RAP蛋白的纯化和抗体制备

从04018金黄色葡萄球菌培养上清分离纯化获得相对分子质量为38000,具有激活RNAⅢ作用的RAP蛋白。用该蛋白免疫家兔得到效价为1：128000的多抗血清。纯化后的抗体可以特异结合RAP并抑制其激活RNAⅢ转录的作用。     

免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇(Sarcophagaperegrina)幼虫血淋巴凝集素

 报道了利用免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇幼虫血淋巴凝集素的结果．哺乳动物红细胞能够特异地吸附凝集素．用兔红细胞与麻蝇幼虫血淋巴凝集素形成的复合体免疫供血家兔,得到麻蝇幼虫血淋巴凝集素的抗体．再利用抗体制备亲和吸附柱,通过免疫亲和层析一次性纯化了麻蝇幼虫血淋巴凝集素． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ结果显示,该凝集素的分子量约为７３ ｋ Ｄ．这一结果,与用对麻蝇幼虫血淋巴凝集素有抑制作用的糖蛋白—胎球蛋白和甲状腺球蛋白为配基,亲和层析纯化的结果完全相同,表明用这种免疫亲和层析法纯化凝集素是可行的．为不清楚专一性识别糖或专一性识别糖不典型,难于用普通亲和层析纯化的凝集素,提供了一种有效的纯化方法．     

牛Ⅲ型前胶原的提取及抗血清的制备

 在中性pH和蛋白酶抑制剂的存在下,从新生小牛皮肤中提取Ⅲ型前胶原。利用反复盐析法将Ⅰ型胶原和前胶原与Ⅲ型胶原和前胶原分开,再经DEAE纤维素层析分离出Ⅲ型前胶原。 用提取的Ⅲ型前胶原免疫家兔,获得抗血清,用酶联免疫法测定效价达1:10O,000。经与国外标准品鉴定该提取物为Ⅲ型前胶原。     

肉毒毒素和类毒素抗原

用毒素或福尔马林处理的类毒素免疫家兔制备抗肉毒血清(A和E型)。用类毒素连续吸收抗类毒素,能完全吸收掉小鼠保护效价;但其在吸收抗毒素时,却保留较高的保护效价,而此只能为毒素所除去。由于肉毒类毒素和毒素的明显差别,所以能将两者区分为免疫抗元和(或)抗血清吸收抗元。     

TRAP蛋白的抗体制备和初步应用

金黄色葡萄球菌分泌的RAP蛋白通过其靶分子TRAP蛋白的磷酸化来激活RNAⅢ的转录。用TRAP蛋白免疫家兔得到效价为1：128000的多抗血清。纯化后的抗体可以特异识别不同菌株的TRAP蛋白,并抑制TRAP蛋白磷酸化,降低金黄色葡萄球菌外毒素的分泌。     

用地方性菌株制造福氏志贺氏菌Ⅲ型血清的生产试验

福氏志贺氏菌Ⅲ型血清的制造是一个比较困难的问题,过去使用捷克菌株(51303)生产Ⅲ型血清时,所得血清效价低,稳定性不好,有许多国内分离的3型福氏志贺氏菌不能与其凝集。在作了一些选种工作之后,淘汰了捷克菌株,改用国内分离的地方性菌株(56050及60069)生产,血清质量有了明显提高。但是,十余年来的生产实践证明:即使采用地方性菌株生产,仍有某些批的血清效价不够理想。在制造程序上,虽然发现了吸收菌的加入顺序和加入数量对Ⅲ型血清的最后效价并无明显影响,但吸收方     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的提取与鉴定

将表达Ⅲ型菌毛的肺炎克雷伯菌临床分离株Kp7在改良Minka液体培养基上传代培养,使之充分菌毛化,大量收集菌毛生长良好的细菌,利用热洗脱法分离提取菌毛,经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心,收集20%~30%梯度中的蛋白带,经SDS-PAGE电泳可见1条大小在20.5 ku的蛋白条带。提纯菌毛保留了甘露糖抵抗血凝特性,并与用Kp7全菌免疫家兔制备的高免血清在Western blot中反应呈阳性,证实其条带为Ⅲ型菌毛主要结构蛋白。     

