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1.
天花粉蛋白诱发白血病细胞K562凋亡的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS),是一种从栝楼块根内提取的核糖体失活蛋白,具有流产、抗肿瘤和抗HIV等多种生物活性。本文利用FACS检测到天花粉蛋白可使K562白血病细胞产生明显的凋亡小峰、DNA区带电泳成典型的“梯状”条带,电镜检测可观察到明显的细胞凋亡形态。这些结果表明天花粉蛋白可以诱发K562白血病细胞产生凋亡。 相似文献
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BCR-ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病的基础。其中,BCR-ABL只能定位于细胞浆、不能易位至细胞核是其致病的关键因素。因此,转运BCR—ABL入核可能是治疗CML的潜在方法。该研究利用基因重组技术,构建HA-2FKBP-ABD(HF2A)和FLAG-3NLS—FRB*(FN3R)重组腺病毒,与雷帕霉素类似物(Rapamycin analog)同组成FKBP-RAP-FRB系统,转运K562细胞胞浆中的BCR—ABL癌蛋白至细胞核,并探究其对K562细胞增殖的影响。结果显示,成功构建了高滴度的重组腺病毒,Westernblot证实目的蛋白在K562细胞内成功表达。FKBP—RAP—FRB系统可通过转运BCR—ABLA入核。抑制K562细胞生长和克隆形成的能力。结果揭示,FKBP-RAP—FRB系统转运BCR—ABL入核有望为CML提供新的治疗手段。 相似文献
3.
三氧化二砷对K562细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:以As2O3作为耐药逆转剂,用台盼兰排染法,噻唑兰(MTT)还原法,Hoechst 33342和PI荧光染色法,流式细胞仪技术和荧光分光光度法,观察了不同浓度的As2O3(0.2—5.0μmol/L)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。结果:As2O3对K562细胞具有明显生长抑制和凋亡诱导作用,其作用强度在一定范围内均具药物浓度和时间依赖性。结论:As2O3主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其毒性作用。 相似文献
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5.
探讨蛋白酶体抑制剂MG132 在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用.分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132 处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用Annexin Ⅴ和PI 双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS) 水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase- 3活性变化的情况.结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5 %;同时,ROS 水平和caspase- 3活性明显升高.因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡. 相似文献
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《生命科学研究》2017,(2):125-129
为了构建过表达锌指转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因的重组质粒pEGFP-KLF4,观察其在白血病K562细胞中的表达,以RT-PCR法扩增人KLF4基因,构建pEGFP-KLF4重组质粒;经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-KLF4质粒电穿孔转染白血病K562细胞(K562/pEGFP-KLF4组),设pEGFP-C1空质粒转染K562细胞(K562/pEGFP-C1组)及空白K562细胞作为对照,荧光显微镜观察EGFP-KLF4融合蛋白的表达情况,同时用抗生素G418筛选阳性克隆并扩大培养建立稳定过表达KLF4基因的K562细胞株,随后用RT-PCR检测3组K562细胞中KLF4的m RNA表达水平。实验结果显示,pEGFP-KLF4重组质粒构建成功。该质粒转染K562细胞24 h后能观察到较高强度的绿色荧光;经G418筛选出的阳性克隆扩大培养后建立了稳定过表达KLF4基因的K562细胞株;与对照组相比,K562/pEGFP-KLF4细胞组KLF4的m RNA表达水平明显升高,其过表达率为65.71%(P0.05)。实验中构建的过表达KLF4基因的重组质粒pEGFP-KLF4能在K562细胞中高效表达,为进一步研究其在白血病中的作用奠定了基础。 相似文献
7.
目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测细胞内RALA蛋白的表达水平;Boyden趋化小室实验检测细胞体外迁移和侵袭能力.结果与随机对照组相比,转染48 h后,RALA siRNA显著下调K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达(P<0.05).与随机对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05).结论 癌基因RALA在人白血病K562细胞迁移和侵袭过程中发挥重要作用,通过siRNA下调RALA的表达可抑制K562细胞迁移和侵袭能力. 相似文献
8.
