(OD490值)较转染0h后明显降低,转染48 h、72 h后,Blank组、NC组、Mock组OD490值较转染0 h后时明显升高,转染24 h、48 h、72 h后,micro RNA-145组OD490值均低于Blank组、NC组、Mock组,差异有统计学意义(P0.05)。DAPI染色后,micro RNA-145组Hela细胞凋亡率高于Blank组、NC组、Mock组,差异有统计学意义(P0.05)。转染后,Blank组、NC组、Mock组的micro RNA-145表达率、OD490值、DAPI染色后Hela细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:micro RNA-145表达上调可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并促进Hela细胞凋亡,通过药物调控micro RNA-145表达有望成为宫颈癌治疗的新靶点。     

香鳞毛蕨苷提取物E对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究香鳞毛蕨苷提取物E(Fragranoside E)对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法:将体外培养的人肺癌A549细胞分为对照组(0.1%DMSO、100 nM紫杉醇)和实验组,通过CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况;检测乳酸脱氢酶(LDH)水平以探讨Fragranoside E的细胞毒性;透射电镜及流式细胞术检测A549细胞的凋亡情况。进一步采用5mM N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理A549细胞2 h后,采用荧光显微镜观察细胞内ROS的释放情况。结果:CCK8及克隆形成实验结果提示Fragranoside E呈浓度和时间依赖性抑制A549细胞增殖(P0.05);≤40μM Fragranoside E处理A549细胞对其LDH的释放无显著影响(P0.05);而40μM Fragranoside E可诱导A549细胞凋亡,细胞内ROS升高,NAC(5 m M)预处理2 h后,细胞内ROS(112.6%±12.3%)较Fragranoside E处理组显著降低(P0.05)。结论:Fragranoside E能够抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,其抗肿瘤活性可能与细胞内ROS释放有关。     

MMPs抑制剂对结肠癌细胞凋亡、免疫功能及炎性因子的影响

摘要 目的：探究基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）抑制剂对结肠癌细胞凋亡、免疫功能及炎性因子的影响。方法：取SW480结肠癌细胞,随机分为低表达组（将MMPs抑制剂慢病毒质粒与SW480细胞混合培养）,空白对照组（SW480细胞与慢病毒包装质粒混合培养）。采用流式细胞法、免疫细胞化学法、酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法、实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR）法、Hoechst 33258 荧光染色法检测SW480细胞凋亡,TNF-α、IL-6蛋白阳性表达、免疫球蛋白表达水平、MMP-9 mRNA表达量。结果：空白对照组与低表达组相比较,低表达组SW480细胞内MMP-9 mRNA表达量显著下降(P<0.05),说明转染成功。与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞凋亡数量显著上升(P<0.05)。低表达组细胞的细胞核出现核固缩的概率显著高于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞IL-2表达水平显著升高（P＜0.05）,IL-4、TGF-β1、TIM-1表达水平显著降低（P＜0.05）。SW480细胞内的MMP-9 mRNA与IL-2呈现负相关性（r=-0.723,P=0.007）,MMP-9 mRNA与IL-4、TGF-β1及TIM-1均呈现负相关性（均P＜0.05）。空白对照组SW480细胞中TNF-α、IL-6蛋白阳性数最高,低表达组SW480细胞中TNF-α、IL-6蛋白阳性数最低,与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞中TNF-α、IL-6阳性数显著下降(均P<0.05)。结论：MMPs抑制剂可促进SW480细胞凋亡,改善免疫功能,降低炎性介质的表达水平。     

