生物素标记核酸探针的分子杂交技术及其应用

核酸分子杂交是基于核酸链间互补碱基对的特异性结合,测定核酸碱基顺序同源性的一种现代技术,是基因工程、分子遗传及医学诊断中常用的方法。该法较常规诊断法灵敏度高、特异性强,目前,已广泛应用于重组DNA的筛选、基因分祈、染色体基因定位及病毒病诊断等方面。     

光敏生物素标记cDNA探针在肾综合征出血热实验诊断中的初步应用

本文用光敏生物素标记的R3 cDNA探针杂交检测了HFRS患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸。结果42份淋巴细胞标本中30份为阳性,48份血清标本中有24份出现阳性杂交信号,81份尿沉淀细胞标本中53份为阳性,表明将此光敏生物素标记的cDNA探针用于HFRS实验诊断和致病机理的研究是可行的。     

应用光敏生物素标记核酸探针鉴定分枝杆菌的研究

用光敏生物素标记非结核分枝杆菌临床分离株及标准分枝杆菌全染色体ＤＮＡ制成探针,与已知标准牛分枝杆菌（ＢＣＧ株）及不同种的非结核分枝杆菌ＤＮＡ杂交,可快速将分支杆菌鉴定到种,同时以大肠埃希氏菌做阴性对照,显示良好的特异性和准确性。此种方法具有鉴定速度快、操作简便、稳定性好及对人体无害等特点,适用于结核杆菌和非结核分枝杆菌的菌种鉴定。     

耐热对硝基苯磷酸酶的酶学性质

通过分离纯化和酶学性质测定 ,确定耐热对硝基苯磷酸酶 (p nitrophenylphosphatase)是金属酶蛋白 ,活性部位含有镁离子 ;该酶是中度耐热蛋白质 ,金属离子有助于提高其热稳定性 .该酶的Km 为 3 0 31mmol L ,Vmax为 313 5 μmol·min-1·mg-1;二级结构中大约有 74 5 %α螺旋 ,2 5 5 % β转角 .在pH 7 0～ 12 0范围内相当稳定 .该酶在SDS溶液中稳定性较差 ,在TritonX 10 0溶液中较为稳定 ,在Tween 2 0溶液中很稳定 .     

长臂光敏生物素标记葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因cDNA探针的制备及其在检测上的应用

由葡萄扇叶病毒（Ｇｒａｐｅｖｉｎｅｆａｎｌｅａｆｖｉｒｕｓ,ＧＦＬＶ）导致的葡萄扇叶病在世界各地葡萄园内均有发生,是最为普遍和严重的病毒病害之一,感病葡萄可减产２０％～８０％。近年来,许多国家开展了葡萄脱毒苗木的培育和推广工作,同时进行了葡萄扇叶病毒...     

一种切口平移法制备生物素标记核酸探针的简便方法

用切口平移法制备生物素标记的核酸探针,其所用试剂质量稳定、可靠,标记重复性好,且制备的探针易长期保存.我们在制备人IL-6 cDNA等基因探针的实验中,对常规的切口平移法制备生物素标记核酸探针的方法作了简化改进,省略了分离步骤,经斑点杂交试验证明效果良好.     

应用生物素标记DNA探针检测伪狂犬病病毒的研究

应用生物素标记ＤＮＡ探针检测伪狂犬病病毒的研究王琴,郭万柱,阴文奇（四川农业大学动物科技学院,四川雅安,６２５５０１４）关键词伪狂犬病毒,核酸,杂交,检测核酸杂交技术已广泛用于检测畜禽疱疹病毒和其它动物病毒,已报道ＰＲＶ－ＤＮＡ的探针方法有ＲＮＡ－Ｄ...     

一株降解对氯硝基苯的Comamonas sp. CNB1的分离鉴定及其降解特性

从处理某化工厂污水的活性污泥中分离到一株降解对氯硝基苯的细菌CNB1菌株。经过对其形态特征、生理生化、以及16S rDNA序列分析,该菌株初步鉴定为Comamonas sp.,进一步研究表明,该菌株能够以对氯硝基苯为唯一碳源、氮源和能源生长。生长过程中,氯离子释放同步于对氯硝基苯降解,且氯离子的释放量与对氯硝基苯的降解量相当。该细菌利用对氯硝基苯生长的最适生长温度和pH分别为28℃和9.0。测定了降解途径中相关酶的活性,表明初始降解过程是由对氯硝基苯还原酶催化的硝基还原反应,芳环的裂解是由2_氨基苯酚1, 6双加氧酶催化。     

