镉诱导金属硫蛋白在华溪蟹组织中的表达

采用体外暴露染毒法,研究了不同浓度与时间条件下,镉诱导河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)金属硫蛋白(metallothionein,MT)在肝胰腺、肌肉、鳃和卵巢中的表达差异。镉浓度分别为0、14·5mg/L、29mg/L和58mg/L;处理时间依次为1d、3d和5d。利用镉血红蛋白饱和法和火焰原子吸收分光光度法(AAS)测定MT的蛋白含量。结果显示,用不同的染毒浓度和处理时间,镉在组织中诱导产生MT的含量有较大差异,其中肝胰腺MT的诱导量最大,变化规律也最明显;肌肉中也有较大量MT的表达;而鳃和卵巢MT的诱导量均较低。此外,本文分析了镉的浓度与时间梯度对诱导MT表达的影响与毒性效应机制。结论:组织不同,染毒浓度及时间不同,镉诱导MT的表达也不同,具有一定的组织差异性和规律性。     

镉对河南华溪蟹卵黄磷蛋白在卵巢中表达含量的影响及ELISA法的建立

为了探究镉对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)的卵子发生的影响,通过凝胶过滤层析法纯化了成熟卵巢中的卵黄磷蛋白(Vitellin,Vn),采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定了Vn亚基数量及分子量,以纯化的Vn为抗原制备了Vn多克隆抗血清并建立了可靠的Vn含量测定的ELISA方法。采用氯化镉体外亚慢性染毒的方法,运用Vn-ELISA方法检测镉暴露对卵巢组织中Vn含量的影响。实验设对照组和5.8 mg/L镉处理组,处理时间分别为10、15和20d。结果显示,(1)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明该蛋白由分子量为102、84和70 k D的3个亚基组成,同时Western-blotting检测表明,抗血清对该蛋白具有较强的免疫特异性;(2)在Vn-ELISA中,Vn抗体最佳稀释倍数为1︰100000,该方法的工作浓度范围为125—2000 ng/m L,定性检测的灵敏度可达到15.62 ng/m L;卵巢中Vn含量测定的结果中各批次间没有显著差异,且平均变异系数分别仅为7.81%,表示该法具有较高的稳定性和重复性;(3)镉引起卵巢组织中Vn含量的显著降低,与镉处理时间具有时间-效应关系,说明了镉暴露可影响河南华溪蟹卵母细胞的成熟并对卵子发生产生抑制作用,进而影响卵巢的正常发育。     

镉对河南华溪蟹副性腺抗氧化酶活性及脂质、蛋白质和DNA的影响

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病毒感染和免疫清除中的C型凝集素

树突状细胞和朗罕氏细胞是人体防御病毒入侵的第一道屏障,这些细胞表达的C型凝集素对于细胞发挥抗原免疫清除和细胞之间的黏附有重要作用。其中DC—SIGN和DC—SIGNR在HIV等多种病毒的感染中发挥重要作用。随着基因组学的发展鉴定了许多新的C型凝集素,它们在免疫清除和病毒感染中都可能发挥重要作用。     

C型凝集素受体与抗真菌免疫

Toll样受体(TLR)的发现为研究病原生物的识别和免疫应答的起始开辟了新的视角,然而近期研究发现"非-TLR"受体在该过程尤其在抗真菌免疫中亦起着重要作用.其中研究甚为活跃的是C型凝集素受体(CLR)家族的一些成员,包括甘露糖受体、DC-SIGN、Dectin-1、Dectin-2及胶原凝集素.本文对这些受体在真菌识别、摄取、杀伤及其在宿主免疫反应的诱导和调节中所发挥的作用予以综述.     

一种新型的C型凝集素

美国、荷兰、英国科学家新近鉴定了一种新型的Ｃ型凝集素———树突细胞特异性、胞间粘附分子 (ＩＣＡＭ)可获取的非整联蛋白 (ＤＣ ｓｐｅｃｉｆｉｃＩＣＡＭ ｇｒａｂｂｉｎｇｎｏｎｉｎｔｅｒｇｒｉｎ) ,简称ＤＣ ＳＩＧＮ(ＣＤ2 0 9) ,它在免疫调节及免疫缺陷病毒致病过程中的作用日益受到重视。1 .ＤＣ ＳＩＧＮ的结构[1～ 3]ＤＣ ＳＩＧＮ是一种Ｃ型凝集素 ,为 40 4个氨基酸的Ⅱ型跨膜蛋白 ,分子量为 45775,Ｎ末端 40个氨基酸位于细胞质 ,跨膜结构域(ＴＭ)为 2 1个氨基酸 (Ｇｌｙ40 ～Ｓｅｒ6 1位个氨基酸残基 ) ,Ｃ末端 3 4 2个氨基…     

