单生卵囊藻(Oocystis solitaria)和月牙藻(Selenastrumsp.)的培养条件及其细胞组成

从海滨的淡水池沼中分离得到单生卵囊藻(Oocystis solitaria)和月牙藻(Selenastrum sp.),分别研究了温度、光照强度、盐度对2种微藻生长繁殖的影响,分析了2种微藻的细胞组成、脂肪酸组成及盐度对2种微藻脂肪积累的影响.结果表明:单生卵囊藻和月牙藻的适宜生长温度分别为35.9℃～40.5℃和29.7℃～32.8℃;单生卵囊藻和月牙藻的适宜光照强度分别为46～70μmol · m-2·s-1和17 ～54 μmol·m-2·s-1;单生卵囊藻在淡水培养液中生长最好,月牙藻在盐度为2的半成水培养液中生长最好;在适宜培养条件下,单生卵囊藻细胞蛋白、总糖和总脂肪分别为27.61％、22.00％和3.84％;月牙藻细胞的蛋白、总糖和总脂肪分别为28.06％、21.99％和12.53％;单生卵囊藻的脂肪酸组成中含有丰富的18∶3n3;月牙藻的脂肪酸组成中含有DHA;盐度影响2种微藻的总脂肪含量;单生卵囊藻和月牙藻分别在盐度4和10的半咸水培养液中细胞总脂含量最高.     

热带普通小球藻培养模式的筛选及其培养基的优化

【背景】从海南热带海区中分离得到一株微藻,其生长速度快、适应力强,经鉴定该微藻为普通小球藻。【目的】提高热带普通小球藻的生长速率。【方法】以"宁波大学3#微藻培养液配方"为基础培养液,分别添加有机碳(C6H12O6和CH3COONa)对热带普通小球藻进行自养、兼养及异养培养,获得促进热带普通小球藻快速生长的培养方式。在"宁波大学3#微藻培养液配方"的基础上对热带普通小球藻的兼养培养基配方进行优化,并用优化兼养培养基与"宁波大学3#微藻培养基"对比培养热带普通小球藻。【结果】添加6 g/L CH3COONa的兼养模式促进热带普通小球藻生长效果最好;优化的兼养培养基配方为:6 g/L CH3COONa,20 mg/L(NH4)2SO4-N,5 mg/L Na H2PO4-P,3 mg/L Fe SO4-Fe,1 mg/L Vitamin B1和0.000 5 mg/L Vitamin B12。对比培养实验结果显示,培养第6天,兼养培养液收获的生物量(细胞密度)达4.20×107 cells/m L,是"宁波大学3#配方微藻培养液"的2.30倍。【结论】兼养培养模式为热带普通小球藻的最佳培养模式,优化的兼养培养基极显著地提高了热带普通小球藻的生物量(P0.01)。     

富油微藻的筛选及其产油能力的评价

【目的】筛选具有较快生长速率及较强产油能力的微藻,探究所获得微藻的生理生化性能及不同培养方式对其生物量、产油能力、碳消耗等生长特性的影响与藻种对pH的适应能力。【方法】通过磷酸香草醛测定法及尼罗红染色对微藻进行初筛复筛,通过设置光合自养、异养和混养等3种培养方式,并采用气质联用等方法,研究不同培养方式对所获微藻生长特性、所产油脂脂肪酸组成以及碳代谢等方面的影响。【结果】筛选出两株产油能力较强的藻株H、Z_8,其油脂产量分别可达1.14±0.05 g/L和1.33±0.10 g/L,经形态观察和分子生物学鉴定初步表明藻株H属布朗单针藻(Chlorolobion braunii)、藻株Z_8属链带藻(Desmodesmus intermedius)。构建了不同培养方式下微藻动力学模型,H、Z_8属于生长偶联型。当培养环境的pH处于6.0–9.0,对藻株H、Z_8的总脂量与生物量无明显差异(P0.05)。【结论】筛选获得的藻株H、Z_8中C16与C18脂肪酸占总脂肪酸的比率能达到90%以上。藻种在混养条件下生物量积累优于异养,但异养条件下更加有利于油脂的积累,且H、Z_8均具有较为宽泛的pH适应能力,是具有一定产业化应用潜力的优良产油藻株。     

