离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率

HaCaT细胞是自发性的人永生化表皮细胞株,常用于皮肤功能与疾病的相关研究,但常规脂质体法转染该细胞的效率极低。该研究主要探讨离心是否能够增加脂质体法转染HaCaT细胞的效率。以Lipofectamine~?2000为脂质体转染试剂,pEGFP-C1为质粒转染HaCaT细胞后分别使用常规法和离心法处理,利用荧光倒置显微镜和流式细胞仪测定转染效率;细胞增殖活力实验检测离心是否对细胞活力产生影响;荧光素酶报告基因、Western blot实验检测离心法实际效应对目的基因表达的影响。结果表明,离心法处理组所测得的转染效率均高于常规法处理组,差异有统计学意义。荧光素酶报告基因实验、Western blot实验则进一步证实了转染后离心的性价效应能增加目的基因的表达,具有较高的实用性。综上所述,常规转染步骤后离心能够增加HaCaT细胞的基因转染效率。     

应用重定向超速区带离心法纯化HBsAg的研究

采用重定向超速区带离心法进行了从乙肝阳性血清中提纯ＨＢｓＡｇ的研究，获得了一套最佳离心条件，可清除阳性血清中的各种杂蛋白，获得不含乙肝病毒（Ｄａｎｅ颗粒）的纯ＨＢｓＡｇ。此方法具有离心时间短、不漏液、故障少及成本低等优点。本试验结果为采用重定向超速区带离心法大规模纯化ＨＢｓＡｇ、基因工程表达产物及其它生物大分子蛋白提供了实验依据     

一种改良的RNA超离心制备方法

RNA制备是分子生物学中常用的实 验技术之一。RNA的常用制备方法包括蛋白酶K/SDS法、异硫氰酸胍或盐酸肌超离心法以及热酚法等。我们在制备非洲爪赡(XenopusLaevis)早期胚胎RNA的过程中,通过对不同实验方法的比较,摸索出一种RNA制备方法(改良法),提高了起离心的效率,简要介绍如下。     

离心法与细胞显微操作法对内皮细胞-白细胞黏附特性的初步研究

将哮喘病理血清与在体外培养的大鼠肺内皮细胞共同孵育,分别用离心法和显微操纵技术对细胞黏附进行体外研究。离心结果显示,病理血清刺激下的内皮细胞比正常情况更易与白细胞发生黏附。离心力高到一定程度可以解离部分黏附。从进一步的细胞显微操纵实验看病理血清刺激内皮细胞的功能状态,影响内皮细胞与白细胞发生黏附     

兔子子宫内膜雌激素受体的超离心分析

用蔗糖密度梯度超离心技术分析了兔子子宫内膜胞质液无配基ER和激素受体复合物。在低离子强度和高盐浓度条件下ER的沉降行为主要表现为8S和4S的分子。对不同实验条件下受体的稳定性进行了比较,无配基ER在低离子强度介质中易聚合成比8S更大的分子。胞质液中E_2的存在有利于受体稳定,超离心后可用[~3H]E_2交换,DCC法测定,结果与传统的超离心法一致。     

兔子子宫内膜雌激素受体的超离心分析

用蔗糖密度梯度超离心技术分析了兔子子官内膜胞质液无配基ER和激素受体复合物。在低离子强度和高盐浓度条件下ER的沉降行为主要表现为8S和4S的分子。对不同实验条件下受体的稳定性进行了比较,无配基ER在低离子强度介质中易聚合成比8S更大的分子。胞质液中E_2的存在有利于受体稳定,超离心后可用[~3H]E_2交换,DCC法测定,结果与传统的超离心法一致。     

