湘西蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量的测定

采用超声萃取法提取湘西蛇足石杉总生物碱,用高效液相色谱法同时测定其石杉碱甲、乙和丙含量,并分析其在植株不同部位的分布。结果表明:湘西4个样地蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量基本一致,分别达到0.5‰、0.3‰和0.04‰;但植株不同部位三种石杉碱含量差异显著,其中石杉碱甲和乙的分布均为叶>茎>根,石杉碱丙则是根大于叶和茎。由此可知,湘西蛇足石杉具有资源优势,石杉碱在植株的分布具有明显的部位选择性;采用HPLC可同时检测石杉碱甲、乙和丙,方法简单快速、准确可靠。     

蛇足石杉产石杉碱甲内生真菌的分离鉴定

从9月份采集的野生药用植物蛇足石杉(Huperzia serrata)的茎、叶中分离纯化得到15株内生真菌,将上述内生真菌进行液体培养后,通过薄层层析法(TLC)和高效液相法(HPLC)对其代谢产物进行检测,结果表明菌株WX13产石杉碱甲(Huperzine A,HupA)。运用形态和培养特性观察,初步确定菌株WX13属于镰刀菌属(Fu-sarium sp.)。     

蛇足石杉中产石杉碱甲内生真菌的分离和鉴定

【目的】从野生蛇足石杉(Huperzia serrata)中分离筛选产石杉碱甲的内生真菌。【方法】采用薄层层析及高效液相色谱法对内生真菌代谢产物进行测定和分析以期分离获得产石杉碱甲菌株,运用形态及ITS序列分析方法对产石杉碱甲菌株进行鉴定,并利用连续传代方法考察菌株遗传稳定性。【结果】经筛选获得一株产石杉碱甲内生真菌NSH-5,经形态学鉴定及ITS序列分析鉴定为轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides),其石杉碱甲产量为11.76 mg/100 m L,菌株经20次连续传代后遗传稳定。【结论】NSH-5菌株为一株具有产石杉碱甲能力的轮枝镰孢菌,该菌株的发现为生物合成石杉碱甲提供了新的菌种资源。     

武夷山脉石杉科植物石杉碱甲含量的研究

石杉植物因所含Hup A为高效、可逆、高选择性的中枢性乙酰胆碱酯酶抑制剂而受关注。实地采集标本并用改进的HPLC法测定了武夷山脉4种石杉科植物及不同居群间的石杉碱甲(Hup A)含量。结果显示石杉碱甲在长柄石杉、四川石杉、有柄马尾杉和华南马尾杉中均有分布,其中以有柄马尾杉中含量最高,达0.1510%;含量最低的是四川石杉,为0.016%。该地区优势种长柄石杉（千层塔）11个居群的石杉碱甲含量测定显示武平县梁野山和三元区中村乡两个居群含量较高,分别为0.0636%和0.0519%。对石松科部分种进行石杉碱甲测定,认为藤石松等不含石杉碱甲。结果表明武夷山脉地区拥有优良的石杉碱甲植物资源。     

蛇足石杉产石杉碱甲内生真菌SNZ-12的分离及鉴定北大核心CSCD

为了获取具有应用价值的产石杉碱甲内生菌,本文从蛇足石杉分离得到60株内生真菌,采用高效液相色谱法和质谱法分别检测各个真菌的提取物,发现内生真菌SNZ-12的提取物具有与石杉碱甲标品相近的色谱特征峰和保留时间(8. 994 min)以及相同的质谱特征峰((M+H)+=243. 1),说明内生真菌SNZ-12可以产石杉碱甲,其石杉碱甲产量约为1. 01 mg/L;并通过结合内生真菌SNZ-12的形态特征和18S r DNA序列分析,将其鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。本文结果为利用微生物发酵生产石杉碱甲研究提供了潜在的菌种资源。     

千层塔中产石杉碱甲内生真菌的研究

从千层塔中分离产石杉碱甲内生真菌。采用平板分离法分离千层塔内生真菌,通过抑制乙酰胆碱酯酶活性和抗氧化活性筛选,结合薄层层析和HPLC测定活性菌株中的石杉碱甲含量,通过形态学ITS-rDNA序列分析鉴定内生真菌。共分离得到94株内生真菌,筛选到S29、L44、S94共3株乙酰胆碱酯酶抑制活性和清除DPPH·自由基活性都在50%以上,筛选到一株S29能产石杉碱甲的菌株。摇瓶发酵产量为每克干菌体的石杉碱甲含量为50.64μg。形态学与ITS-rDNA序列分析法鉴定该内生真菌为Podospora sp.属。药用植物千层塔体内Podospora sp.属的内生真菌可产石杉碱甲。     

从蛇足石杉中超声提取石杉碱甲和石杉碱乙

用正交试验确立了超声提取蛇足石杉生物碱的最佳条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、超声时间、超声功率等因素的影响。结果表明,在室温下超声提取的最优条件为：酸浓度O．8％(v／v),液固比例20：1,超声功率600W,超声15min。三次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是9r7．3％和93．5％,相对标准偏差分别为1．31％和1．40％(n=3)。与传统的回流提取工艺相比,过程时间从2h缩短为15min,回收率提高了10％以上。     

一株产石杉碱甲的蛇足石杉内生真菌的分离和鉴定

从药用蕨类植物蛇足石杉叶中分离得到53株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）中发酵后对内生真菌发酵提取物液进行TLC、HPLC 和ESI-MS检测,结果表明菌株LF40为产石杉碱甲内生菌株,含量达80.1μg/gdcw,并具有体外乙酰胆碱酯酶抑制活性;运用形态学及ITS-rDNA序列分析方法对菌株LF40进行鉴定,确定为黄曲霉Aspergillus flavus LF40。     

