妊娠早期胚泡、子宫液和子宫内膜的蛋白质及其与着床的关系

哺乳动物胚泡着床是涉及胚泡和子宫内膜之间的相互作用问题,研究着床机理或从着床途径考虑控制生育,可从如何抑制胚泡着床能力或改变子宫内膜使其不适于胚泡着床的条件着手。近年来,有关这两方面的研究已积累了不少资料,特别是蛋白质分析技术的发展。许多研究者报道了在各种动物早期妊娠过程中,随体内激素水平的变化,子宫液(包括子宫内膜和胚泡)蛋白质或小肽物质有量和种类的细微变化,这些变化关系到母体对妊娠的识别、胚泡与子宫的粘附和胚泡的侵入。     

小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库构建

按照LongSAGE文库构建原理,先后经子宫内膜总RNA提取、cDNA合成、130bp双标签的产生、PCR扩增、34bp双标签形成、连接成串联体、与载体连接、转化大肠杆菌等相关步骤构建小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库。经证实所构建文库的阳性克隆率达100%,克隆中插入的串联体长度介于400￣500bp之间,成功构建了小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库。     

双向凝胶电泳分析小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁组织蛋白质组

目的 :研究小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁蛋白质表达图谱及其差异。方法 :用固相pH梯度双向凝胶电泳分离 5d .p .c .(dayspostcoitum)小鼠子宫内膜胚泡着床点和着床旁总蛋白 ,同时分离同龄未交配小鼠子宫内膜总蛋白 ,银染显色 ,PDQuest 2DE软件分析。结果 :图像分析测得三块胶的匹配率达 74 5 %以上 ,在等电点pI 3～ 1 0、分子量 1 4 4～ 75 4kDa范围内分离得未交配小鼠子宫内膜蛋白点大约 81 0个 ,受孕小鼠子宫内膜胚泡着床旁和着床点蛋白质点分别大约为 95 0个和 1 0 4 0个 ,其中至少 90个蛋白点在三种不同的生理状态间有 2倍以上的量变。结论 :在“着床窗口期” ,小鼠子宫内膜特别是着床位点内膜合成更多的蛋白质 ,以适宜胚泡成功地植入。     

三种小分子肽对妊娠大鼠子宫内胚泡着床数的影响

三种小分子肽对妊娠大鼠子宫内胚泡着床数的影响金秀东，张际绯，滕芳美，王春梅，张绪东（牡丹江医学院生理学教研室牡丹江１５７０１１）胚泡着床是哺乳动物繁殖的非常重要阶段，干扰胚泡着床，对于控制生育有着重要意义。近年有实验证明，酪氨酸类似物及多种人工合成小...     

胚泡着床窗口的分子调控

着床窗口是指当胚胎发育到胚泡阶段时,子宫也增殖和分化到可接受状态,二者相互作用使胚泡着床的短暂时间.雌激素和孕酮是该过程的综合调控分子,它们通过多种局部信号分子的介导,使子宫中的各种细胞类型增殖、分化,为着床窗口的开放做出相互协调的反应.子宫与胚胎在着床窗口通过前列腺素、组织胺、降钙素、多种细胞因子和生长因子的旁分泌作用进行分子对话,使胚泡滋养层与子宫内膜上皮发生附着反应.着床窗口一旦开放,即自动向非接受态转化.     

白血病抑制因子及其在胚胎发育和胚泡着床中的生理功能

白血病抑制因子在哺乳动物妊娠早期中具有重要的生物学功能。胚源和母体白血病抑制因子可作为胚胎营养因子促进胚胎的发育;母体白血病抑制因子可能通过调节子宫接受性和／或激活胚泡从而启动胚泡着床。     

半夏蛋白的抗兔胚泡着床作用

半夏蛋白有很强的抗兔胚泡着床作用,子宫内注射500μg,抗着床率达100%。经半夏蛋白作用后的子宫内膜能使被移植的正常胚泡不着床。在子宫内经半夏蛋白孵育的胚泡移植到同步的假孕子宫,着床率随孵育时间延长而降低。用辣根过氧化物酶标记半夏蛋白的定位实验表明该蛋白结合在子宫内膜腺管的上皮细胞膜上。已知半夏蛋白有类似凝集素的活性,能与甘露聚糖结合,它的抗着床作用可能是由于该蛋白结合了母体和(或)子体细胞膜上的某些糖结构,改变了细胞膜的生物学行为所致。     