氮源种类及浓度对眼点拟微绿球藻生长密度、油脂产率和二十碳五烯酸含量的影响

氮源是影响微藻生长和油脂积累的重要因素,文中通过单因素试验比较了NaNO3、CO(NH2)2、NH4Cl、CH3COONH4及其浓度对眼点拟微绿球藻生长密度、生长速率、油脂产率、二十碳五烯酸(EPA)含量的影响。结果表明：NH4+更易被眼点拟微绿球藻利用,能更好地促进微藻生长和油脂积累;氮浓度的增加有利于微藻的生长和藻油脂肪酸的去饱和,但不利于微藻油脂的积累。在实验考察的氮源种类和浓度范围内,CH3COONH4是促进眼点拟微绿球藻生长和油脂积累、EPA生成的适宜氮源,其适宜的浓度为5.29 mmol/L。     

盐度对一株淡水栅藻Scenedesmus sp.生长及生化组成的影响

通过管式光生物反应器培养,分析比较不同盐度(0-40‰)对一株淡水栅藻(Scenedesmus sp.)生长和生化特性影响,评价海水培养该藻株的产业化潜力,探讨其高盐适应机制,为进一步海水驯化研究提供理论参考。采用显微观察、索氏提取法、凯氏定氮法、苯酚硫酸法、气相色谱法及高效液相色谱法分别测定微藻生长及蛋白质、油脂、多糖含量以及色素、脂肪酸组成情况。结果表明,高盐条件下藻细胞明显增大,并出现自然沉降现象,可实现低成本采收。随盐度增加,栅藻生长逐步被抑制,40‰盐度条件下生长完全停止,但在3‰盐度下仍良好生长,培养末期生物量可达2.84 g/L。30‰盐度组蛋白质含量相对淡水组提高95.40%、产率与淡水组相近,加之高盐培养可较大幅度降低蛋白质的生产成本,因此,采用海水培养栅藻来开发蛋白资源具有一定的潜力。研究还表明,30‰盐度下藻细胞内β-胡萝卜素、虾青素、可溶性多糖等成分大量积累,可能是其适应高盐胁迫的重要生理基础。     

褪黑素对单针藻油脂积累的影响

研究了外源褪黑素(MT)对单针藻Monoraphidium sp.QLY-1生长和油脂积累影响,结果表明:在光胁迫下,添加1、10和100μmol/L褪黑素时藻细胞中油脂含量分别比对照组(37.6%)提高了1.32、1.24和1.16倍,且最高油脂含量可达49.6%。活性氧(ROS)、油脂生物合成相关的酶活性与油脂积累存在相关性,添加1μmol/L褪黑素诱导微藻细胞,ROS水平上升、乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)和苹果酸酶(ME)酶活性呈现上调趋势,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)活性下调。研究表明,褪黑素作为一种外源诱导子可有效促进微藻油脂的积累,褪黑素结合光诱导可作为提高微藻油脂积累的另一策略。     

拟南芥Leafy Cotyledon 2的表达提高了小球藻Chlorella sorokiniana的油脂含量

油脂含量是影响微藻产业化生产生物柴油的因素之一。基因工程的方法是培育高产藻株的一个重要手段。Leafy Cotyledon 2(LEC2)在拟南芥中是调节种子成熟及油脂积累的重要转录因子,在藻类植物中尚无相关的报道。本研究从拟南芥中获取LEC2基因,构建表达载体p CIMBIA1300-35s-GFP-ATLEC2,通过基因枪介导法转入小球藻C.sorokiniana。经过PCR、RT-PCR、Western blotting分析,筛选出一株转ATLEC2基因藻株。对总脂肪酸含量的分析发现,转ATLEC2基因藻株的脂肪酸含量比原始藻株提高了1倍且没有明显影响生长。以上结果表明,ATLEC2能促进小球藻油脂的积累。     

