银额果蝇B染色体特异性基因的初步研究

采用代表性差异分析法（RDA）研究了银额果蝇两个单雌系AKM46（含B染色体）和AGZ2（不含B染色体）两基因组间的差异。用AKM46作检测（tester）扩增子,AGZ2作驱赶（driver）扩增子,通过三轮消减杂交后,获得了6个差异片段（100bp～300bp）。亚克隆后,对11个片段测序并与GenBank数据库进行同源性比较分析,获得了9个新的序列。选择clone22及clone42进行Southern杂交分析,这两个片段仅在检测扩增子及第一、第二、第三轮差异片段中检测到杂交信号,而在驱赶扩增子检测不到杂交信号。证实了这两个片段来自含有B染色体的单雌系AKM46,而且可能是B染色体上的特异基因片段。     

银额果蝇武汉群体的B染色体研究

本研究发现,银额果蝇武汉群体的有丝分裂中期核型中存在着Ｂ染色体,其出现频率为３８％,仅低于昆明,而高于其他地区,Ｂ染色体形态为点状。细胞内染色体的不同步分裂可能是造成Ｂ染色体形成的一个原因。     

银额果蝇的B染色体研究 2.昆明群体的生活力和B染色体的关系

本文分析了钮额果蝇的生活力和B染色体的关系。结果表明,银额果蝇的B染色体在其生长和发育过程中具双重性调节作用。一方面,B染色体以单一的形式存在于单雌系核型中,即1B或2Bs,可刺激生长、发育,增强生活力。另一方面,在单雌系的细胞中存在多条B染色体,并形成核型多态性,这似乎对生长和发育又有一定的抑制作用而减弱其生活力。     

中国银额果蝇自然群体B染色体的分布

经对我国银额果蝇自然群体Ｂ染色体（Ｂｓ）的分布进行多年广泛地调查,共作过２４个群体,５７２个单雌系,６７３８只个体的观察。从细胞和群体水平研究Ｂｓ的地理分布。结果发现,中国（除台湾省外）银额果蝇自然群体中普遍存在Ｂｓ。结合前人报道得出。Ｂｓ的地理分布出现了由东向西和由南向北的规律性的依次升高趋势。这种跨越不同地理环境的区域性梯度变异与其宿主向大陆内地扩散的推论相符。Ｂｓ频率最高（８７．７％）的是海     

银额果蝇(Drosophila albomicans)B染色体对繁殖的影响

利用遗传背景一致的３类含有不同Ｂ染色体数目的银额果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｌｂｏｍｉｃａｎｓ）品系,对繁殖的２个参数,即净繁殖量和性比进行了比较研究。结果表明Ｂ染色体对净繁殖量有着显著的影响,其影响依赖于Ｂ染色体数目的不同而不同;低数目增加其携带者的净繁殖量,而在高含量时有使其携带者净繁殖量下降的趋势。Ｂ染色体对繁殖的影响还具有一定的时间分布特征,即３类品系净繁殖量的差异主要集中在雌绳繁殖的早     

银额果蝇的B染色体研究:1.昆明群体的Bs数目和频率

本研究发现银额果蝇昆明群体有丝分裂中期核型中存在B染色体,出现频率为69.1%。目前,在已研究过的来自各个地区的银额果蝇中,昆明群体的B染色体频率最高。B染色体数目为1-6条。该群体内单雌系间的B染色体数目不同,个体间和细胞间的B染色体数目也不同。在核型中,B染色体最小,形态稳定,点状,C-带和G-带呈阳性。     

银额果绳(Drosophila albomicans)B染色体对繁殖的影响

利用遗传背景一致的３类含有不同Ｂ染色体数目的银额果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ａｌｂｏｍｉｃａｎｓ）品系,对繁殖的２个参数,即净繁殖量和性比进行了比较研究。结果表明Ｂ染色体对净繁殖量有着显著的影响,其影响依赖于Ｂ染色体数目的不同而不同;低数目增加其携带者的净繁殖量,而在高含量时有使其携带者净繁殖量下降的趋势。Ｂ染色体对繁殖的影响还具有一定的时间分布特征,即３类品系净繁殖量的差异主要集中在雌蝇繁殖的早期。因为雌蝇繁殖的后期产生的后代数占总后代数的比例很低且对种群发展贡献较小,Ｂ染色体的这种时间效应使得其携带者在自然界的生存竞争中更具优势。这些结果支持关于Ｂ染色体的杂合优势模型,但不支持目前占主导地位的寄生模型。     

银额果蝇武汉群体的B染色体研究

本研究发现,银额果蝇武汉群体的有丝分裂中期核型中存在着B染色体,其出现频率为38%,仅低于昆明,而高于其他地区。 B染色体形态为点状。细胞内染色体的不同步分裂可能是造成B染色体形成的一个原因。     

银额果蝇自然群体中的mtDNA多态性研究──Ⅱ．银额果蝇的起源和分化

本文以８种限制性内切酶对８个银额果蝇群体进行了ｍｔＤＮＡ的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。发现现生银额果蝇种群可以分成三个相对独立的群体,即东部、中部和西部群体。结合其它有关资料,我们推测,银额果蝇可能起源于马来半岛南部和加里曼丹岛一带。起初分成东西两支向北扩散。东支发展成现在的东部群体;西支则在中南半岛北部又分成两个支系;从而形成了现生银额果蝇群体的东部、中部和西部的地理分布模式。     