兔胚泡肽合成片段及其与着床有关的生理功能

本研究测定了兔胚泡肽（ＲＢＰ２）的氨基酸序列,它由５４个氨基酸组成,其序列的第４位氨基酸至第３４位氨基酸与兔子宫珠蛋白Ｎ端氨基酸序列完全相同。用计算机软件系统模拟分析,从５４个氨基酸中选取了抗原性最高的一段氨基酸（ａａ２０－ａａ３４）,然后人工合成了含有１５个氨基酸的小肽片段（ＳＰＦ）。研究表明：用溴脱氧尿嘧啶掺入淋巴细胞的方法测定了ＳＰＦ对细胞增殖作用的影响,当浓度范围在８０μｇ／ｍｌ至３２０μ     

雌激素在兔胚泡着床中的作用——子宫雌激素受体的研究

为了验证雌激素作用存在于完整的和去卵巢兔胚泡着床过程中,本文用~3H—雌二醇交换法测定了早期妊娠 D_3、D_5、D_7子宫组织的雌二醇受体浓度,并与去卵巢后仅补充孕酮的 D_7子宫作比较。结果显示:在 D_3、D_5、D_7的子宫细胞浆和细胞核中都存在雌二醇受体。妊娠7天去卵巢兔的子宫细胞核中雌二醇受体量与妊娠7天卵巢完整的兔作比较,二者无明显差异。这说明去卵巢后子宫细胞核中雌激素受体浓度并未受影响,因此雌激素作用依然存在。关于胚泡是否有雌激素受体的问题,本工作在胚龄5、6、7天胚泡中未测得雌二醇受体。据此,胚泡着床时,雌激素的作用可能主要通过母体子宫组织而发挥其生理效应。     

在大鼠胚泡着床过程中孕酮及其受体含量的变化

本文测定了早期妊娠大鼠(D_1—D_7)血清和子宫组织中孕酮和孕酮受体含量;对着床点和未着床子宫组织中的孕酮和受体含量作了比较;分析了血清和子宫组织中孕酮与雌二醇-17β含量的比值。初步结果表明:(1)血清孕酮含量在 D_4明显升高,达到44.13±5.69ng/ml,但子宫组织中的孕酮含量一般随妊娠时间逐渐升高;(2)胞质受体在 D_1最高(45304±1008分子/细胞),在 D_6最低(1121±149分子/细胞),而核受体含量在 D_6比 D_5和 D_7显著升高;(3)孕酮与雌二醇-17β的比值无论在血清和子宫组织中都是在 D_5和 D_7为最高;(4)在 D_6着床点子宫组织孕酮含量明显高于非着床部位,在 D_7两者无异;(5)在 D_6着床点中核受体含量要比未着床点部位高4倍;在 D_7着床点中胞质受体含量明显高于 D_6,也明显高于 D_7中非着床部位子宫胞质受体量。上述资料表明,(1)在 D_5(大鼠胚泡着床时间)子宫贮留更多的孕酮,这可能有利于子宫处于一种“静态”环境,以利于胚泡着床;(2)在 D_6着床点孕酮核受体含量增加,这可能是由于着床的胚泡局部分泌一种或一些因子,发动或加强激素受体复合体由细胞质向细胞核的转入,(3)在 D_7子宫组织中,孕酮水平明显上升,这说明胚泡至少在 D_7已能合成孕酮。     

PTEN在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨存检测肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase andtensinhomologdeletedonchromosometen)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨PTEN在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用实时荧光定量聚合酶联反应(real.time fluorescent quantitative PCR.FQ.PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕及孕1、3、4、5、7 d小鼠子宫内膜PTEN mRNA和蛋白的表达;子宫角注射PTEN反义寡核苷酸观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示,妊娠小鼠子宫内膜组织PTENmRNA的表达高于未妊娠小鼠,且随着妊娠天数的增加表达逐渐增强,到妊娠第5天达最高.免疫组织化学分析显示,PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少.结果提示,PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.     

核受体在胚泡着床生理过程中的调节与功能

核受体隶属配体依赖性的转录调控因子超家族,与机体的生长发育、细胞分化、生殖以及代谢过程中的基因表达调控密切相关.本文就核受体家族参与哺乳动物胚泡着床研究方面的进展作一简要综述.     