一种制备酵母菌线粒体DNA的简便方法

ASimpleProcedureforPreparationmtDNAinYeastJinJianlingGaoDongSunZhongdong(MicrobiologyDepartment,ShandongUniversity,Jinan250100)目前,制备酵母mtDNA的常用方法大致有两类：一是先提取混合DNA（核DNA＋mtDNA）,再通过CsCI密度梯度离心或柱层析法分离纯化mtDNA（’,’,”’;二是先通过蔗糖不连续梯度超离心法分离纯化线粒体,再从线粒体中提取mtDNA”’。这些方法虽然能够得到纯度较高的mtDNA,但超离心法需要配套设备（超速离心机等）,柱层析法对样品的回收浓缩比较复杂。本文报道的制备mtDNA的方法,不需…     

质粒DNA的人工氯化艳线性梯度分离法

在遗传工程技术中,质粒被广泛用作重组 DNA的载体,有些肠道菌的致病基因位于大质 粒上。要克隆这些基因,先要纯化质粒,迄今 为止,已经有不少精制质粒的方法^[57]。经典的均 一CsCI-EB密度离心法,需长时间的离心,使其 形成Cscl梯度,约40-60小时方能达到纯化 的目的。本法做了一些改进,采用0.6M和6M 两种不同的Cscl溶液,用日立DGF-U梯度 仪配成线性梯度,然后加粗提的质粒DNA和 EB的混合液,以日立RPS-65T水平转头,200C, 48,000rpm（约为160,000g）离心,小时,就能 把粗制pBR322样品中的染色体、开环（oc）和 共价闭合环状（ccc)质粒DNA分开。从而获 得纯的cc。质粒。带定居因子K88ac抗原的毒素 源性大肠杆菌野生型菌株,含有50 Md的大质 粒和一个小质粒,用酸酚法^[7]、两相法^[3]、蔗糖梯 度离心法、均一氯化艳-EB离心法、不连续（或 阶梯梯度）梯度Cscl离心法^[2]琼脂糖凝胶电 泳法^[6]等都难以获得纯的大质粒,用本文的方 法得到较好的效果,这不仅大大缩短了超速离 6时间,节省了氯化艳用量,同时对大小质粒 DNA的纯化均可适用。     

离心力对蚕豆叶片质外体汁液中磷酸己糖异构酶活力的影响

采用真空灌注离心法提取蚕豆叶片质外体汁液 ,通过测定不同离心力条件下叶片和叶片质外体汁液中磷酸己糖异构酶 (HPI)活力 ,判断蚕豆叶片质外体提取液是否受到细胞渗出物污染的结果表明 ,采用的适宜条件为 :离心温度≤ 4℃ ,离心力 5 0 0～ 80 0×g ,离心时间 8min。此条件下所获得的蚕豆叶片质外体汁液没有或很少受到细胞质的污染。     

密度梯度离心技术在分子生物学研究中的应用

密度梯度离心技术是随着分子生物学的飞速发展而建立起来的一种重要的实验技术,广泛应用于核酸,蛋白、酶等生物大分子和生物膜、细胞大颗粒,亚细胞颗粒的分离、纯化及分析。可以说七十年代分子生物学研究中许多重大的成果都和这种技术的应用分不开。密度梯度离心大致可分二大类,一类是速率区带密度梯度离心,这类离心主要是利用生物大分子或亚细胞颗粒不同的沉降常数,在离心后分布在不同的预先铺制好的介质密度区,从而达到分离、纯化的目的。离心密度介质主要用蔗糖也可用甘露糖、甘油,多聚糖类、中性硅胶油等。这类离心技术广     

碘化钾梯度离心在制备噬菌体DNA中的应用

通过氯化艳梯度离心除去细菌DNA及细 菌残渣来分离纯化噬菌体颗粒是一种方便而有 效的方法〔ZJ。其唯一缺点是氯化艳价格昂贵。 Blin等人〔13报道说,可用碘化钾梯度离心法从 琼脂糖电泳凝胶中回收DNA, Smith 13,发展了 Blin法,在碘化钾溶液中加人I MM Na2S20,以 防止碘离子的氧化,使DNA稳定不受干扰。 最近,我们把该法应用于分离纯化兄噬菌体的 重组体DNA,结果表明在噬菌体颗粒的梯度 离心纯化过程中,完全可以用碘化钾替代氯化 艳。     