用猪、家兔、大鼠、小鼠和豚鼠胰腺做抗原免疫组织化学检测ICA的比较研究

免疫组织化学检测Ⅰ型糖尿病（ＩＤＤＭ）病人血清中的胰岛细胞抗体（ＩＣＡ）需用“Ｏ”型血人胰腺做抗原。因为人胰腺来源困难,所以,本研究选用猪、家兔、大鼠、小鼠和豚鼠以及“Ｏ”型血正常人胰腺作抗原,对１１例ＩＤＤＭ患者和１０例正常人血清,进行ＩＣＡ免疫组织化学检测,以期筛选寻找ＩＣＡ免疫组织化学检测的最佳抗原替代品。选用已确诊为ＩＤＤＭ并用“Ｏ”型血正常人胰腺作抗原ＩＣＡ检测为阳性患者的血清１１份,正常人血清１０份,同步用ＰＯＰＡ免疫组织化学技术进行检测。结果发现：在１１份ＩＤＤＭ患者血清中,用猪胰腺与用“Ｏ”型血正常人胰腺作抗原,１１例均为阳性,而用家兔和大鼠胰腺作抗原各有１０例为阳性。但用小鼠和豚鼠胰腺作抗原,则分别只有２例和１例呈阳性。在１０例正常人血清中,人和各种动物胰腺均呈阴性反应。本研究结果表明猪胰腺是ＩＣＡ免疫组织化学最佳替代品,其次是家兔和大鼠的胰腺。小鼠和豚鼠胰腺作抗原检测ＩＣＡ结果差异较大     

福氏痢疾桿菌第4型的型抗原成分

在1955—1956年福州市痢疾杆菌分型研究工作中,发现所分离的福氏4型菌株,用标准4a菌血清作吸收试验时,有的菌株能完全吸收该血清的凝集素,有的菌株则不能完全吸收。据方纲认为福氏4型菌的型抗原尚可再分为A、B、C3个成分。兹选取1955—1956年分离的福氏4型菌27株,进行血清学研究,以了解福氏4型菌的型抗原特性,并追证方纲的发现。首先以能完全吸收标准4a菌(No.51305,捷克)血清凝集素的菌株9308制备免疫血清。     

猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究

为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0．05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。     

金黄色葡萄球菌荚膜分型血清研制及初步应用

为了解中国金葡菌荚膜流行型,用5型和8型国际标准菌株的菌悬液免疫家兔,吸收除去交叉凝集素研制出金葡菌5型和8型荚膜分型血清,并应用于333株临床菌株荚膜分型。该血清效价为1：1280和1：640,与本菌及其它同型菌株玻片凝集反应呈强凝集,与其它型菌株不凝集,且与美国标准血清同时对333株临床分离菌株进行分型比较的符合率为100％。333株金葡地方菌株荚膜分型结果显示,8型菌株占绝对优势,所占百分率为70．9％;5型占6．3％,5型和8型菌株共占77．2％。这与国外金葡菌荚膜5型和8型占70％-80％的报道相似。试验为金葡菌疫苗株选择提供了流行病学依据。     

PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立

目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。     

钩端螺旋体的新血清型——蛮耗4型

从1973年我省分离的689株钩端螺旋体中,分离到一株“黎川130”,经检定属于我国新发现的血清群——蛮耗群。这个血清群是世界卫生组织(1967)公布的18个群124型以外的一个独立的血清群。蛮耗群过去有3个型别,即蛮耗1—3型。“黎川130”株经用凝集素吸收方法检定为新型,建议命名为蛮耗4型。     

用马匹制备霍乱诊断血清的试验小结

霍乱诊断血清各所多用免疫家兔制备的。在生产量大时费人力与时间,管理不便、成本高、产量少。在多快好省的总路线指引下,我们试探免疫马制备霍乱诊断血清。用霍乱死菌体作静脉与皮下、肌肉混合途径免疫法均获得了凝集效价在3200以上的诊断血清,初步估计一匹马血的产量相当于250—300只家兔的产量,操作简便,易管理,成本低,产量多。兹将     

