TRAF4调控人结直肠癌细胞增殖的机制研究

目的:研究TRAF4影响结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:MTS和软琼脂集落形成实验检测基因沉默TRAF4后对结直肠癌细胞生长及相关信号通路的影响,检测TRAF4表达下调后结直肠癌细胞的糖酵解变化及己糖激酶II的表达和结直肠细胞对5-Fu的敏感性。结果:基因沉默TRAF4抑制结直肠癌细胞的停泊依赖和停泊非依赖增殖,抑制EGF诱导的Akt活化,下调结直肠癌细胞糖酵解,抑制己糖激酶II的表达,增加结直肠癌细胞对5-Fu的敏感性。结论:TRAF4通过调控糖代谢影响结直肠癌细胞增殖。     

香菇Latcripin-8蛋白诱导HepG-2细胞凋亡的机制研究

目的 探讨香菇Latcripin-8蛋白对HepG-2肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法 运用倒置显微镜、透射电镜、吉姆萨染色法和流式细胞仪法对细胞凋亡进行检测。采用Western blot法检测JAK3、STAT3和P53等凋亡相关蛋白的表达水平。采用Caspase-8活性检测盒检测Caspase-8活性。结果 HepG-2细胞经Latcripin-8蛋白作用后,倒置显微镜、透射电镜和吉姆萨染色等检测显示在形态学上Latcripin-8蛋白结构域抑制HepG-2细胞生长,并伴有凋亡小体产生。流式细胞仪检测显示该蛋白诱导HepG-2细胞凋亡。Western blot法检测结果显示JAK3和STAT3等蛋白的表达水平随药物浓度的增加而下降,而P53随药物浓度增加其表达量上升;凋亡相关因子Caspase-8的活性与对照组相比也均有不同程度的提高。结论 香菇Latcripin-8蛋白结构域可能是通过JAK-STAT信号通路来诱导HepG-2肝癌细胞凋亡。     

预热诱导心肌细胞表达Hsp70对Fas通路活化后细胞凋亡变化的研究

目的:研究Hsp70对Fas通路活化后细胞凋亡的作用及其可能机制.方法:水浴预热诱导培养新生大鼠心肌细胞Hsp70表达,Fas抗体活化Fas通路,Western blot测定Hsp70的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,特异性底物测定caspase-8及caspase-3的活力.结果:预热可以使心肌细胞Hsp70表达升高,Fas抗体降低细胞凋亡率,高表达Hsp70可以降低Fas通路活化后心肌细胞凋亡率,同时相应使caspase-8及caspase-3活力升高的幅度降低.结论:Hsp70可能通过抑制caspase-8及caspase-3的活力而降低Fas通路活化后培养新生大鼠心肌细胞凋亡的发生.     

基于Hedgehog信号通路的黄芩苷抗炎性结直肠癌的机制研究CSCD

本文旨在研究黄芩苷调控Hedgehog信号通路抗炎性结直肠癌的机制。不同剂量黄芩苷给予结直肠癌SW620细胞和结直肠癌AOM/DSS小鼠,采用MTT法、Hoechst33342/PI双染法、ELISA、RT-qPCR以及Western blot等多种技术进行检测。结果显示,黄芩苷能够明显抑制SW620细胞增殖且在高剂量和长时间培养情况下对NCM460细胞具有一定抑制作用,同时伴随Caspase-9和Caspase-3活性的增加。此外,黄芩苷抑制细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,降低Hedgehog信号通路SHH、SMO以及Gli1相关mRNA和蛋白的表达水平,同时提高SUFU mRNA和蛋白的表达水平。在AOM/DSS结直肠癌小鼠中,黄芩苷降低组织IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,同时抑制Hedgehog信号通路SHH、SMO以及Gli1相关蛋白的表达水平,提高SUFU蛋白的表达水平。上述结果提示,黄芩苷能够抑制SW620细胞的增殖、克隆以及诱导细胞凋亡,同时降低细胞和组织中炎症因子的表达水平,其机制可能涉及对于Hedgehog信号通路的抑制。     