K562耐药细胞的建立及相关蛋白表达改变的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
为研究肿瘤细胞发生多药耐药后蛋白整体水平表达的改变,将K562细胞与阿霉素(ADR)共同培养,逐渐增加药物浓度,最后建立耐阿霉素的细胞K562/ADR株。MTT法检测阿霉素(ADR)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)对K562和K562/ADR细胞的半数抑制率(IC50)。利用蛋白质组学技术,通过双向凝胶电泳分离K562和K562/ADR细胞的总蛋白,银染显色,分析差异蛋白,对部分蛋白点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析飞行时间质谱法得肽质量指纹图谱,用AutoMS-Fit软件查询NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果表明K562细胞经ADR诱导后出现多药耐药现象,ADR、DDP、5-FU和VCR对K562/ADR细胞的IC50明显高于K562。将K562和K562/ADR的双向电泳图谱进行差异比较,初步鉴定仅在K562/ADR图谱上出现的蛋白是一些与细胞分裂、基因转录有关的蛋白质。这些蛋白的变化与耐药细胞的特性相关,可能与临床化疗的多药耐药现象有联系。 相似文献
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探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)在血液肿瘤细胞中的特异性表达,研究过量表达PTPα对人红白血病细胞K562生物学行为的影响及在裸鼠体内致瘤能力的改变.首先应用RT-PCR和Western 印迹检测3种不同类型造血系肿瘤细胞(K562、NB4、Jurkat T)中PTPα的表达水平.根据检测结果,选择K562细胞作为研究对象,利用脂质体将 PTPα 真核表达载体转染K562细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western 印迹验证过表达情况;经MTT法检测细胞增值能力的改变;用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞分化状态;并将阳性克隆细胞皮下接种裸鼠,观察 PTPα 基因转染前后细胞系在裸鼠体内的致瘤能力及瘤体的组织化学变化.上述实验结果表明,通过G418压力筛选获得了 PTPα 高表达多克隆细胞系K562-PTPα;经体外增殖实验分析,实验组K562-PTPα细胞与未转染组细胞K562和转染空载体组细胞K562-splice相比,细胞生长速度增快,G2/M期细胞比例增加( P <0.05),而细胞分化状态无明显变化;裸鼠体内致瘤实验显示,K562组、K562-splice组和K562 PTPα组平均瘤重分别为(1.1±0.3)g、(1.3±0.2)g和(2.5±0.5)g;病理切片显示,K562-PTPα组瘤体组织分化程度较对照组低、恶性程度高,细胞的致瘤能力增强( P <0.01).综上所述,过表达PTPα使K562细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤性,表明PTPα可能在造血系统恶性肿瘤的发生发展中发挥促进作用. 相似文献
10.
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide DADS)作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础.方法:采用瑞士-吉姆萨和Hoechst33342染色观察细胞形态学变化.运用基因芯片技术检测40 mg/LDADS作用于K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达,选择其中上调基因GADD45A、下调基因HO-1运用RT-PCR技术进行验证.结果:40mg/L的DADS作用于K562细胞后出现凋亡所具有的典型形态学变化.40 mg/L DADS作用K562细胞24 h后有14个凋亡相关差异表达基因.GADD45A、HO-1基因表达情况与基因芯片结果一致.结论:DADS可能通过多个基因和多条信号转导通路共同作用诱导人白血病细胞K562凋亡. 相似文献
11.