对硝基苯纤维二糖苷（PNPC）结合于外切纤维素酶I（CBHI）时分子构型和构象变化的研究

以固定浓度的外切纤维素酶I（1,4-β-D-glucan cellobiohydrolase I,CBHI）,对不同浓度的对硝基苯纤维二糖苷（p-nitrophenol-cellobioside,PNPC）在4℃下进行结合．以紫外线光谱、荧光光谱的变化和等温滴定量热法（isothermal titration calorimitry,ITC）分别确定酶的饱和结合位点数（saturation binding point,SBP）．然后,对在4℃和SBP条件下,结合时形成的“PNPC-CBHI”复合物进行PNPC分子构型变化和CBHI分子构象变化的分析．结果表明,在水解反应不能进行的条件下,CBHI结合PNPC的反应是一个由负焓变（-△H）控制的不可逆的放热过程．结合可导致PNPC的构型转变为PNP（对硝基苯）分子构型,而CBHI的构象变化可循环发生．“PNPC-CBHI”复合物与CBHI和PNPC之间不存在可逆性的平衡过程,在酶分子不断循环进行的结合／解离过程中,由CBHI构象变化提供的能量,使PNPC分子不断转化为PNP分子构型,结合复合物解离出PNP与纤维二糖后,再生的CBHI才可与PNPC结合．并对这一结果应用于解释酶催化机理的普适性进行了讨论．     

RNA—RNA原位杂交实验条件探讨

将Vigilin和qroal(Ⅰ)cDNA亚克隆到pGEM3Z和pGEM4Z载体,体外转录合成35s标记的cRNA探针。经RNA凝胶电泳,Southern Northern,杂交检查探针长度,杂交特性和特异性,通过系列实验探讨了RNA-RNA原位杂交实验中固定、杂交前处理、杂交温度,探针量、探针长度,洗脱严格性和RNA酶处理等对杂交结果的影响,建立了简化的RNA-RNA原位杂交方法。     

神经网络优化非水相脂肪酶催化合成抗坏血酸油酸酯的条件研究

抗坏血酸油酸酯具有强抗氧化作用．为了获得脂肪酶催化合成抗坏血酸油酸酯的最适条件,主要研究了反应温度、脂肪酶量、油酸量对抗坏血酸油酸酯合成效果的影响．采用中心组合设计和动量梯度下降神经网络对反应条件网络进行训练仿真,并利用训练好的网络对催化酯化工艺条件进行预测．研究结果表明：经过训练的网络可以很好的模拟反应条件,得到了脂肪酶催化反应的最佳工艺参数．当抗坏血酸0．8g时,反应温度56℃,油酸量0．95g,固定化脂肪酶量0．74g,添加分子筛条件下,抗坏血酸油酸酯的转化率为46.5％．该方法为抗坏血酸酯化催化效果的预测提供了一条可行的途径．     

Synthesis and Immunomodulating Activity of New Amino Acid Derivatives of Glycyrrhizic Acid and Its Methyl Ester

New amino acid derivatives of glycyrrhizic acid and its methyl ester were selectively synthesized using active N-succinimide esters. The compounds with residues of glycine ethyl ester and alanine methyl and butyl esters increased the level of agglutinins and hemolysins in blood serum of mice two- to threefold in comparison with the control upon parenteral administration at a dose of 2 mg/kg for 14 days.     

Specificities of Human and Rat Brain Enzymes of Cholesterol Ester Metabolism Toward Very Long Chain Fatty Acids: Implication for Biochemical Pathogenesis of Adrenoleukodystrophy

Abstract: Specificities of the cholesterol-esterifying enzyme and the three cholesterol esterases in rat brain with respect to the chain length of fatty acids were examined. For each of the hydrolases, activities toward cholesteryl lignocerate and cerotate were generally less than 1% of that toward cholesteryl oleate. However, both lignoceric and cerotic acids were esterified at rates approximately 10% of that for oleic acid. In postmortem human control and adrenoleukodystrophy brains, the esterifying activity toward cerotic acid was on the average 25% of that toward oleic acid. The abnormal accumulation of cholesterol esters with very long chain fatty acids observed in adrenoleukodystrophy can therefore occur in the absence of deficient activities of the cholesterol esterases, if the free fatty acid pool of the brain contains an abnormal amount of very long chain fatty acids.     

