髓核突出模型大鼠背根神经节中Wnt5a的表达

目的:观察Wnt5a在大鼠髓核突出模型的表达变化,探索Wnt5a在神经根病中的作用。方法:将80只成年雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=20)、髓核突出组(NP组,n=20)、髓核突出+生理盐水组(NP+Saline组,n=20)、髓核突出+益赛普组(NP+Etanercept组,n=20)。从大鼠尾椎椎间盘中取髓核,将髓核种植于L5背根神经节旁,制作髓核突出大鼠模型。采用免疫组织化学法分别检测各组大鼠背根神经节中的Wnt5a蛋白的表达,利用RT-PCR的方法分别检测各组大鼠背根神经节中Wnt5a m RNA的表达。结果:免疫组化结果显示,各组大鼠背根神经节的大中小神经元均有Wnt5a的表达,NP组较Sham组在3天、7天时Wnt5a表达量均增加(P0.01),3天和7天时NP+Etanercept组大鼠背根神经节中Wnt5a的表达量较NP+Saline组均减少(P0.01)。RT-PCR的结果与免疫组化的结果相符,表现为NP组较Sham组在3天、7天时Wnt5a mRNA的相对表达量增加(P0.01),NP+Etanercept组大鼠背根神经节中Wnt5a的相对表达量较NP+Saline组均减少(P0.01)。结论:髓核突出并压迫背根神节时,可引起背根神经节Wnt5a的表达增加,且阻断肿瘤坏死因子α(TNF-α)时,背根神经节的Wnt5a表达减少。     

肝细胞生长因子在正常大鼠腰段脊髓和背根神经节的表达

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的表达。方法:取健康成年6只SD大鼠运用免疫组织化学染色技术检测HGF在腰段脊髓、背根神经节内的表达和分布。结果:在L4-6段脊髓,HGF免疫阳性产物可见于各板层神经元,尤以脊髓前角运动神经元明显;在DRG中,HGF免疫阳性物质可见于以大、中型为主的神经元的胞浆及突起中。结论:脊髓和背根神经节内的HGF通过与受体c-Met结合可能在神经再生及突触可塑性方面起一定作用。     

功能性ghrelin受体在内脏迷走和脊髓传入神经通路中的表达

本文在mRNA和蛋白水平观察了功能性ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor type la,GHS-Rla)在大鼠内脏迷走及脊髓传入神经通路中的表达.结果显示:(1)GHS-Rla免疫反应阳性神经元及GHS-Rla mRNA分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)及结状神经节(nodose ganglion,NG).(2)应用免疫双标技术观察到DRG和NG中都有一些GHS-Rla免疫反应阳性神经元,同时降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色呈阳性,显示GHS-Rla和CGRP共存于同一神经元,表明内脏传入神经元存在许多亚核群.(3)应用荧光金(fluorogold)标记的神经逆行追踪技术对从胃投射到DRG和NG的神经元进行免疫组织化学染色,观察到一些表达CGRP的GHS-Rla免疫反应阳性神经元也被荧光金染色.上述实验结果证实了GHS-Rla在迷走神经和脊髓传入神经元中的表达,提示ghrelin参与了胃.脑轴的调节.     

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布-免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布一免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

慢性肾缺血致心功能不全时大鼠心肌组织降钙素基因相关肽含量的变化

目的观察慢性肾缺血导致心功能不全时心肌组织降钙素基因相关肽（CGRP）含量变化,并分析变化的机制。方法将40只Wistar大鼠分为,狭窄对照组（n=15）和狭窄治疗组（n=15）,均采用两肾动脉之间腹主动脉缩窄术造成单侧慢性肾缺血。假手术组（n=10）仅分离腹主动脉。至术后16周狭窄治疗组给予阿魏酸钠40mg／kg腹腔内注射,狭窄对照组和假手术组均给予同等剂量生理盐水。治疗2周后,测定颈动脉压、左心功能,处死大鼠后测定心肌组织CGRP、ET-1和NO含量,分别测定心肌和脊髓背根神经节CGRP mRNA表达。结果狭窄对照组和狭窄治疗组心功能均下降,但狭窄治疗组心脏舒张功能优于狭窄对照组。狭窄对照组心肌内ET-1含量明显增加,CGRP含量明显下降。狭窄治疗组心肌内ET-1含量较对照组减少,CGRP含量略增高。各组心肌CGRP mRNA表达无明显差异。狭窄治疗组脊髓背根神经节CGRP mRNA表达较假手术组增加。结论大鼠慢性肾缺血导致心脏组织ET-1持续激活,CGRP、NO合成受损,与心功能下降密切相关。心功能不全时,脊髓背根神经节CGRP mRNA表汰代偿件增高,但心脏血管内皮绢织受损可能是心脏CGRP含量下降的主要因素。     