目的:探讨胆固醇对K562及耐药株K562G细胞增殖及伊马替尼(Imatinib,IM)敏感性的影响。方法:通过qRT-PCR方法检测K562和K562G细胞的胆固醇代谢途径相关蛋白的表达;以不同药物组合处理K562细胞、K562G细胞,采用CCK-8方法检测细胞增殖情况。结果:耐药K562G细胞胆固醇合成酶(人角鲨烯单加氧酶SQLE,细胞色素P450酶家族51亚家族A1 CYP51A1,固醇C5去饱和酶SC5D)表达下降、而低密度脂蛋白受体LDLR、固醇酰基转移酶SOAT1、ATP结合盒转运体A1 ABCA1表达量增加;0.5μg/m L、0.75μg/m L胆固醇处理K562细胞,其增殖率比对照组K562细胞分别增加(9.51±2.84)%和(19.88±3.00)%;使用阿托伐他汀(20μM)、GW3965 (20μM)、MβCD (10 m M)降低K562G细胞胆固醇使其增殖抑制率分别为(50.73±2.34)%,(49.42±1.13)%,(76.54±1.48)%;两种浓度胆固醇使IM处理的K562细胞增殖抑制率分别减少51.59%及53.80%;MβCD联合IM使K562及K562G细胞存活率分别降低至6.89%及23.34%。结论:IM抵抗的K562G细胞与IM敏感的K562细胞相比胆固醇代谢增强;增加胆固醇能够促进K562细胞增殖,降低细胞对IM的敏感性;MβCD可能通过降低胆固醇增强K562、K562G细胞对IM敏感性。 相似文献
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探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1 ( special AT-rich sequence binding protein ,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表 达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcDNA3.1-SATB1转染至K562细胞,通过6周G418的筛选获得阳性克隆,RT-PCR、实时PCR及Western 印迹验证过表达情况,对阳性克隆细胞中IGFBP2的表达用RT-PCR、实时PCR及Western 印迹方法进行检测;然后用RNAi的方法干扰阳性细胞中SATB1 的表达后,同样用上述3种方法再次检测IGFBP2的表达状况;用生物信息学方法对IGFBP2基因进行MAR序列与SATB1结合位点搜索分析,寻找SATB1影响IGFBP2基因表达的机制.结果显示,在稳定转染的情况下,实验组K562-SATB1细胞与转染空载体pcDNA3.1的K562-3.1细胞和未转染细胞K562相比,IGFBP2 mRNA水平上调了近7倍,而蛋白水平变化不明显.RNA干扰后,IGFBP2的表达在mRNA水平也相应下调,蛋白水平的变化同样不明显.通过生物信息学分析发现,IGFBP2第1个内含子中可能存在2. 5 kb MAR样序列,且MAR样序列上存在多个SATB1的潜在结合位点.综上所述,过表达SATB1可以使K562细胞中IGFBP2 mRNA表达水平提高,而且其调控机制可能与SATB1直接和IGFBP2基因中的MAR样序列结合有关. 相似文献
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《生物磁学》2011,(20):3801-3804,3808
目的:探讨抑制甲基转移酶(DNMT)对K562细胞中癌-睾丸抗原表达的影响及其机制。方法:分别采用针对DNMT家族不同成员的siRNA转染K562细胞,采用RT—PCR检测细胞中DNMT及癌-睾丸抗原的水平表达,并采用甲基化特异PCR(MSP)检测部分癌.睾丸抗原基因启动子的甲基化状态。结果:经siRNA干扰后,K562细胞中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达量均明显降低,癌-睾丸抗原CTl0的启动子区序列发生了去甲基化,但处于非甲基化状态的MAGE.A1启动子区没有发生任何改变。干扰DNMT组的K562细胞,再表达癌-睾丸抗原CT10、PRAME和CT9,而MAGE-A1、ssx-1的表达上调,但是NY-ESO—1、HCA587和HCA661的表达状况均没有任何影响。结论:在K562细胞中,干扰DNMT可使部分癌-睾丸抗原基因的启动子区发生去甲基化,从而导致相应的癌-睾丸抗原分子的再表达或表达增加。 相似文献
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spata3是一个在睾丸中特异性表达的基因,可能与精子发生或生精细胞凋亡相关.为了进一步研究Spata3的功能,将spata3克隆入经修饰的pcDNA5/FRT/TO表达载体,应用Flp-InTMT-RExTM-293 细胞系作为拗飨赴? 成功地构建了可被四环素或 Doxycline 诱导的稳定表达 Flp-InTMT-RExTM-sptat3 的细胞系.该细胞系在spata3基因 的3'端有2×FLAG tag和2×Histag,在缺乏可利用的spata3或其抗体的情况下,也能够很容易地应用商品化的FLAG抗体检测到spata3全长蛋白的表达.这种可诱导的稳定表达Flp-InTMT-Rex TM-spata3 的细胞系的建立,不仅有利于spata3的分析鉴定和功能研究,而且对于其他蛋白质的分离纯化和功能研究也有很好的借鉴作用. 相似文献
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梁伟徐兰杨荣秉初明连觅朱蕴兰余培峰徐碧荷王月丹 《现代生物医学进展》2011,11(20):3801-3804
目的:探讨抑制甲基转移酶(DNMT)对K562细胞中癌-睾丸抗原表达的影响及其机制。方法:分别采用针对DNMT家族不同成员的siRNA转染K562细胞,,采用RT-PCR检测细胞中DNMT及癌-睾丸抗原的水平表达,并采用甲基化特异PCR(MSP)检测部分癌-睾丸抗原基因启动子的甲基化状态。结果:经siRNA干扰后,K562细胞中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达量均明显降低,癌-睾丸抗原CT10的启动子区序列发生了去甲基化,但处于非甲基化状态的MAGE-A1启动子区没有发生任何改变。干扰DNMT组的K562细胞,再表达癌-睾丸抗原CT10、PRAME和CT9,而MAGE-A1、SSX-1的表达上调,但是NY-ESO-1、HCA587和HCA661的表达状况均没有任何影响。结论:在K562细胞中,干扰DNMT可使部分癌-睾丸抗原基因的启动子区发生去甲基化,从而导致相应的癌-睾丸抗原分子的再表达或表达增加。 相似文献
