大熊猫DNA序列变异及其遗传多样性研究

测定了来自马边、美姑、越西、宝兴、平武、青川、南坪和白水江等地40只大熊猫336～444bp的线粒体tRNA基因和D环区序列.在21个创立者中共检出9种线粒体DNA单倍型.发现大熊猫的遗传分化程度很低,地理群体间无显著的遗传隔离.大熊猫现生群体可能源于晚更新世,并受瓶颈效应的影响.在此之后,其遗传多样性得到了一定程度的恢复.     

DNA序列分析新进展

自从生物学家发现DNA是生命的遗传物质之后,便迫切地想知道它是如何携带信息及控制遗传的.这取决于对DNA分子中的碱基序列的分析.序列分析对于发现旧的基因,促进基因工程的发展有着重大意义.本世纪七十年代,世界上许多生物实验室相继进行这方面的研究.1977年,英国的Sanger序列测定的末端终止法,随后,Maxam和Gilbert等人提出     

DNA序列分析技术的发展

测定DNA的核苷酸序列,对于了解基因及其产物的结构、基因表达、及其表达的调控机制,乃至对于基因改造和分子进化研究等方面,均具有重要的意义。本文将就DNA序列分析技术的产生、应用和发展作一简单综述。一、DNA序列间接测定技术在分子生物学研究的早期,DNA序列信息只能由获得的氨基酸序列或RNA序列推测而来。在Waston和Crick的DNA双螺旋模型建立(1953年)不久,Sanger发明了氨基酸序列测     

大熊猫DNA指纹分析材料的初步研究

以圈养大熊猫４个家系,１３只个体的３１份粪便,尿液以及甲醛固定的睾丸组织等作材料,输出血液,被毛进行ＤＮＡ指纹分析,结果表明,同一个体的血液,被毛,粪便,尿液,以及甲醛固定的睾丸组织材料的ＤＮＡ指纹图谱完全一致。     

大熊猫LSM3 cDNA序列的克隆及序列分析

运用RT-PCR技术首次从大熊猫Ailuropoda melanoleuca的肌肉组织总RNA中成功克隆了LSM3的表达序列,并对其进行了测序及初步分析.结果 表明:大熊猫LSM3基因的表达序列含有一个完整的开放阅读框,长度为306 bp,编码102个氨基酸的蛋白质,分子量为11.845 kDa,pI为4.58,含有1个蛋白激酶C磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和1个细胞附着序列.进一步分析发现,大熊猫LSM3基因的表达序列与已报道的部分哺乳动物具有很高的相似性,其编码的氨基酸序列与其他哺乳动物完全一致.     

DNA序列分析技术及其现状

ＤＮＡ序列分析技术一直是分子生物学领域的一个重要研究课题。“人类基因组计划”的实施有力地推动了高速ＤＮＡ测序技术的发展。本文主要介绍国内外目前流行的经典的测序方法———各种改良的双脱氧链末端终止法,及近年来发展起来的一些全新的ＤＮＡ测序方法     

葡萄感霜霉病基因RAPD标记的序列分析

利用Ｗｉｚａｒｄ ＤＮＡ ｃｌｅａｎ－ｕｐ ｓｙｓｔｅｍ纯化葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ遗传标记的ＤＮＡ片段,用细菌质粒ｐＧＥＭ Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ克隆该片段,采用自动荧光ＤＮＡ测序仪对片段的核苷酸组成进行双向测序。来自欧洲葡萄粉红玫瑰的葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记由８３５对核苷酸及其特定序列组成。所获的感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记可以作为合成探针的基础,用于葡萄抗病育种过程中的早期选择及品种对霜     

大熊猫父权认定的DNA指纹圈分析

本文以大熊猫１４胎次,１９只幼子,２５只次雄兽个体的被毛、血液、精液、福尔马楷固定的器官组织、粪和尿等为材料作了ＤＮＡ指纹检测,（１）同一大熊猫个体的被毛、血液、精液、固定组织及粪、尿检测,其ＤＮＡ指纹图完全一致。（２）大熊猫无论１雄配１雌,２雄配１雌,３雄配１雌,甚至４雄配１雌,受配雌兽产任一子代个体的ＮＤＡ指纹图谱中,杂交谱带均分别来自父亲、母亲,以及父母双亲,没有亲带出现,无误地认定了１９只     

