免疫胶体金试剂的制备及应用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒

报道了用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的方法。实验采用１０ｎｍ胶体金标记纯化兔抗鼠ＩｇＧ制备了免疫胶体金探针试剂。用本法从戊型肝炎患者粪便提取物中检出ＨＥＶ呈球形,直径３２±５ｎｍ。此方法具有快速、灵敏、直观等特点,在ＨＥＶ生物学性质研究中,有一定的应用价值。     

衣藻淀粉核中存在类角蛋白中间纤维网架

采用选择性抽提结合 ＤＧＤ（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｓｔｅａｒａｔｅ） 包埋电镜技术在衣藻（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍ ｏｎｓａ ｓｐ．）淀粉核中观察到直径１０ ｎｍ 的纤维网架,以哺乳动物角蛋白抗体进行免疫胶体金标记,在淀粉核区域有很强的特异性结合,间接免疫荧光染色得到相似结果,表明在衣藻淀粉核中存在类角蛋白中间纤维网络骨架     

免疫金银增强染色技术在电镜中的应用

将银显影染色技术应用于免疫电镜胶体金增强反应,通过电镜和图像分析仪观察分析其效果。显示：温度２０℃时,随着银显影４、６、８ｍｉｎ,１０ｎｍ胶体金颗粒分别增大至１１．４６ｎｍ、１５．１２ｎｍ、１７．１５ｎｍ,使其在电镜较低放大倍数下易于观察,高倍镜下观察抗原定位清晰准确。在胶体金免疫电镜中,小直径金颗粒较为敏感,但低倍镜下不易观察和摄片。本实验方法克服了这一缺点。要获得理想的银显影染色效果,须控制好温度和时间;温度偏高,银显影反应速度过快,不易掌握;时间过长,金颗粒过度增大,呈现不规则形态,而且易使背景着色。     

基于胶体金标记米曲霉素的免疫层析试纸法快速筛查SLE

目的 建立基于胶体金标记米曲霉素(AOL)的快速筛查系统性红斑狼疮(SLE)的免疫层析试纸法。方法 利用大肠杆菌BL21原核表达特异性识别核心岩藻糖基的AOL基因(FleA),并进行纯化及胶体金标记。利用特异性识别IgG的Protein G以及胶体金标记的AOL共同建立快速筛查SLE的免疫层析试纸法(ICS)。结果 成功表达并纯化AOL重组蛋白,并进行胶体金标记;应用胶体金标记AOL的ICS检测SLE患者血清呈阳性反应,而健康对照及其他自身免疫性疾病(类风湿关节炎、IgA肾病和结缔组织病等)呈阴性反应。结论 成功建立基于胶体金标记AOL的快速筛查SLE的ICS,为SLE早期筛查提供了可靠依据。     

氨苄青霉素标记的胶体金颗粒的制备及活性研究

采用微波加热法制得15 nm的胶体金颗粒,并将小分子抗原氨苄青霉素分别以戊二醛和碳化二亚胺为偶联剂与牛血清蛋白偶联制成全抗原,再通过最佳标记量的确定分别将氨苄青霉素、戊二醛法全抗原、碳化二亚胺法全抗原同胶体金进行结合,红外检测和杯碟法的抑菌试验表明采用仅有戊二醛作为偶联剂的全抗原能够很好地与胶体金结合,并保持良好抗原活性。     

免疫胶体金技术的应用及展望

免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术、应用现状及其优点等方面作一简要综述,并对该技术的发展前景作了展望。     

重组人白介素6受体功能区片段的功能鉴定

用生物素标记重组人白介素６受体功能区片段ｒＩＬ６Ｒ－２８及其二联体蛋白ｒＩＬ６Ｒ－５３,竞争ＥＬＩＳＡ表明重组蛋白可以与配基ＩＬ－６特异结合,流式细胞术检测结果表明ＩＬ－６与生物素标记的重组蛋白所形成的复合物能够与７ＴＤ１细胞表面的ｇｐ１３０结合,而７ＴＤ１细胞生长分析则表明,重组蛋白可以增强ＩＬ－６对７ＴＤ１细胞的生长刺激作用。     

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术,研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒,形态与披膜病毒相似,大小多在５５～６５ｎｍ,圆形,有包膜,边缘略有突起或比较平滑,有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外,ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋,尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部,表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。     

通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组

细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤：（1）生物素化活细胞表面的膜蛋白,（2）链亲和素琼脂糖亲和吸附,（3）强烈的清洗条件去除非特异吸 附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法 制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白. 这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2 400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分 布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白 、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好.     