水稻条叶枯病毒基因产物在水稻和昆虫体内的Western印迹分析

将AStV基因组组分3编码的NS3和NC蛋白基因以及组分4编码的NCP和NSvc4蛋白基因分别克隆于大肠杆菌表达载体pGEX3X在IPTG诱导下,表达出4种融合蛋白。这些表达产物用于免疫动物产生多克隆抗血清。以制备的多克隆抗血清为探针,Western印迹分析了宿主植物和介体昆虫体内NS3、NC、NCP和NSvc4种基因表达的产物。NC蛋白的抗体可在病株和病毒粒子制备物中以及NCP抗血清仅在病株中检测到相应大小的产物,其余的均与预期值相停。     

激活蛋白处理水稻引发基因差异表达的研究

利用抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)成功构建了植物激活蛋白处理水稻与非处理组水稻中差异表达的消减cDNA文库。从文库中一共筛选到1756个克隆,通过反向Northern杂交,从中得到264个有效克隆并测序,利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对分析,获得28个上升表达差异基因。通过分析这些基因与植物的光合作用、营养物质的运输代谢等多种植物的生理生化功能相关。本研究为揭示激活蛋白的作用机理奠定基础。     

感染CDV的犬病料N、H、F基因的克隆与序列分析

目的了解病料中犬瘟热病毒（CDV）的变异情况,为犬瘟热的预防与治疗提供理论依据。方法采用RT-PCR方法对犬病料中CDV的血凝素蛋白（H）、融合蛋白（F）和核衣壳蛋白（N）基因进行扩增,将扩增产物克隆到pGEM-T-easy载体中测序,并进行序列分析。结果测定一株CDV的H、F和N基因大小分别为1863 bp、1653 bp和2235 bp。同源性分析表明,未发现碱基的插入和缺失。该病毒的H、F和N基因分别与国内强毒株BJ080127株的H基因、GN株的F基因和HL株的N基因亲缘关系最近,氨基酸同源性分别为97.3%、97.7%和99.3%。与国外标准野毒株A75-17在核苷酸水平上同源性依次为94.4%、93.8%和97.2%,与疫苗株CDV3在核苷酸水平上同源性分别为88.5%、88.8%和93.9%。系统进化树表明该病毒与国内强毒株在同一谱系。糖基化分析显示,该病毒在F基因3～5位氨基酸处多出1个糖基化位点。结论本研究从犬病料中成功克隆了犬瘟热病毒血凝素蛋白、融合蛋白和核衣壳蛋白,在F基因中新增了一个糖基化位点,为犬瘟热的遗传变异和流行学研究提供了分子生物学依据。     

植物基因表达转录分析中内参基因的选择与应用

管家基因能够在生物体细胞中表达和不断地被转录,对于维持细胞功能发挥重要作用,并在细胞中组成型稳定表达。随着基因表达研究的深入,发现许多管家基因的表达也受到不同程度的调控。选择合适的管家基因作为内参对于准确定量分析目标基因的表达水平至关重要。通过对植物基因表达研究中常用的内参对照基因的表达特性,综述了可以筛选作为内参对照基因的标准和条件的验证。     

基因芯片技术研究柽柳NaHCO3胁迫下基因的表达

运用基因芯片技术研究了NaHCO3胁迫下柽柳(Tamarix androssowii)基因的表达.将Cy5和Cy3两种荧光染料分别标记在NaHCO3处理和对照的柽柳cDNA上,将两种荧光探针混合,与载有柽柳基因的高密度芯片进行杂交并用芯片扫描系统进行扫描,通过Cy5与Cy3信号强度比值的计算研究基因的差异表达.共获得了89个差异表达的基因,其中,27个下调表达,62个上调表达.BlastX分析表明这些基因按功能可以分为光合作用、活性氧清除、渗透调节、信号传导与表达调控、代谢、发育相关、核糖体蛋白、蛋白质的分解与再生、转运类蛋白、水通道蛋白等几大类别.同时,发现了一些与盐胁迫相关的功能未知基因或未有任何功能信息的基因,这些基因可能在柽柳抗盐过程中具有重要作用.揭示了柽柳的抗盐胁迫涉及的几种重要途径,并获得了NaHCO3胁迫前后柽柳基因表达谱.     

豌豆肌动蛋白异型体基因的特异性表达

将分属三类豌豆（Pisum sativum）卷须肌动蛋白异型体（PEAc）的基因3'端进行了亚克隆,并利用限制性内切酶从中切聚了完整的3'非翻译区片段,将之做为特异性探针进行DIG标记,并对不同发育时间豌豆根、茎、叶及花粉中提取的总RNA进行点杂交分析。发现其中Ⅰ类（PEAcⅠ）和Ⅱ类（PEAcⅡ）在根、茎、叶中都有表达,但存在发育时间上的表达物质特异性,尤其中叶叶的差异较明显,Ⅲ类（PEAcⅢ）与前二者的差别更大,仅发现其有2d及28d的根、7d的茎及18d的叶中有表达。在花粉中,只有PEAcⅡ有少量的表达,说明在类异型体基因的表达还存在组织特异性。