应用生物素标记的凝集素分析登革Ⅱ型病毒糖蛋白

应用十二种生物素标记的凝集素,分析了经SDS-PAGE和电转印分离的登革Ⅱ型病毒(D_2V)糖蛋白。结果表明:D_2V的包膜糖蛋白E可与三种D-甘露糖特异的凝集素(conAPSA及LCA)结合,提示E蛋白的寡糖链为高甘露糖型。D_2V的糖基化非结构蛋白NS_1可与两种D-甘露糖特异的凝集素conA及LCA结合,提示NS_1的寡糖链亦为高甘露糖型。实验结果还显示了一些可能为C6/36细胞感染D_2V后新合成、合成量增加或减少以至完全受抑制的糖蛋白成分,有关这些糖蛋白的性质、功能、意义尚不清楚。在本实验条件下,这种生物素标记凝集素印迹法证明了其敏感性和糖基特异性,可以作为分析各种微量含糖大分子的一种实用方法。     

F型肉毒类毒素的免疫原性(实验结果)

两批精制F型肉毒类毒素,按不同剂量用氢氧化铝予以吸附,分别用豚鼠进行免疫原性 试验。结果表明,每毫升含60结合单位的吸附样品,0.5毫升一次皮下注射豚鼠,30天后即足以耐过1,000个致死量的F型肉毒毒素攻击,42天后的血清抗毒效价增在0.2单位/毫升以上。 用豚鼠做吸附精制F型肉毒类毒素免疫原性试验中,毒素攻击法似较血清效价测定法为优越。     

人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－actinin）的提取及其抗血清的制备和鉴定

本文提取人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－ａｃｔｉｎｉｎ）是综合了文献报导有关提取兔肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的和提取鸡胗α－ａｃｔｉｎｉｎ的方法,稍加修改而确定的。用Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈ－Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ缓冲液提取骨骼肌中的肌球蛋白后,将残余物经硼酸－缓冲液提取、匀浆及高速离心去掉肌动蛋白和肌原纤维的其它成份,上清加硫酸铵至３０％,３５％饱合度所得的沉淀用２２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－乙酸溶解、透析、离心后经ＤＥ－５２柱层析可得电泳纯。α－ａｃｔｉｎｉｎ。将人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ纯化制品免疫了三只大耳白纯种家兔,两个多月后,三只兔子都产生免抗人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的特异抗血清,用双向免疫扩散法和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定,产生的抗体效价较高,用双扩散法测定效价为１：３２,用ＥＬＩＳＡ测定,用比率法判断结果,效价最高者为１：１００,０００左右,经免疫电镜观察结果证实,上述抗血清可以满足进一步实验要求。     

黑色菜豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化和性质

黑色菜豆(phaseolussp.)种子中含有对人A型血专一凝集的凝集素。用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂和Sephadex G-200凝胶过滤,可以纯化这种凝集素。纯化的凝集素在pH8.9,Tris-EDTANa_2-borate缓冲液的PAGE中,呈现单一蛋白带;酚-硫酸法测得总糖含量为3.22％。在SDS-PAGE中发现其分子由两种亚基所组成,亚基分子量分别为38,000和35,000。当凝集素浓度分别为0.98μg/ml和1.95μg/ml时能强烈地凝集人A型和AB型血细胞。在凝集素浓度高达500μg/ml时,B型血细胞能发生弱凝集反应,但对O型血和兔红细胞则完全不发生凝集反应。其凝集活性可被GalNAC、L-Fuc、猪甲状腺球蛋白和卵粘蛋白所抑制。该凝集素对人外周血中淋巴细胞的转化率达80％,细胞分裂比率高达37.1％;氨基组成分析表明,凝集素分子中Asp和Glu含量较高,而cys和Met含量很低。     

前列腺癌检测新技术

美国科学家用硅材料制造出一种微型“跳板”装置,用于诊断前列腺癌。以氮化硅为原料,利用标准的半导体加工技术制造一个跳板形状的微小结构,“跳板”的横截面呈三角形。这个三棱柱形的“跳板”一个侧面放置了一种抗体分子。这种抗体能够与前列腺肿瘤释放的“前列腺特异抗原”相结合。 如果用含有前列腺特异抗原分子的液体冲刷这个“跳板”,这些分子会与跳板上的抗体相结合,改变跳板的表面张力,导致跳板发生弯曲。然后用激光束照射这个氮化硅跳板,测量其弯曲程度,就可以确定液体中前列腺特异抗原的含量,如果测试时“跳板”不弯曲,说明液体中…