前包埋阳离子胶体金标记技术定量检测硬脑膜毛细血管阴离子场方法的探讨

介绍一种定量观察血管内皮细胞表面阴离子场的技术方法。以研究毛细血管腔面阴离子场与血管通透性的关系。用前包埋程序以阳郭胶体金（CCG）做为探针,标记硬脑膜毛细血管内皮腔面的阴离子场,在电子显微镜下摄影计数内皮细胞表面标记的金颗粒,在硬脑膜毛细血管腔面,微绒毛和质膜小泡的表面均见CCG标记,而不带电荷的BSA－胶体金呈阴性结果,前包埋阳离子胶体金标记技术可特异性地显示硬脑膜血管内皮细胞表面的阴离子场,并可做定量研究,标记微环境,血管开口大小和复染可能影响标记结果。     

胶体金标记抗体技术

胶体金标记抗体技术是近十多年来免疫组织(或细胞)化学迅速发展起来的一项免疫标记技术。在国外许多研究领域中已经得到发展,并逐渐受到国内同行的重视。本文介绍了胶体金标记抗体技术的原理、方法及其发展概况。     

正常大鼠肾脏细胞溶酶体膜的构成蛋白

溶酶体是细胞内对其吞噬之物质溶解及消化之主要场所,同时也是细胞自噬作用的主要细胞器。为了进一步了解此细胞器的功能与结构,我们采用免疫荧光标记法,通过5种针对大鼠肝细胞溶酶体膜蛋白的特异性单克隆抗体,对大鼠正常肾脏细胞溶酶体膜蛋白进行了标记,并通过NH_4Cl溶液对溶酶体作了膜膨胀处理,结果显示:(1)细胞内溶酶体膜蛋白是由多种蛋白所构成,其各种蛋白的含量是不同的;(2)所有溶酶体膜蛋白均表达于该细胞器之表面;(3)NH_4Cl溶液能有效地使溶酶体扩张,这将有和于进一步研究溶酶体的结构。     

玉米精细胞质膜特异蛋白的纯化

在获得6个品种的玉米(Zea mays L.)花粉精细胞后,采用N-hydroxysuccinimido-biotin(NHS-biotin)标记其外膜蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting对比了其中主要标记蛋白,发现其主要蛋白带差异并不显著,主要标记蛋白分子量均集中于91、60、43、30和17kD。采用免疫亲和层析技术进一步纯化已获得的混杂少量其它细胞器成分的精细胞质膜制剂,即利用制备的体细胞主要细胞器:线粒体、内质网、高尔基体及质膜的膜蛋白,分别免疫豚鼠,从其抗血清中纯化获得IgG,并进一步制成各种膜蛋白的免疫亲和吸附制剂。利用此技术进一步纯化经NHS-biotin标记的精细胞质膜蛋白,获得精细胞质膜特异的蛋白质,其中最为显著的蛋白质分子量约为65、22kD。     

免疫标记技术的进展及纳米技术在其中的应用

酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术是目前应用最广泛的免疫反应检测技术。随着科学技术,尤其是纳米技术的发展和生物医药等方面的需求,人们在提高检测灵敏度、简化操作步骤、有效缩短检测时间等方面,取得了很多可喜的进展。本文将分别针对酶免疫标记、胶体金免疫标记及荧光免疫标记技术三方面的进展情况,尤其是纳米标记技术在免疫反应检测中的应用进展进行综述。     