柞蚕微孢子虫孢子分离纯化方法

柞蚕微粒子病是柞蚕Antheraea pernyi(Guérin-Méneville)的主要胚胎传染性病害,病原为柞蚕微孢子虫Nosema pernyi(Wenet Ding),其病原分离提纯技术研究对于柞蚕微粒子病的防治具有重要意义。本文利用差速离心和Percoll密度梯度离心法研究了柞蚕微孢子虫孢子的分离纯化方法,结果表明,采用不连续密度梯度分离纯化柞蚕微孢子虫孢子的效果比单一浓度的效果好,以浓度为25%、50%、75%、100%不连续梯度,15000r/min离心30min分离纯化得到的柞蚕微孢子虫孢子纯净度高。     

鳄梨油

鳄梨(persea americana Mill)是一种含油量极高的水果,其果皮下含有大量叶绿素,因此,鳄鱼油呈艳绿色。鳄梨具有很高的营养价值,是慰问病人的佳品。鳄梨树叶水剂可治疗皮肤病,并具有美容价值。鳄梨的含油量一般在15～30％之间,主要脂肪酸为油酸、亚油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸。从鳄梨果肉中榨油可采用多种不同的方法,其中,以不用溶剂的离心法为最好。用离心     

两种试剂盒提取大鼠容受期少量宫腔液胞外囊泡的比较

容受期宫腔液对于胚胎建立早期妊娠起着关键作用,宫腔液内含的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)可能是子宫内膜与胚胎之间交流的新模式。目前为止,仍然没有一种提取方法能同时保证EVs的含量、纯度和生物活性。传统的超速梯度离心法对设备和样本量要求高,耗时长,因此寻求在少量样本中高效提取高纯度EVs的新方法十分重要。本研究对同一份大鼠容受期宫腔液样本分别采取PEG沉淀和亲和膜离心柱两款试剂盒进行EVs提取,使用透射电镜、Western-blot和动态光散射进行形态、表面蛋白质和粒径分布的鉴定,并对其内容物RNA进行了浓度和片段分布比较。结果显示,两种试剂盒都可以成功从少量的宫腔液样本中分离得到EVs,且效率较传统离心法大大提高,但均无法完全区分其亚群;亲和膜离心柱提取法得到的EVs浓度更高,RNA片段集中在20~40 nt,对于开展后续mi RNA建库测序分析具有更好效果。     

相分配—一种纯化细胞器和膜微囊的方法

根据各种膜颗粒表面电荷密度和疏水性的差异,通过适当的相分配系统,将一种膜颗粒从其它成份中分离出来,这便是相分配法。在相分配法应用之前,都是用离心法纯化膜颗粒的,但离心法纯化的膜颗粒纯度不够高。相分配法作为离心法的辅助技术,则能满足实验对分离纯化的膜颗粒的纯度     

两种人脐带间充质干细胞源外泌体分离方法的比较

目的探索人脐带间充质干细胞(hUMSCs)来源的外泌体的最佳分离条件并对其进行生物学鉴定。方法无血清培养法培养hUMSCs,培养上清中收集外泌体,超高速离心法(ult-exo)和沉淀法分离外泌体(pri-exo),Western Blot检测外泌体标志性蛋白CD63、HSP70、HSP90和阴性对照蛋白TAPA1,透射电镜观察分离所得外泌体生物学形态,高清晰质谱分析外泌体包裹蛋白种类。结果无血清培养法能够在不改变细胞生物学形态的条件下获取hUMSCs源外泌体,透射电镜下可见超高速离心可以获得具有典型双层膜结构的外泌体,大小在100 nm左右,而沉淀法分离所得产物不具有典型的外泌体形态表征,大小在30 nm左右;Western Blot结果表明超高速离心法所得外泌体CD63、HSP70、HSP90均呈现阳性,阴性对照蛋白TAPA1呈现阴性,沉淀法只能检测到HSP90;高清晰质谱检测出超高速离心法分离所得外泌体有169种蛋白,沉淀法有102种,共有蛋白79种。结论超高速离心法和沉淀法所得外泌体在蛋白标志物、生物学形态和内含蛋白种类均有差别,本实验结果提示分离hUMSCs源外泌体超高速离心法优于沉淀法。     