卵巢癌细胞中MTDH-PTEN互作对奥沙利铂耐药性的影响及机制

摘要 目的：探究卵巢癌细胞中MTDH-PTEN互作对奥沙利铂耐药性的影响及机制。方法：人卵巢癌细胞系通过慢病毒感染,将其分为对照组、NC-shRNA组和MTDH-shRNA组。通过RT-PCR分析不同组细胞MTDH和PTEN mRNA表达。通过MTT测定法测定细胞活力。通过CCK-8检测奥沙利铂诱导下的细胞增殖。通过膜联蛋白V染色细胞凋亡测定细胞凋亡。通过流式细胞仪分析细胞周期。通过Transwell试验检测细胞迁移和侵袭。通过流式细胞仪分析细胞周期。通过共免疫沉淀分析MTDH和PTEN的互联作用。结果：MTDH-shRNA组MTDH mRNA表达较NC-shRNA组和对照组降低（P<0.05）,MTDH-shRNA组PTEN mRNA表达较NC-shRNA组和对照组升高（P<0.05）。当未添加奥沙利铂（浓度为0 μM）,各组细胞活力比较无差异（P>0.05）。当奥沙利铂浓度为2 μM、4 μM和8 μM时,MTDH-shRNA组细胞活力较NC-shRNA组和对照组降低（P<0.05）。0 h,各组细胞增殖比较无差异（P>0.05）,第24 h、48 h和72 h时,MTDH-shRNA组细胞增殖较NC-shRNA组和对照组降低（P<0.05）。MTDH-shRNA组细胞凋亡率较NC-shRNA组和对照组升高（P<0.05）。MTDH-shRNA组G1期细胞占比较NC-shRNA组和对照组升高（P<0.05）,MTDH-shRNA组S/M期细胞占比较NC-shRNA组和对照组降低（P<0.05）。MTDH-shRNA组细胞迁移和侵袭数量较NC-shRNA组和对照组减少（P<0.05）。结论：MTDH在卵巢癌细胞中与PTEN共表达并与可与PTEN相互作用,因此可通过抑制MTDH表达、诱导PTEN表达可以恢复对卵巢癌细胞对奥沙利铂的药物敏感性。     

Neuroligin对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Neuroligin(NLG)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响。方法:体外培养SH-SY5Y细胞24 h后,分别用浓度为50,100,200μmol/L的NLG siRNA转染SH-SY5Y细胞并共孵育24 h,然后采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度NLG siRNA对SHSY5Y细胞增殖率的影响,以及Real-time PCR法检测SH-SY5Y细胞中凋亡基因Bax、Bcl-2、Bcl-x L和caspase-9基因表达水平的变化。结果:与空白对照组及siRNA阴性对照组相比,转染NLG siRNA后SH-SY5Y细胞增殖率显著下降,细胞凋亡相关基因被激活,导致细胞凋亡。结论:NLG对神经元细胞具有保护作用,抑制神经细胞凋亡。     

LNCRNA FAR2P1对乳腺癌细胞增殖迁移和凋亡的影响研究

摘要 目的：探讨新型 LncRNA FAR2P1在乳腺癌发生发展中的作用和影响。方法：癌症基因组图谱（The cancer genome atlas, TCGA, https://portal.gdc.cancer.gov/）数据库分析LncRNA FAR2P1差异表达量。根据169例LncRNA FAR2P1高表达的乳腺癌患者和1180例LncRNA FAR2P1 低表达患者随访资料,分析LncRNA FAR2P1与乳腺癌患者预后的相关性。首先利用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA FAR2P1在乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、SKBR3）和乳腺正常上皮细胞（MCF-10A）中的表达水平;转染小干扰（si-RNA）获得低表达 FAR2P1的细胞株, Cell Counting Kit-8（CCK8）实验、EDU实验、克隆形成评估细胞增殖活力,Transwell 实验探究 FAR2P1 对细胞迁移的影响;通过流式分析FAR2P1 是否调节细胞凋亡;体内异种成瘤模型评估 FAR2P1 在体内对乳腺癌增值的调节作用。结果：LncRNA FAR2P1在MDA-MB-231、SKBR3中表达显著升高,并且与乳腺癌患者预后负相关。体外实验表明,敲低MDA-MB-231和SKBR3细胞中的 FAR2P1 后,细胞的增殖能力和迁移能力减弱,但是凋亡率明显升高。体内异种成瘤模型显示沉默 FAR2P1相比对照,乳腺癌细胞增殖能力显著降低。结论：LncRNA FAR2P1 在乳腺癌中高表达,并且参与调控乳腺癌增殖、凋亡和迁移。