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莪术醇诱导慢性粒细胞白血病K562细胞分化的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:以人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞为对象,研究莪术醇(curcumenol)诱导K562细胞分化作用,并同莪术油做了比较研究。方法:通过测定细胞内酶变化判定莪术醇等诱导K562细胞的分化;用RT-PCR测定莪术醇等作用后K562细胞bcr/abl mRNA表达量的变化,同时测定莪术醇等对K562细胞微核影响,探讨诱导K562细胞的分化机理。结果:莪术醇能够诱导K562细胞向成熟分化,30μg/mL莪术醇作用72h后,Gimsa染色后可见K562细胞向终末细胞分化,出现杆状及分叶核细胞,细胞内酶学指标也呈分化表现;同时,莪术醇作用后bcr/abl融合基因的表达降低,K562细胞的微核率减少。结论:莪术醇对畸变的K562细胞染色体有作用,影响bcr/abl融合基因的表达,使K562细胞向成熟分化。 相似文献
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A series of substituted urea derivatives, compounds 1-14, were synthesized and evaluated for their cytotoxic activities against the human-leukemia K562 cell line. Two structurally simple compounds, 7 and 12, both incorporating a morpholine ring, were found to be highly active, with IC50 values of ca. 0.25 microM. 相似文献
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George V. Z. Dedoussis Athanasia Mouzaki Maria Theodoropoulou Panagiotis Menounos Marie-Christine Kyrtsonis Andreas Karameris Alice Maniatis 《Experimental cell research》1999,249(2):269-278
Cisplatin is an effective chemotherapeutic agent that elicits its antineoplastic activity by binding to DNA and disrupting template functions. IL-6 is a cytokine which has been shown to play a central role in host immunological defense mechanisms. Although K562 leukemic cells have been shown to secrete IL-6, little is known of whether there exists a correlation between the expression of IL-6 and the resistance of these cells to anticancer chemotherapeutic agents. To determine the contribution of IL-6 to the regulation of cisplatin-induced apoptosis in K562 cells, we examined whether treatment of K562 cells and cisplatin-resistant K562 subclones with anti-IL-6 mAb enhances their sensitivity to cisplatin. The results show that cis-diamminedichloroplatinum (CDDP) resistance was overcome by treatment with nontoxic doses of CDDP in combination with anti-IL-6 mAb. When we tested if the synergistic effect of anti-IL-6 and cisplatin could restore the ability of K562 mutant cells to undergo apoptosis, we found the typical DNA laddering in these cells, even in the presence of a nontoxic dose of the drug. Treatment of cells with anti-IL-6 reduced the levels of glutathione. The current studies show that anti-IL-6 mAb sensitized CDDP-resistant K562 cells to CDDP by induction of apoptotic death and the reduction of glutathione levels might be implicated in the enhanced cytotoxicity observed. 相似文献