Dynal磁珠富集大熊猫微卫星标记

应用Dynal磁珠-生物素标记的微卫星探针与大熊猫基因组酶切片段杂交,捕获400—600bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pGEM-T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库。应用γ^32P标记的探针筛选文库,从2880个转化子中获得了260个阳性克隆。对54个序列进行了测序,并成功地设计了大熊猫微卫星引物37对。该方法能有效提高筛选微卫星标记的效率。     

大熊猫分娩活动的观察

本文报道了对6只大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)14次分娩活动的观察结果。大熊猫分娩前48小时至24小时即出现将分娩的征兆,其总产程约14至22小时左右。分娩时为纵向胎向;多数为胎上位,个别为胎侧位;胎势为前肢和头颈靠紧并伸直,尾、后肢并紧且自然伸直;多数胎儿为头、前足先露出,即前躯前置;少数为尾、后足、臂先露出,即后躯前置。     

雄性大熊猫配种期的性行为观察

本文通过对西安动物园大熊猫雄兽弯弯于１９８６－１９９１年与３只雌兽相继本交,爬跨３３次,交配２１次,产５胎,获６仔,育成６仔的性行为观察。获得雄兽在发情季节的爬跨与酱姿式,交配的时间与叫声,配种期的食量下降与活动量变化等资料。     

大熊猫脑源性神经营养因子基因的克隆与表达

参照人ＢＤＮＦ基因序列设计出一对引物和利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,首次从大熊猫基因组ＤＮＡ中扩增和克隆到ＢＤＮＦ基因,并使其在大肠杆菌中得到了表达。序列分析表明,大熊猫和人的ＢＤＮＦ基因的核苷酸序列同源性高达９４％。在推导的多肽序列中,除在前导肽区有两个氨基酸的差异外,大熊猫ＢＤＮＦ的成熟区与人和其它已报道的哺乳动物ＢＤＮＦ成熟区的氨基酸序列完全一致,显示了极高的保守性。本文首次在分子生物学水平上对大熊猫核基因组功能基因进行研究分析,其结果为深入开展大熊猫的神经系统疾病防治,神经生理以及分子进化,系统发育等方面的研究奠定了重要基础。     

秦岭大熊猫食物基地的初步研究

本文从研究大熊猫食物基地的角度出发,比较系统地讨论了秦岭大熊猫分布区的自然环境和竹林的基本概况。研究结果表明：1、奏岭大熊猫分布区的竹种资源丰富,有6属14种,竹林面积约8.43万公顷。2、构成大熊猫食物基地的竹种有3属3种,面积约占该区竹林总面积的99.7％。3、根据竹林类型、环境及大熊猫的利用状况,秦岭大熊猫的食物基地可以划分为3个小区。4、在正常情况下秦岭大熊猫食物基地至少可供7倍于今数量的大熊猫生存。     

马边大风顶自然保护区大熊猫种群生存力模拟分析

采用漩涡模型Vortex mondel 713 , 模拟了马边大风顶自然保护区大熊猫种群在未来100年内的变动趋势。结果显示: 在无交配限制、无密度制约、无近亲交配衰退等条件下, 马边大风顶自然保护区大熊猫种群数量呈下降趋势; 在考虑近交衰退的影响后, 遗传多样性水平降低, 灭绝率提高; 竹子开花虽能加速大熊猫种群的绝灭, 但由于保护区分布有多个竹种,因此并不会对大熊猫种群产生灾难性影响; 但是人为捕杀可迅速减少大熊猫种群数量, 加速其灭绝过程。因此, 对该保护区大熊猫进行保护的最重要措施就是严格控制人为捕杀, 并保护栖息地及走廊带。     

佛坪大熊猫种群生存力分析的初步报告

应用种群生存力分析的一些原理和方法,借助旋涡模型,对佛坪大熊猫在未来１００年的种动态进行了预测,并对其长期存活状况以及它在环境波动、迁移扩散状太民的变化、杠息地变化和不同灾变条件下的种群动态进行了模拟。结果显示：佛坪大熊猫的种群数量在１００年内大体稳定,略有下降的趋势。     