镉对长江华溪蟹免疫相关酶活性的影响

采用浸浴法研究了镉(Cd2+)对长江华溪蟹Sinopotamon yangtsekiense免疫系统相关酶的影响.Cd2+处理组浓度分别为7.25 mg/L、14.5 mg/L、29mg/L、58 mg/L和116 mg/L,同时设对照组.分别在Cd2+处理24 h、48h、72 h和96 h取血清进行酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活力测定.结果显示,在相同处理时间,随着cd2+浓度增加,PO和SOD活力均呈现先升后降的趋势,且分别于24 h、7.25 mg/L和96 h、14.5 mg/L时达到最大值.当处理浓度相同、作用时间延长时,ACP活力先升后降,且在48 h、58 mg/L时升至最高,AKP活力则持续上升.表明Cd2+对长江华溪蟹免疫相关酶活力具有不同程度的影响,且其作用和效果具有浓度及时间效应.PO和SOD活力变化能够灵敏反映Cd2+对水生动物的胁迫程度,可作为指示镉污染的生物学指标.     

C型凝集素LSECtin识别细菌的研究

目的:通过sLSECtin-Fc蛋白与细菌及细胞的黏附,寻找能与LSECtin结合的细菌。方法:通过ELISA检测sLSECtin-Fc与细菌的黏附,同时构建CHO-pDsRed1-N1-LSECtin稳定细胞株进行与细菌的黏附实验,荧光显微镜进行镜鉴拍照。结果:获得能够与sLSECtin-Fc蛋白黏附的细菌,并且通过过表达LSECtin的稳定株与细菌的黏附,发现LSECtin可以结合大肠杆菌和肺炎链球菌,而不能结合金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯杆菌。结论:发现LSECtin可以结合细菌,为进一步研究LSECtin在先天免疫中的作用奠定了基础。     

饲料中添加叶酸和VB12对中华绒螯蟹幼蟹生长、非特异性免疫和抗病力的影响

为研究叶酸和VB12协同作用对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹生长、非特异性免疫和抗病力的影响,选取初始体重为(2.570.03) g的幼蟹600只,随机分成4组,每组5个重复,每个重复30只幼蟹,分别投喂对照组(不添加叶酸和VB12),单一VB12组(0.2 mg/kg),单一叶酸组(2.3 mg/kg)和联合处理组(0.2 mg/kg VB12 +2.3 mg/kg叶酸)的饲料8周。在养殖实验结束后,先统计成活率和称重,然后从每个处理组随机选取30只幼蟹,用2108 CFU/mL的嗜水气单胞菌注射攻毒2周。实验结果表明:幼蟹的增重率、特定生长率、饲料效率和存活率在联合处理组最高,显著高于对照组(P0.05),但与单一叶酸或VB12组相比不存在显著差异(P0.05)。联合处理组的血清酚氧化酶活性显著高于对照组(P0.05),但与单一叶酸或VB12组也无显著性差异(P0.05)。同时,联合处理组的血清酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌酶活性和血细胞总数等指标最高,其次是单一叶酸组和VB12组,而对照组最低。投喂联合处理组饲料幼蟹的肝胰腺超氧化物歧化酶活性最高,而丙二醛含量和累积死亡率最低。以上结果表明,叶酸和VB12对幼蟹的生长、生理代谢和免疫性能均可能有互补和协同作用,养殖生产中建议饲料中叶酸和VB12添加量分别为2.3 mg/kg和0.2 mg/kg。       