少剂量抗孕激素在子宫内膜对胚泡接受中的作用

目的：从细胞及分子水平分析低计量米非司酮在子宫内膜对胚泡接受性中的作用。方法：以组织学方法观察内膜形态变化;免疫组织学方法测定LIF及IL－6在子宫内膜的基因表达以及用半定量RT－PCR测定内膜雌,孕素受体mRNA水平等方法来评估子宫内膜的成熟度。结果：米非司酮在剂量在0．03mg/kg/d时,可明显延缓子宫内膜的成熟,抑制间质细胞蜕膜化,降低LIF和IL－6在内膜的基因表达和增高内膜雌,孕激素受体mRNA水平。结论：小剂量米非司酮可直接作用于子宫内膜,影响内膜的成熟而抑制内膜对胚泡的接受性。     

少剂量抗孕激素在子宫内膜对胚泡接受中的作用

少剂量抗孕激素在子宫内膜对胚泡接受中的作用@刘承权$上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室! 中国 上海200032 @王忠兴$上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室! 中国 上海200032 @袁瑶$上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室! 中国 上海200032     

着床期小鼠子宫内膜Le~y糖蛋白的动态变化

为了解子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在胚泡着床期间的变化,以及与胚泡表面阶段特异性Ｌｅ~ｙ抗原出现的关系,应用对Ｌｅ~ｙ寡糖特异的ＡＨ－６单抗为探针,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫酶标染色,观察了小鼠子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在着床期的动态变化和分布特点。结果表明：（１）未孕及着床前后的小鼠子宫内膜均含Ｌｅ~ｙ糖蛋白Ｍｒ５０～２００ｋＤ）,未孕内膜的含量明显高于着床期间的样品;（２）在着床日（Ｄ４）样品可见微量１６ｋＤ的Ｌｅ~ｙ糖蛋白条带;（３）未孕至Ｄ４的子宫内膜均有Ｌｅ~ｙ糖蛋白分泌至宫腔,但呈渐减趋势,未孕样品Ｌｅ~ｙ糖蛋白主要为分泌型,而Ｄ４样品Ｌｅ~ｙ糖蛋白主要存在于子宫内膜,宫腔液含量很少;结果提示子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在着床期间具有含量、组成和分布上的动态变化,这些变化可能与胚泡着床以及胚泡在宫腔内其表面Ｌｅ~ｙ糖抗原转为阳性密切有关。     

着床期小鼠子宫内膜Le^y糖蛋白的动态变化

为了解子宫内膜Ｌｅ＾ｙ糖蛋白在胚泡着床期间的变化,以及与胚泡表面阶段特异性Ｌｅ＾ｙ抗原出现的关系,应用对Ｌｅ＾ｙ寡糖特的ＡＨ－６单抗为探针,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫酶标染色,观察了小鼠子宫内膜Ｌｅ＾ｙ糖蛋白在着床期的动态变化和分布特点,结果表明：（１）未孕及着床前后的小鼠子宫内膜均含Ｌｅ＾ｙ糖蛋白Ｍｒ５０～２００ｋＤ,未孕内膜的含量明显高于着床期间的样品;（２）在着床日（Ｄ     

着床期家兔子宫内膜糖蛋白的动态研究

本文以~3H-glucosamine(~3H-GlcNH_2)为前体,观察了着床期家兔子宫内膜糖蛋白的生物合成及分泌功能的变化,并利用Triton X-100提取膜蛋白,采用凝集素亲和电泳技术对三种不同性质糖蛋白进行了动态分析。结果表明,着床期家兔子宫内膜糖蛋白的合成与分泌功能均于妊娠第六天(D_6)明显增强,其中合成糖蛋白的变化以Triton溶解蛋白部分为主;井发现着床期WGA、RCA-Ⅰ、SBA结合蛋白均于着床前(D_6)明显增加,着床后(D_9)WGA结合蛋白略有降低,RCA-Ⅰ、SBA结合蛋白明显降低,接近未孕水平。着床期子宫内膜总体及不同种类糖蛋白的阶段特异性变化表明,在子宫内膜由对胚泡的非接受状态转变为接受态的过程中,阶段特异性糖蛋白可能具有重要作用。     

着床期小鼠子宫内膜中EGF及其受体转录和表达状况的研究

为探讨表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)在胚泡着床过程中的作用。本文应用原位杂交和免疫组织化学方法,检测了EGE及其受体在胚泡着床前后小鼠子宫内膜中的转录和表达。结果显示：未孕和受精后第4-5天,子宫内膜表面上皮和腺上皮细胞仍呈EGF,EGFR原位杂交和免疫组化阴性着色,受精后第4-5天子宫内膜基质细胞EGF及其受体转录和表达较未孕期增强,受精后第6天,EGF及其受体免疫组化和原位杂交阳性着色主要分布于初级蜕膜带（primary decidual zone,PDZ);随着胚泡植入的进行,PDZ区蜕膜细胞EGF及其受体的转录和表达明显减少,而PDZ周围蜕膜细胞EGF及其受体的转录和表达增强,结果提示,EGF是小鼠胚泡着床过程中的一个重要调节因子。