温度、光照和盐度对2株曼氏骨条藻生长及脂肪酸组成的影响

研究温度、光照、盐度对2株曼氏骨条藻（Skeletonema munzelii）SM-1、SM-2生长、总脂含量及脂肪酸组成的影响,以确定其生长及油脂、多不饱和脂肪酸积累的最适生态条件。在实验室智能光照培养箱内不充气培养控制条件下,采用单因子试验分别研究了不同温度（10、15、20、25和30℃）、光照强度（20、40、60、80、100和120μmol/m2·s）、盐度（10、15、20、25、30、35和40）对2株藻的生长、总脂含量及脂肪酸组成的影响。结果表明：不同温度、光照强度及盐度对2株藻的生长、总脂及脂肪酸含量影响均有显著影响（P〈0.05）。藻株SM-1生长的最适温度为25℃,最适光强60μmol/m2·s,最适盐度30,而低温（10~15℃）,低光照（20μmol/m2·s）,低盐度（盐度15）更有利于总脂及PUFA的积累。SM-2生长的最适温度为20℃,最适光强60μmol/m2·s,最适盐度30,而低温（10~15℃）,低光照（20μmol/m2·s）更有利于其总脂及PUFA的积累,低盐（盐度15）则更有利于PUFA的积累。因此在实际生产中,2株藻可先在最适条件下培养以增加生物量,后转至利于PUFA积累的条件下提高PUFA产量。     

碳源、氮源对异养单针藻Monoraphidium sp. FXY-10油脂积累和脂肪酸组成的影响

研究了碳源与氮源对单针藻Monoraphidium sp. FXY-10异养培养的影响。以BG-11为基础培养基,通过添加不同类型、浓度梯度碳源和氮源,比较分析微藻生物量、油脂积累以及脂肪酸组成。结果表明,以葡萄糖作碳源,硝酸钠为氮源,微藻细胞积累的油脂是理想的生物柴油制备原料。硝酸钠浓度分别为1.00、3.00和5.00 g/L时,对油脂产量影响不显著(P>0.05)。葡萄糖浓度为10.00 g/L,硝酸钠为氮源油脂产量达到实验最高值0.84 g/L,其油脂脂肪酸组成主要由C16:0和C18:1等短链饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸组成,不饱和度值(DU)为61.98,相对偏低。     

产油微藻筛选和鉴定及其产油性能的研究

为了筛选具有产油能力的微藻,从自然界水体中分离出14株微藻,根据形态特点对它们进行了初步鉴定。对其中12株微藻在自养和异养条件下的生长特性和产油性能进行了比较。通过微藻的生长曲线,生物量和油脂含量等指标,从中筛选出高产藻株并对该藻株进行了分子生物学鉴定。结果表明:藻株Y06在12种微藻中的油脂产量和产率最高,经18S rDNA鉴定确定为栅藻(Scenedesmus abundans)。藻株Y06在自养条件下的油脂产率为9.40 mg/(L.d),在异养条件下的油脂产率为201.29 mg/(L.d)。     

玫瑰色微球菌的生物学特性及其培养基的优化

对本实验室分离纯化的玫瑰色微球菌（Micrococcus roseus）M1进行生物学特性研究,包括形态与培养特征的观察,细胞色素的测定,菌体对碳氮源和生长因子的利用,以及该菌株的最适生长条件。通过单因素试验,获得菌株最适生长条件为：培养温度30℃、p H7.5、振荡频率120 r/min、盐度0.5%。采用均匀设计法优化菌株M1的培养基,得到最优培养基（g.L-1）：CH3COONa 6;NH4Cl 2.4;Na HCO30.1;Mg SO40.1;维生素溶液12 m L/L;微量元素溶液1 m L/L。在最适生长条件下,接种菌株M1于最优培养基,培养72 h后,菌体和类胡萝卜素的OD值分别达到2.753和4.733,而在基础培养基上的生物量和类胡萝卜素的OD值为1.895和3.258,分别提高了45%和50%。     

Effect of light supply and carbon source on cell growth and cellular composition of a newly isolated microalga Chlorella vulgaris ESP‐31

Light supply is one of the most important factors affecting autotrophic growth of microalgae. This study investigated the effect of the type and light intensity of artificial light sources on the cell growth of an indigenous microalga Chlorella vulgaris ESP‐31 obtained from southern Taiwan. In addition, a dissolved inorganic carbon source (i.e. sodium bicarbonate) was used to improve the biomass production of strain ESP‐31. The results show that a new fluorescent light source (TL5) was effective in indoor cultivation of microalgae. Better overall productivity of 0.029 g dry cell weight/L‐d was obtained when using TL5 lamps as the light source with a light intensity of 9 W/m². A carbon source (sodium bicarbonate) concentration of 1000 mg/L was found to be optimal for the growth of strain ESP‐31 in terms of both biomass production and carbon source utilization. Under the optimal growth conditions, the resulting microalgal biomass consisted of 25–30% protein, 6–10% carbohydrate, and 30–40% lipid.     