菌胁迫对近江牡蛎子代母源C型凝集素mRNA表达及抗菌影响

为了揭示近江牡蛎（Crassostrea rivularis）C型凝集素（C-type lectin,CTL）母源免疫在子代胚胎发育早期过程中的免疫防御影响,文章运用荧光定量PCR、人工促排、免疫相关酶活测定等实验,开展了菌胁迫近江牡蛎子代母源CTL m RNA表达及抗菌影响。结果表明：近江牡蛎子代胚胎发育早期可检测到母源CTL转录本,母贝分别在不同菌刺激后,其子代在受精卵、32细胞期、桑葚期、囊胚期CTL m RNA相对表达均出现不同程度的升高,与相应空白组比较差异显著（P<0.05）;其子代在受精卵期、32细胞期的Cu/Zn-SOD活力和抑菌活性显著高于相应空白组（P<0.05）;其子代在原肠胚期、担轮幼虫期累计死亡率均显著低于空白组（P<0.05）。结论：该近江牡蛎CTL具有母源免疫传代和子代免疫时效,当母源受到适当的免疫刺激可以增加其子代胚胎发育早期对相同病原感染的免疫防御能力。     

镉对长江华溪蟹精子发生的影响

分别于1999年3－5月和10－12月,利用透射电镜方法,按1.5μg/g体重的剂量体腔注射Cd^2 于长江华溪蟹（Sinopotamon yangtsekiense)体内,在10min至24h之间的若干时间段取材,观察精子发生过程中不同发育阶段生殖细胞的变化。结果表明：镉注射后0.5h,各级生精细胞就开始出现超微结构的变化,主要表现为线粒体肿胀与空泡化,高尔基体变形,内质网扩张和膜结构损伤等。其中线粒体损伤出现最早,是最易受损伤的一个敏感细胞器。     

镉对长江华溪蟹肝胰腺线粒体抗氧化酶活力和脂质过氧化水平的影响

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长江华溪蟹卵子发生的细胞化学研究

利用细胞化学的方法,对长江华溪蟹卵子发生过程中,核酸、蛋白质、糖类及脂类的变化进行了研究,结果表明：核酸从卵原细胞到卵母细胞的发育进程中逐渐分散;蛋白质的量不断增加;脂类物质也在慢慢积累,伴随着发育,在成熟的卵母细胞质内充满ＰＡＳ阳性反应的卵黄颗粒。     

镉对长江华溪蟹心肌细胞超微结构的影响

应用透射电镜方法,研究了镉在24h内对长江华溪触心肌细胞超微结构的影响。结果表明：注射镉后0.5h,心肌细胞超微结构即出现变化,且随着时间的延长,变化渐趋明显,主要表现在细胞核和线粒体。细胞核核膜肿胀、弥散、最后解体。线粒体嵴部分解体、直至全部解体;线粒体内室部分肿胀、明显肿胀、直至高度肿胀。此外,溶酶体的数量和类型随镉处理时间的延长而增多,肌原纤维出现断裂。     

Cd2+对三角褐指藻生长及尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因表达调控的影响

为了探究Cd2+对三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)生长及尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)基因表达调控的影响,研究以不同浓度Cd2+处理三角褐指藻,测定其生长、叶绿素荧光参数、UGP基因转录水平、UGPase活性和金藻昆...     

镉、汞暴露在中华绒螯蟹卵巢中的富集及其氧化应激反应

研究以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为实验对象, 用不同浓度的Cd2+ 溶液(0、0.63、1.26、2.52、5.04和10.07 mg/L)或Hg2+ 溶液(0、0.06、0.11、0.23、0.46和0.91 mg/L)对其分别进行染毒, 6d后解剖取其卵巢, 检测卵巢中Cd和Hg的富集量以及氧化应激相关指标的变化情况。结果显示, 随着Cd2+或Hg2+染毒浓度的升高, 卵巢中Cd和Hg的富集量显著增加; H₂O₂、MDA和NO含量、MT mRNA表达量及NOS活性均随着Cd2+和Hg2+浓度的增加出现上升的趋势, 但SOD、CAT和GPx活性呈先升后降的趋势。这说明镉、汞均可引起卵巢组织产生过量的自由基和脂质过氧化, 并诱导氧化应激酶及MT mRNA的表达以抵抗不良的环境。总之, MT对中华绒螯蟹卵巢中重金属的解毒发挥着重要作用, 抗氧化酶能有效地消除活性氧自由基(ROS), 维持机体的氧化还原处于平衡状态, 共同保护膜脂免受氧化损伤。     