应用RAPD技术对大熊猫分类地位的探讨

采用ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等方法对大熊猫与小熊猫、马来熊、浣熊等共有的一条１．３ｋｂ的ＲＡＰＤ产物片段进行了初步分析。研究结果显示,来自于大熊猫的此共有片段可能为一重复序列,并且其内部含有多个随机引物ＡＢ１－０８的结合位点。以此来自于大熊猫的１．３ｋｂ片段为探针进行杂交,发现马来熊ＲＡＰＤ产物中的对应片段显示了很高的同源性,而小熊猫和浣熊ＲＡＰＤ产物则无相应的杂交带。这暗示,从分类地位上来看,大熊猫与熊科马来熊的亲缘关系应更近于与小熊猫和浣熊的亲缘关系,应与马来熊一样划分为熊科。本研究为大熊猫分类地位的确定提供了又一分子生物学证据     

大熊猫胃肠道内分泌细胞分布型的研究

本文用ＰＡＰ法对３只大熊猫胃底,幽门腺区、十二脂肠,空肠,回肠、结肠和直肠的五羟色胺,生长抑素,胃素,胆囊收缩囊,神经降压素、胃动素、抑胃多肽、胰高血糖素、血管活性肠肽和内啡肽的ＩＲ细胞进行了研究。结果表明,大熊猫胃肠道粘膜上皮中具有前八种ＩＲ细胞。对７年龄个体胃肠各段相对数量的比较和各段内分布情况的观察结果表明,除五羟色胺ＩＲ细胞在空肠分布较多外,大多数种类的ＩＲ细胞集中分布于幽门区和十二指肠,     

大熊猫父权认定的DNA指纹图分析

本文以大熊猫１４胎次,１９只幼子,２５只次雄兽个体的被毛、血液、精液、福尔马林固定的器官组织、粪和尿等为材料作了ＤＮＡ指纹检测。（１）同一大熊猫个体的被毛、血液、精液、固定组织及粪、尿检测,其ＤＮＡ指纹图完全一致。（２）大熊猫无论１雄配１雌,２雄配１雌、３雄配１雌,甚至４雄配１雌,受配雌兽所产任一子代个体的ＤＮＡ指纹图谱中,杂交谱带均分别来自父亲、母亲,以及父母双亲,没有新带出现,无误地认定了１９只幼子的真正父亲,排除了非父。（３）３只大熊猫雌兽的５个双胞胎,即１０只子代个体的ＤＮＡ指纹图谱,均具有个体特异性,表明为异卵双生,其中４个双生子为异卵异父双生,为大熊猫在一个发情期不一定同时排卵提供了佐证,亦为圈养雌兽发情高峰期用多只雄兽作多次配种或输精,能提高受孕产仔率提供了理论和应用依据。（４）ＤＮＡ指纹技术用于大熊猫的亲子鉴定,灵敏稳定,准确无误,为圈养大熊猫多雄配１雌,增加受配雌兽的受孕机会,提高产子率提供了鉴别手段,解除了多雄配１雌,其子代的父亲是谁的后顾之忧。（５）应用寡核苷酸探针ＬＺＦ－１作大熊猫亲子鉴定较ＪＨ１２．６探针更为适合     

大熊猫个体不同性活跃能力的行为比较

以焦点取样法对卧龙自然保护区的２０只（雄：雌＝１：１）不同性活跃能力的圈养熊猫行为进行了观察。结果表明：在非交配季节，性活跃雄性蹭阴、嗅闻和尿粪标记频次显著多于不活跃雄体；性活跃雌性活动、探究、嗅闻和尿粪标记频次显著低于性不活跃雌体。在交配季节，性活跃雄性蹭阴、咩叫和呼气频次显著多于性不活跃雄性，尿粪标记频次有较性不活跃雄体增加、修饰频次有较性不活跃雄体减少的趋势，但差异未达到显著水平；性活跃雄性