蛇足石杉内生真菌Shiraia sp. Slf14全基因组序列分析

内生真菌Shiraia sp. Slf14是从植物蛇足石杉(Huperzia serrata)中分离出来的一株能产生石杉碱甲和竹红菌素A的菌株。为了解菌株Shiraia sp. Slf14的基因特征,对该菌株进行全基因组测序。基于二代测序技术对蛇足石杉内生真菌Shi-raia sp. Slf14的全基因组进行测序分析,通过生物信息学相关软件进行质量控制及组装、功能注释、比较基因组学分析及系统发育分析和次生代谢产物分析。内生真菌Shiraia sp. Slf14的基因组大小为32 067 383 bp, N50的值为525 954 bp, G+C含量为47.96%;预测得到基因组中共有11 242个编码序列(coding sequences, CDS)、 106个tRNA和27个rRNA;在GO、 KEGG、 KOG和CAZY中分别注释到3 822个、 3 223个、 8 837个和563个基因;系统发育结果表明内生真菌Shiraia sp. Slf14属于竹黄菌属(Shiraia)。预测结果表明,内生真菌Shiraia sp. Slf14中存在50个次生代谢产物合成基因簇,具有合成多种...     

从千层塔中微波协助提取石杉碱甲和石杉碱乙

首先从 8种溶剂中筛选出硫酸作为微波协助提取的浸提溶剂 ,然后用正交试验确立了千层塔生物碱的最佳提取条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标 ,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、微波处理时间等因素。结果表明 ,在室温下微波协助提取的最优条件为 :酸浓度 0.8% (v/v) ,液固比例 2 5∶1 ,微波处理时间 90s。 3次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是 93.7%和 93.9% ,相对标准偏差分别为 1.79%和 1.5 6% (n =3)。与传统的回流提取工艺相比 ,过程时间从 2h缩短为 90s,回收率提高了 1 0 %以上。     

A novel endophytic Huperzine A–producing fungus,Shiraia sp. Slf14, isolated from Huperzia serrata

Aims: To characterize and identify a novel Huperzine A (HupA)‐producing fungal strain Slf14 isolated from Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev. in China. Methods and Results: The isolation, identification and characterization of a novel endophytic fungus producing HupA specifically and consistently from the leaves of H. serrata were investigated. The fungus was identified as Shiraia sp. Slf14 by molecular and morphological methods. The HupA produced by this endophytic fungus was shown to be identical to authentic HupA analysed by thin layer chromatographic, High‐performance liquid chromatography (HPLC), LC‐MS, ¹H NMR and acetylcholinesterase (AChE) inhibition activity in vitro. The amount of HupA produced by Shiraia sp. Slf14 was quantified to be 327·8 μg l^?1 by HPLC, which was far higher than that of the reported endophytic fungi, Acremonium sp., Blastomyces sp. and Botrytis sp. Conclusions: The production of HupA by endophyte Shiraia sp. Slf14 is an enigmatic observation. It would be interesting to further study the HupA production and regulation by the cultured endophyte in H. serrata and in axenic cultures. Significance and Impact of the Study: Although the current accumulation of HupA by the endophyte is not very high, it could provide a promising alterative approach for large‐scale production of HupA. However, further strain improvement and the fermentation process optimization are required to result in the consistent and dependable production.     

千层塔内生真菌SHB发酵产石杉碱甲条件的研究

为提高千层塔产黄青霉属内生真菌SHB液体发酵产石杉碱甲的产量,通过单因子和正交试验研究了真菌SHB液体发酵的条件。结果表明,千层塔内生真菌SHB液体发酵产石杉碱甲的适宜条件：温度为28℃,起始pH为6．4,接种量为12％,种龄为48h,转速为160r／min,发酵时间为8d。在此条件下,石杉碱甲的产量可达4．761μg／mL。     

Biotransformation of Huperzine B by a Fungal Endophyte of Huperzia serrata

The biotransformation of huperzine B (hupB), one of the characteristic bioactive constituents of the medicinal plant Huperzia serrata, by a fungal endophyte of the host plant was studied. One new compound, 8α,15α‐epoxyhuperzine B ( 1 ), along with two known oxygenated hupB analogs, 16‐hydroxyhuperzine B ( 2 ) and carinatumin B ( 3 ), was isolated and identified. The structures of all the isolates were deduced by spectroscopic methods including NMR, MS, IR, and UV spectra. The known compounds 2 and 3 were obtained from a microbial source for the first time. To the best of our knowledge, it is the first report on the microbial transformation of hupB and would facilitate further structural modification of hupB by chemo‐enzymatic method. In the LPS‐induced neuro‐inflammation injury assay, 8α,15α‐epoxyhuperzine B ( 1 ) exhibited moderate neuroprotective activity by increasing the viability of U251 cell lines with an EC₅₀ of 40.1 nm .     

蛇足石杉内生真菌无柄盘菌Pezicula sp. JR14中抑制乙酰胆碱酯酶的次级代谢产物分离

采用形态学及ITS-rDNA序列分析法,对具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的蛇足石杉内生菌株JR14进行鉴定,确定为无柄盘菌Pezicula sp.。开展了乙酰胆碱酯酶抑制活性化合物的分离,从Pezicula sp. JR14乙酸乙酯提取物中分离到4个化合物,利用核磁共振及质谱技术将其鉴定为behenic acid (1)、himeic acid B (2)、secalonic acid A (3)和palmitic acid (4)。采用改进的Ellman比色法对分离的化合物进行活性检测,结果表明,himeic acid B (2)具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其IC₅₀为205μg/mL（0.64mmol/L）。