4种生态因子对虎斑乌贼幼体生长与存活的影响

旨在研究温度、盐度、饵料种类、投饵量对虎斑乌贼（Sepia pharaonis）幼体生长与存活率的影响,以确定其生长发育的最佳生态条件,为人工育苗提供理论依据。在室内控制条件下,采用单因子试验研究了不同温度（18、21、24、27、30和33℃）、不同盐度（18、21、24、27、30和33）、不同饵料种类（虾糜、活糠虾、卤虫无节幼体、桡足类、死糠虾、虾糜＋强化卤虫后无节幼体、强化卤虫后无节幼体）、活糠虾不同投饵量（0、2、4、6、8和10 g/d）对虎斑乌贼幼体生长发育的影响。结果显示：不同温度对虎斑乌贼幼体生长影响显著（P〈0.05）,最适温度为24-27℃,在最适温度下,存活率为84.4%-91.1%,特定生长率为4.82%-6.13%,存活率（y）与温度（x）的函数关系为y=-0.15x3＋30.637x-447.002（r2=0.923）。幼体适宜盐度为24-33,最适盐度为27,在最适盐度条件下,其存活率为（90.0±5.29）%,特定生长率为（3.71±0.34）%。投喂7种开口饵料,以活糠虾效果最佳,存活率为（96.7±2.94）%,特定生长率为（3.77±0.23）%;强化卤虫后无节幼体效果次之,存活率为（95.6±2.31）%,特定生长率为（2.54±0.15）%,其余各组培养效果均不理想。投喂活糠虾,随着投饵量的增加,其存活率随之提高,摄食量（y）与个体重（x）的回归方程为y=0.227x-0.063（r2=0.921）。     

C、N、P对杜氏盐藻突变藻株Zea1生长和积累玉米黄素的影响

通过UV辐照和NTG诱变处理杜氏盐藻野生型藻株得到一株杜氏盐藻高产玉米黄素突变株Zea1,以此突变藻株为实验材料,系统研究了光照强度、盐浓度、碳源、氮源、磷源等对Zea1生长和玉米黄素积累合成的影响。葡萄糖在10mmol/L时既适合Zea1生长,又有利于其玉米黄素的积累。KNO3浓度为1mmol/L时最适合突变株藻细胞生长,而(NH4)2SO4浓度为1mmol/L最有利于藻细胞内玉米黄素的积累。综合来看,1mmol/L(NH4)2SO4为最优氮源。KH2PO4浓度为0.1mmol/L时Zea1藻细胞积累玉米黄素含量最高,同时在此浓度下也最适宜藻细胞的生长。讨论了此结果的机理和意义,为利用杜氏盐藻大规模生产玉米黄素提供了理论依据。     

Effects of salinity on beta-carotene production by Dunaliella tertiolecta DCCBC26 isolated from the Urmia salt lake, north of Iran

This study examined the effect of different salt concentrations (0.05-3 M of NaCl) on the kinetics of growth, total carotenoids and beta-carotene (all-trans and 9-cis) accumulated in Dunaliella tertiolecta DCCBC26, a microalgae strain isolated from the Urmia hypersaline lake, northwest of Iran. Results indicated that the highest amount of carotenoids detected (11.73 mg/l) was in the salinity of 0.5 M NaCl during the stationary growth phase. The percentage of the all-trans and 9-cis-beta-carotene in the exponential phase were 92% and 32% in salinities of 3 M and 0.5 M, respectively. However, only 23% of the beta-carotene was detected in the stationary growth phase of the microalgae in 0.5 M salinity and was 9-cis isomer.     