超滤过结合密度梯度离心纯化鲍曼不动杆菌噬菌体方法的建立

目的 探讨获得低浓度内毒素和高滴度鲍曼不动杆菌噬菌体的方法,为制备安全的噬菌体生物制剂提供参考.方法 用可截留100 kD以上分子量的超滤离心管浓缩噬菌体裂解液并滤出分子量约为10 kD的内毒素,然后用蔗糖密度梯度离心纯化噬菌体浓缩液;分别测定超滤前、超滤后和纯化后的噬菌体滴度,采用鲎试验测定超滤前后内毒素的浓度,通过SDS-PAGE分析超滤前后和纯化后噬菌体蛋白的纯度.结果 经超滤离心法噬菌体滴度从3.9×1010 PFU/mL提高至1.68×1012PFU/mL,并可去除99.2％的内毒素;超滤过结合密度梯度离心后的SDS-PAGE可清晰呈现7种蛋白,分子量为29～100 kD.结论 超滤过结合密度梯度离心是一种简便、快速浓缩和纯化噬菌体的方法,并可有效地去除裂解液中的内毒素.     

盐生车前根液泡膜ATPase对盐胁迫的响应

用蔗糖密度梯度离心法从对照和盐处理的盐生车前根中分离出液泡膜,并对其ＡＴＰａｓｅ某些特性进行了比较研究,蔗糖连续密度梯度离心后ＮＯ＾－３敏感的ＡＴＰａｓｅ活性主要分布在２２％－３５％蔗糖浓度之间,用不连续密度梯度离心法从２２％－３５％界面收集到的膜主要源于液泡膜。因为,这种膜ＡＴＰａｓｅ活性受到Ｃｌ＾－的促进和ＮＯ＾－３的强抑制,而叠氮化钠和正钡酸钠只抑制酶活性的１０％左右,最适ｐＨ８．０。     

低温浸提法提取板栗器官中的内源激素

植物内源激素的定量测定首先要进行材料中激素的提取与纯化处理,一般采用冰浴匀浆离心法,即将样品放入预冷的甲醇或乙腈等有机溶剂中,弱光下分次冰浴匀浆,低温（４℃）下离心或过滤,然后进行纯化和测定［１～９］。但一些木本植物器官木质化程度较高,材料比较坚硬,因而匀浆处理较困难。在样品量大时,冰浴匀浆及离心重复操作时间长,操作极为繁琐。弱光、低温条件的长期均衡控制也较困难,可能造成激素因氧化而破坏,影响样品的测定结果及可比性。因此,在进行大量样品处理,特别是木本植物器官材料的内源激素分析时,有必要探索一种…     

泰泽病原体基因组DNA提取方法的建立

目的　提取泰泽病原体基因组DNA ,为建立该菌基因组文库奠定基础。方法　使用密度梯度离心结合酶解消化方法、酶解消化方法、本研究建立方法即过滤盐析离心法 ,从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,并比较三种方法纯化泰泽病原体效果 ;采用氯化苄法、试剂盒、酚法提取泰泽病原体基因组DNA ,并比较三种方法提取基因组DNA质量 ;鉴定酚法提取泰泽病原体基因组DNA特异性。结果　使用过滤盐析离心法从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,采用酚法提取其基因组DNA ,所获得的基因组DNA特异性好、纯度高、DNA片段长度大于 5 0kb ,且均一性好 ,无降解。结论　本研究首次成功提取泰泽病原体基因组DNA ,可用于多种分子生物学实验