HBsAg Mab胶体金探针制备与鉴定的实验研究

目的：研制合格的乙肝表面抗原单克隆抗体（HashgMab）标记的胶体金探针。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备15nm的胶体金;所制备的胶体金通过透射电镜和紫外分光计度计鉴定其大小和均匀度。通过CVAI曲线,确定胶体金标记HBsAgMab蛋白用量;采用斑点免疫吸附试验对探针进行鉴定。结果：制备的15nm胶体金颗粒均匀;紫外分光光度计400—700nm扫描结果最大吸收波长为518nm,峰宽较窄;纯化的HBsAgMab浓度为65mg／mL;在PH为8.2时,每毫升胶体金的蛋白最适保护量为32．5μg;采用斑点免疫吸附试验鉴定探针质量合格,可保存3个月。结论：制备的HBsAgMab胶体金探针质量合格,为进一步研究提供手段。     

波形纤维蛋白与Nup180的体外结合

本文作者采用大肠杆菌表达的波形纤维蛋白与大鼠肝细胞分离的核孔蛋白进行体外结合实验,以分析波形纤维与核孔的关系。实验结果显示,细菌表达的波形纤维蛋白在体外能组装成１０ｎｍ纤维,在体外反应体系中加入核孔蛋白后,室温反应３０ｍｉｎ,ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫迷法检测,结果表明１８０ｋＤ核孔蛋白（Ｎｕｐ１８０）与波形纤维蛋白有亲和反应。结合免疫胶体金标记与电镜负染色方法显示,核孔蛋白结合于体外装与的     

胶体金免疫层析法检测猪链球菌2型的研究

目的:制备胶体金免疫层析试纸检测猪链球菌2型.方法:用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒,标记猪链球菌2型多克隆抗体,通过免疫层析作用对猪链球菌2型进行检测,并对试纸条的敏感性、特异性、稳定性进行评价.结果:每毫升胶体金最佳抗体标记量为22μg/mL,最佳包被抗体浓度为2 mg/mL,最佳BSA封闭浓度为1.5%,建立的胶体金免疫层析试纸条栓出猪链球菌2型的下限为106 CFU/mL,从检测到结果判断时间为5～15 min,与其他常见致病菌及链球菌属中15个群无交叉反应.结论:获得了检测猪链球菌2型的胶体金免疫层析试纸,该法操作简便,灵敏度高,特异性强,可用于猪链球菌的快速初筛和检测.     

氟化钠与强诱变剂联合作用前后膜蛋白巯基的变化及其与剂量和温度的关系

本文采用与膜蛋白巯基具特异性结合的马来酰亚胺氮氧自由基标记完整的健康人血红细胞膜,由此测得的ESR波谱表明,氟化钠在单独作用时与膜蛋白巯基结合,及其与重铬酸钾,丝裂霉素C或秋水仙素联合作用时增强与膜蛋白巯基的相互作用,并存在剂量效应关系.以上作用不论单独或联合的都有温度点.与对照组比较,氟化钠在单独作用时使温变点降得最多;在联合作用时重铬酸钾和丝裂霉素C降低温变点,而秋水仙素则增高.     

氟化钠与强诱变剂联合作用前后膜蛋白巯基的变化及其与剂量和温度的关系

本文采用与膜蛋白巯基具特异性结合的马来酰亚胺氮氧自由基标记完整的健康人血红细胞膜,由此测得的ESR波谱表明,氟化钠在单独作用时与膜蛋白巯基结合,及其与重铬酸钾,丝裂霉素C或秋水仙素联合作用时增强与膜蛋白巯基的相互作用,并存在剂量效应关系.以上作用不论单独或联合的都有温度点.与对照组比较,氟化钠在单独作用时使温变点降得最多;在联合作用时重铬酸钾和丝裂霉素C降低温变点,而秋水仙素则增高.     

嫁接早期IAA在西葫芦/南瓜嫁接面处薄壁细胞和维管分子中的免疫细胞学定位

采用免疫胶体金法对IAA在西葫芦／南瓜离体茎段嫁接早期发育时期在嫁接面处的分布进行了超微结构水平的定位。电镜观察表明在嫁接面处的薄壁细胞中IAA主要定位于细胞核、质体、内质网等细胞器上。在高尔基体、线粒体、细胞壁和液泡中,未发现胶体金颗粒的标记。在分化中的管状分子中,胶体金颗粒位于次生壁上和细胞质中。在筛分子分化过程中,IAA主要定位于筛板、筛孔和细胞质中。在伴胞中有较高的金颗粒密度。对于IAA在嫁接体维管分子分化过程中的作用进行了讨论。