以脂肪酶为指标筛选赤霉素高产菌株的研究

以藤仓赤霉菌978对978#菌丝机械断裂后,采用紫外(30W,20cm)诱变处理60s,以脂肪酶活性为初筛指标筛选得到4株产赤霉素效价比出发菌株高的突变株,其中菌株GL-2在添加3%豆油的发酵培养基中产赤霉素能力比菌株978#在全淀粉发酵培养基发酵产素能力提高了1.2倍.调整补油工艺后,菌株GL-2产素能力进一步提高到...     

ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF CHLORELLA SOROKINIANA GXNN01 (CHLOROPHYTA) WITH THE PROPERTIES OF HETEROTROPHIC AND MICROAEROBIC GROWTH1

Heterotrophic and anaerobic microalgae are of significance in both basic research and industrial application. A microalga strain was isolated from a wastewater treatment pond and identified as Chlorella sorokiniana Shihira et W. R. Krauss GXNN01 in terms of morphology, physiology, and phylogeny. The strain grows rapidly in heterotrophic or mixotrophic conditions with addition of various carbon sources, and even in anaerobic conditions. The maximum growth rate reached 0.28 d^?1 when using d,l ‐malate as the carbon source, and the protein content of the microalgae was 75.32% in cell dry weight. The strain was shown to be capable of (1) utilizing d,l ‐malate only with light, (2) inhibiting photosynthesis in mixotrophic growth, and (3) growing in anaerobic conditions with regular photosynthesis and producing oxygen internally. This study demonstrates the influence of oxygen (aerobic vs. anaerobic) and metabolic regime (autotrophy, mixotrophy, heterotrophy) on the physiological state of the cell.     

响应面法优化有机溶剂极端耐受性菌株Burkholderia sp．ZYB002产脂肪酶条件

Burkholderia sp．脂肪酶具有较高的有机溶剂耐受性和转酯活性,广泛应用于手性化合物的拆分。本研究利用统计学方法对一株具有有机溶剂极端耐受性的脂肪酶高产茵株Burkholderia sp．ZYB002在摇瓶培养条件下产脂肪酶条件进行了优化。通过单因素实验,首先确定了最适碳源、氮源、诱导荆等。以Plackett—Burrman设计筛选影响Burkholderia sp．ZYB002产酶的主要因素,通过最陡爬坡实验和响应面分析法确定产酶最适条件。K2HP04、大豆油乳化液和起始RH确定为影响菌株产酶的3个主效因素。最佳产酶条件为：糊精0．3％（W／V）,牛肉膏2．0％（W／V）,MgSO4．7H2O．075％（W／V）,K2HPO4 0．14％（W／V）,大豆油乳化液4．89％（V／V）,pH8．11,玻璃珠10颗／瓶,接种量2．0％（V／V）,30℃,250r／min,发酵时间22h。在此条件下,发酵液脂肪酶酶活最高达45．6U／mL,较发酵基本培养基发酵液的脂肪酶酶活提高了3．44倍。     

少动鞘脂单胞菌产结冷胶发酵培养基的响应面法优化

通过单因素试验分析不同碳源、氮源、无机盐对（Sphingomonas paucimobilisFJAT-5627）产胶量的影响,确定最适碳源、氮源、无机盐,并在单因素筛选试验的基础上,利用Box-Benhnken设计和响应面分析法对碳源、氮源和无机盐进行优化,得到少动鞘脂单胞菌产生结冷肢发酵培养基最佳优化组合.实验结果表明,少动鞘脂单胞菌产胶量发酵最适碳源、氮源和无机盐分别为淀粉、豆饼粉和KH₂PO₄.响应面法得到产胶量（Y）与碳源淀粉（x₁）、氮源豆饼粉（x₂）和无机盐KH₂PO₄（x₃）的回归方程为:Y=13.87+0.54x₁+0.22x₂-0.42x₃-3.26x₁²-1.85x₂²-1.51x₃²+0.053x₁x₂+0.067x₁x₃+0.4x₂x₃.优化培养基组合为:淀粉浓度为30g/L,豆饼粉浓度为5 g/L,KH₂PO₄的浓度为0.7g/L,且此组合下少动鞘脂假单胞发酵得到结冷胶可达23.87g/L.