酵母葡聚糖衍生物对凡纳滨对虾血细胞免疫反应的影响

酵母葡聚糖是水产养殖中使用最广泛的免疫增强剂之一,但其不溶解性不利于其免疫增强作用的发挥。为了增加酵母葡聚糖的溶解性,研究共制备了8种酵母葡聚糖衍生物,即4种不同取代度的羧甲基葡聚糖和磺乙基葡聚糖。将葡聚糖和其8种衍生物分别按照5、25和100 g/mL的浓度分别添加到原代培养凡纳滨对虾血细胞的培养液中。以空白血细胞作为对照。孵育6h、12h和24h后分别取样,测定血细胞的酚氧化酶和呼吸暴发活力。结果表明,在6h时,所有葡聚糖衍生物处理组的酚氧化酶活力均显著高于相同浓度下的未衍生葡聚糖处理组（P0.05）。而25 g/mL酵母葡聚糖衍生物处理组的呼吸暴发活力显著高于同浓度未经衍生葡聚糖处理组（P0.05）。在12h时,所有酵母葡聚糖衍生物处理组的酚氧化酶和呼吸暴发活力均显著高于未衍生葡聚糖处理组（P0.05）。在6h和12h时,同浓度各葡聚糖衍生物处理组的血细胞酚氧化酶和呼吸暴发活力并无显著差异（P0.05）。研究结果表明,羧甲基葡聚糖和磺乙基葡聚糖均比未衍生葡聚糖具有更强的免疫促进作用,而且这种免疫促进作用在两种衍生物之间没有显著差异;另一方面,酵母葡聚糖衍生物的免疫促进作用与其使用浓度有关,而与其取代度没有明显的关系。       

拟穴青蟹两种新C-型凝集素基因的克隆与表达分析

为研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中C-型凝集素(C-lectin)的功能, 从其肝胰腺中克隆获得全长858 bp和598 bp的两个C-型凝集素分子, 分别命名为Sp-lectin3和Sp-lectin4, 其推导的氨基酸序列含有信号肽和一个CRD, 其中Sp-lectin4还具有糖类结合的特征性基序QPD。Sp-lectin3和Sp-lectin4的开放阅读框分别由5个和4个外显子编码。在正常养殖青蟹的肝胰腺中该两个基因表达量最高, 其次是射精管(Sp-lectin3)或肠(Sp-lectin4); 除脑和储精囊外的所检测组织/器官中, Sp-lectin4表达量均高于Sp-lectin3。随着胚胎的发育, 该两个基因表达量逐渐升高, 峰期为溞状幼体, 而大眼幼体期的表达量急剧下降, 仔蟹期再回升; 在胚胎发育阶段除囊胚期外, Sp-lectin4表达量极显著高于Sp-lectin3(P0.01), 相反, 在胚后发育阶段除大眼幼体II期外, Sp-lectin3表达量却极显著高于Sp-lectin4(P0.01)。副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus) 人工感染, 可诱导Sp-lectin3在储精囊和射精管中的表达, 分别在感染后12h和6h显著上调(P0.05); 同时, 可诱导Sp-lectin4在肝胰腺中的表达, 并在感染后12h和18h显著上调(P0.05)。结果表明, Sp-lectin3和Sp-lectin4可能参与拟穴青蟹的抗细菌感染免疫反应, Sp-lectin3侧重于生殖系统如射精管和储精囊中发挥作用, 而Sp-lectin4侧重于在肝胰腺。       

镉对大鼠心肌细胞毒作用的实验研究

本文用组织化学、电镜、能谱分析及血镉测定等方法研究了低浓度镉对大鼠心肌细胞的毒作用。大鼠经饲料染镉12周,血镉浓度达5.42±0.65μg/L(对照组为1.01±0.38μg/L)。染镉组大鼠心肌细胞出现镉的频谱峰,LDH活性下降,但SDH活性增强,图像分析显示该两种酶活性的改变皆与各自的对照组差异有非常显著性意义(P<0.001)。肌球蛋白ATP酶活性也较对照组有所下降。电镜下,染镉大鼠心肌细胞部分肌节变短,肌丝紊乱、断裂、密度降低,失去A及I带的排列规则,Z盘增宽。线粒体成堆地聚集在肌丝区之间或肌膜下,部分出现肿胀、嵴断裂、甚至变成含有絮状物的大泡。以上结果提示低浓度镉对大鼠心肌细胞有毒作用。