L-酪氨酸苄酯的合成及其影响因素研究

以L-酪氨酸和苯甲醇为原料合成一种新型的L-酪氨酸衍生物——L-酪氨酸苄酯。首先用苯甲醇与氯化亚砜反应生成氯化亚硫酸酯,合成物再与L-酪氨酸发生酯化反应得到L-酪氨酸苄酯,其结构经质谱(MS)分析法确证。在此基础上研究了影响该合成工艺的主要因素,即原料配比、反应温度、反应时间、pH值。结果显示合成L-酪氨酸苄酯的较佳工艺条件为:物料摩尔比mol(SOCl2)∶mol(L-酪氨酸)=1.3∶1.0,室温下反应3h,120℃下反应2h,后处理溶液pH为7.5。本工艺适宜于工业化大规模生产。     

核酸杂交技术在微生物生态学上的应用

由于自然界中大部分的微生物种类到目前为止仍不可培养,传统基于培养和纯种分离的技术在研究微生物生态时面临很大障碍。分子生物学的进展为诸多长期困扰微生物学研究的问题提供了解决办法。核酸杂交技术已被证实在微生物系统分类的微生物生态等领域的研究具有巨大潜力并已被广泛应用。综述核酸杂交技术的基本原理、实际应用及其主要优点和局限性,以及提高其检测灵敏度和特异性的方法,并对该技术的应用前景作了探讨。     

核酸杂交技术在微生物生态学上的应用

由于自然界中大部分的微生物种类到目前为止仍不可培养,传统基于培养和纯种分离的技术在研究微生物生态时面临很大障碍。分子生物学的进展为诸多长期困扰微生物学研究的问题提供了解决办法。核酸杂交技术已被证实在微生物系统分类和微生物生态等领域的研究具有巨大潜力并已被广泛应用。综述核酸杂交技术的基本原理、实际应用及其主要优点和局限性,以及提高其检测灵敏度和特异性的方法,并对该技术的应用前景作了探讨。     

Stabilization of duplex DNA and RNA by dangling ends studied by free energy simulations

Single unpaired nucleotides at the end of double‐stranded nucleic acids, termed dangling ends, can contribute to duplex stability. Umbrella sampling free energy simulations of dangling cytosine and guanine nucleotides at the end of duplex and single stranded RNA and DNA molecules have been used to investigate the molecular origin of dangling end effects. In unrestraint simulations, the dangling end nucleotides stayed close to placements observed in experimental structures. Calculated free energy contributions associated with the presence of dangling nucleotides were in reasonable agreement with experiment predicting the general trend of a more stabilizing effect of purine vs. pyrimidine dangling ends. In addition, the calculations indicate a more significant stabilizing effect of dangling ends at the 5′‐end vs. 3′‐end in case of DNA and the opposite trend in case of RNA. Both electrostatic and van der Waals interactions contribute to the duplex stabilizing effect of dangling end nucleotides. The free energy simulation scheme could also be used to design dangling end nucleotides that result in enhanced duplex stabilization. © 2013 Wiley Periodicals, Inc. Biopolymers 101: 418–427, 2014.     

微生物脂肪酶在正庚烷中合成短链芳香酯的研究

用微生物脂肪酶在溶剂相中合成短链芳香酯的研究表明：脂肪酶在正庚烷中催化合成芳香酯转化率比水相中有明显的优势。在10个不同来源的商品脂肪酶中,选择了其中对己酸乙酯转化率在85％以上来自Mucor miehei,Candida rugosa和Porcine pancreas的脂肪酶对7个短链脂肪酸酯进行合成,其中Mucor miehei脂肪酶对这几个芳香酯48 h合成转化率均在90％以上,乙酸乙酯21．28g^-1．丙酸乙酯19．6gL^-1,丁酸乙酯26．61gL^-1,戊酸乙酯24．95gL^-1,己酸乙酯产量34.60gL^-1,丁酸异戊酯30.76gL^-1,乙酸异戊酯12．76gL^-1。同时．Mucor miehei脂肪酶在正庚烷批式反应中稳定性也较好,己酸乙酯半衰期为120h,最少的乙酸乙酯也在140h。并且还发现脂肪酶在正庚烷中分解酶活降低很多,但对其酯合成转化率没有直接的影响。