RANBP9调控结直肠癌细胞凋亡的信号通路分析

RANBP9是RAS超家族成员RAN的一种结合蛋白,参与多种肿瘤的发生发展。为探索它对结直肠癌细胞凋亡的调控作用,该研究利用慢病毒感染结直肠癌HCT116、HT29细胞的方法,建立RANBP9-shRNA稳转细胞系,经氟尿嘧啶诱导凋亡后利用流式细胞仪和caspase-2酶活力实验检测细胞凋亡;抽提实验组和对照组HCT116细胞总RNA,经质检合格后进行基因表达谱芯片实验,筛选出RANBP9敲减前后结直肠癌细胞的差异表达基因并进行定量PCR验证,基于Gene Ontology数据库进行分子功能注释,基于Ingenuity Pathway Analysis数据库进行通路分析。流式细胞分析显示,在HCT116和HT29细胞中RANBP9-shRNA均促进氟尿嘧啶诱导的细胞凋亡;基因芯片数据分析得到差异表达mRNAs 857个(|Fold Change|1.5且FDR0.05),其中上调表达677个,下调表达180个,涉及的分子功能主要包括γ-谷氨酰转移酶活性、钙离子结合、胰岛素受体结合、病毒受体活性、GTP酶活性、细胞外基质结合、β-连环蛋白结合、SMAD结合、转录调节、AMP活化蛋白激酶活性、蛋白质转运蛋白活性、细胞骨架结合等,其显著参与的信号通路主要涉及癌症的TGF-β、BMP、IL-8和RhoA等。实时定量PCR证实上述通路中的SMAD3、SMAD7、BMP6、BMP7、CXCL8、RAPGEF6的mRNA表达水平在RANBP9-shRNA组中显著高于对照组。综上,RANBP9可能通过多个信号通路来调控结直肠癌细胞的凋亡,该研究为阐明其中的分子机制提供了新的思路。     

STAT3-siRNA对人结直肠癌细胞的干涉作用

目的:研究STAT3-siRNA对STAT3基因表达阳性的结直肠癌细胞凋亡的影响。方法:应用脂质体转染试剂将STAT3-siRNA表达盒(STAT3-siRNA expression cassettes,STAT3-SECs)体外转染至人结直肠癌SW480细胞及人成纤维细胞中,同时分别设立人成纤维对照组、SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组。于48h后收集细胞,先经荧光染色方法观察细胞表象变化,再通过流式细胞仪检测人结直肠癌SW480细胞凋亡情况,后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR测定STAT3基因在mRNA水平的表达。结果:SW480STAT3-SECs组的细胞可见凋亡小体,出现明显的凋亡现象,而人成纤维对照组、人成纤维STAT3-SECs组、SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组未出现明显的凋亡现象。SW480STAT3-SECs组细胞的凋亡比率较SW480对照组、SW480错配链-SECs组和SW480空转染试剂组有明显的增高。RT-PCR所得数据经统计学处理得出:SW480STAT3-SECs组细胞的STAT3基因表达在mRNA水平上显著低于SW480对照组(P0.01);而人成纤维对照组与人成纤维STAT3-SECs组,SW480细胞对照组与SW480错配链-SECs组、SW480空转染试剂组之间无明显差异(P0.05)。结论:应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人结直肠癌SW480细胞中STAT3的表达,诱导细胞的凋亡。     

山柰酚通过线粒体凋亡通路诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

本文旨在探讨山柰酚对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能的分子机制。用不同浓度的山柰酚处理细胞,CCK-8法检测山柰酚对MDA-MB-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A活力的影响,倒置显微镜观察各组细胞形态变化,克隆形成法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的改变,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的活性。结果显示,山柰酚体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且对正常乳腺上皮细胞活力无影响,降低细胞线粒体膜电位,上调Bax、Cyt C的表达,下降Bcl-2和Cyclin D1的表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性。结果表明,线粒体凋亡信号通路的激活是山柰酚诱导MDA-MB-231细胞凋亡的途径之一。     

敲除Usp13促进棕榈酸诱导的小鼠肝实质细胞凋亡*

目的: 研究去泛素化酶Usp13对棕榈酸诱导的肝实质细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探究。方法: 两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝实质细胞并采用棕榈酸处理;甘油三酯酶法及油红O染色检测肝实质细胞中脂质的累积;MTS和LDH试剂盒检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;qPCR检测凋亡相关基因的表达以及免疫印迹法检测Caspase-3的活化。结果: 敲除Usp13基因并不影响棕榈酸诱导下肝实质细胞的甘油三酯累积,但导致细胞损伤加重,凋亡增加。机制研究显示,敲除Usp13促使肝实质细胞中抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl表达下调,促凋亡基因Bid、p53表达上调,以及Caspase-3活化增强。结论: 初步揭示了Usp13调控棕榈酸诱导下肝实质细胞凋亡的机制,为深入研究Usp13调控非酒精性脂肪性肝炎的发生、发展奠定了基础。     

利用FRET技术实时研究顺铂诱导的Caspase-9活化

该研究旨在在活细胞内研究顺铂诱导Caspase-9活化的动态过程.实验样品经顺铂处理后,应用基于FRET原理设计的荧光探针pSCAT-9来检测Capase-9活化的动态过程.结果表明:在顺铂诱导细胞凋亡的后期,可以明显检测到Caspase-9的活化,且其进程快,约30 min即可完成.研究表明,应用FRET技术,可以在活细胞内实时、直观、可视地研究顺铂诱导的Capase-9活化,从而客观地反映Caspase-9在该凋亡信号通路中的动态行为及时空传递特性.     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Cause of Senescence of Nine Sorts of Flowers

The levels of endogenous phytohormones and respiratory rate in nine sorts of flowers such as Cymbidium faberi Rolfe, Nopalxochia ackermannii Kunth and others were investigated both at full bloom and senescence and meanwhile the effect of exogenous phytohormones on prolonging the blossoms and promoting ethylene production were tested. There is a high content of endogenous ethylene in all the long-lived flowere, about 3–16 folds higer than the short-lived ones. There is a high level of ABA at full blooming flowers of short-lived flowers, in which there is no or only some cytokinins in it, but the ratio of CTK (6BA+zeatin)/ABA is smaller(l.7). The endogenous ABA reached a much higher level at senescence in all nine sorts of flowers, so it is reasonable to consider that it is ABA which plays an important role of regulation in controlling flower's senescence. There is a much higher level of GA3 and zeatin in the long-lived flowers which is not demonstrated in the shortlived ones. The respiratory rate is one of the factors controtling the longevity of flowers, but it does not play a decided role. Application of 6BA and zeatin prolongs distinctly orchid’s longevity, however exogenous IAA through the promotive action on ethylene production, evidently extends the longevity of the flowers of the Nopalxochia ackermannii Kunth.     

真菌类遗传学分析的知识结构教学

本文以认知结构理论为指导,讨论了真菌类遗传分析与高等动植物遗传分析的内在联系,认为利用这种内在联系进行教学可收到好的效果并说明了作者的具体教学过程。 Abstract:In the paper, the relationship between genetic analysis of Fungi and genetic analysis of high animal and plant was discussed.A good results were obtained when we adopted this method in the teaching.     

医疗机构合理用药评价模型的构建研究

目的 针对医疗机构的合理用药水平进行评价研究。方法 根据医疗机构合理用药的具体要求,构建医疗机构合理用药评价指标体系,采用基于模糊群决策的方法和多指标评价分析法构建医疗机构合理用药评价模型。结果 构建了基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型,并通过实例分析证明了评价模型的可行性。结论 建立的基于模糊群决策的医疗机构合理用药评价模型能够对医疗机构的合理用药水平进行科学评价,为提高医疗机构合理用药水平奠定基础。     

棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。     

龙胆科药用植物化学成分的研究现状

龙胆科植物在我国的分布范围很广,且多数为药用植物,其多数种属的药用植物,至今其化学成分尚未被系统研究。综述了目前龙胆科药用植物的化学成分的研究现状及一般提取方法,对近年来发现的环烯醚萜及裂环烯醚萜类化合物进行了总结,为本科药用植物的更深入研究提供了参考。     

青蒿素生物合成机理研究现状

本文总结了目前有关青蒿素生物合成机理方面的研究,主要包括青蒿素生物合成中生理因子的影响,青蒿素生物合成中间体及前体,青蒿素生物合成细胞定位等。指出了存在的一些问题及今后的研究发展前景。