针刺对去卵巢大鼠脑内胆碱乙酰转移酶基因表达的影响

本工作旨在探讨雌激素对脑内乙酰胆碱生成的影响和电针刺激“足三里”穴对去卵巢大鼠脑内乙酰胆碱生成的调整作用。实验选用成年Wistar雌性大鼠,将动物分为正常对照组(INT)、去卵巢组(OVX)和去卵巢针刺组(OVX AC)。用放射免疫分析方法测定血中雌二醇含量,采用RT-PCR方法获得大鼠脑内胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA的逆转录表达产物——cDNA,用琼脂糖凝胶电泳方法检测,并通过原位杂交方法观察海马ChAT mRNA阳性神经元的表达,然后用计算机图像分析系统进行统计分析。实验结果显示：去卵巢组大鼠体内雌激素水平明显降低,脑内ChAT mRNA的RT-PCR产物和海马ChAT mRNA阳性表达产物的平均面积、平均积分光度值均明显减少,与对照组和针刺组比较有显著性差异;去卵巢针刺“足三里”穴组与去卵巢组相比,大鼠血中雌激素水平明显升高,脑内ChAT mRNA RT-PCR产物明显增多,海马的ChAT mRNA表达阳性神经元增多。以上结果提示：脑内ChAT基因表达与体内雌激素水平有密切关系,去卵巢后针刺“足三里”穴对ChAT的调节作用可能是针刺增强脑内乙酰胆碱含量的机制之一。     

大鼠脊髓损伤后表皮生长因子受体在脊髓的表达特点

目的研究大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后表皮生长因子受体(epidermal growth factor re-ceptor,EGFR)在脊髓的表达特点及意义。方法健康成年雄性SD大鼠,随机分为4组(每组10只):假手术组,SCI术后3 d、7 d和14 d组。应用Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分观察大鼠行为学改变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测损伤段脊髓组织中EGFR mRNA表达水平;免疫组织化学方法观察损伤段脊髓灰质中EGFR蛋白表达情况;并对EGFRmRNA及蛋白表达情况与BBB评分进行相关性分析。结果行为学观察发现大鼠脊髓损伤后下肢神经功能逐步恢复;RT-PCR结果显示EGFR mRNA在假手术组大鼠脊髓中微量表达,SCI术后3 d表达显著升高,随后趋于下降,14 d时仍高于假手术组(P<0.01);免疫组织化学染色显示损伤段脊髓灰质中EGFR阳性细胞数在损伤后3 d显著高于假手术组(P<0.01),随后趋于下降,但14 d时仍高于假手术组(P<0.01);EGFR mRNA及蛋白的表达均与BBB评分呈显著负相关(r=-0.956,P<0.05;r=-0.966,P<0.05)。结论EGFR在大鼠脊髓损伤后具有时相分布特点,且与动物行为呈负相关,提示其表达可能阻碍损伤后的神经功能恢复。     

Gas7在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达

目的 研究生长休止蛋白7（Gas7）在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达.方法 成年SD大鼠12只,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法、焦油紫染色以及免疫组织化学方法来观察Gas7基因核酸和蛋白在成年SD大鼠脊髓和脊神经节的表达.结果 RT-PCR结果显示,脊髓和脊神经节有较丰富的Gas7 mRNA表达.免疫组化结果显示：与焦油紫染色相对照,脊髓灰质各板层神经元均表达Gas7蛋白,与其它版层相比较,后角Ⅱ版层胶状质的小细胞和前角Ⅸ版层的运动神经元显色较深且数量较多.脊髓白质Gas7免疫阳性反应较弱且分布均匀.脊神经节内大型感觉神经元呈Gas7免疫强阳性反应,中、小型感觉神经元为弱阳性反应.结论 本文首次描述了Gas7在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达,为进一步研究Gas7在成年神经系统再生和修复过程中的功能提供形态学基础.     

miR-99b-5p对紫杉醇致大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及对神经细胞焦亡和凋亡的影响

目的:研究miR-99b-5p(非编码RNA)通过抑制NLRP3炎性小体活化缓解紫杉醇化疗后病理性神经疼痛的干预作用,以及对神经细胞焦亡和凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组(Blank)、模型组(Model)、agomiR-99b-5p治疗组和agomiR-NC对照组,每组6只。空白组接受生理盐水治疗作为对照,模型组通过紫杉醇诱导建立疼痛模型,agomiR-99b-5p组和agomiR-NC组为在模型组的基础上注射agomiR-99b-5p和agomiR-NC进行干预。RT-qPCR检测空白组、模型组、agomiR-99b-5p治疗组和agomiR-NC组大鼠背根神经节中miR-99b-5p的表达差异;vonFrey纤维丝检测空白组、模型组与治疗组机械缩足阈值(MWT);TUNEL法测定背根神经节细胞凋亡情况;试剂盒检测大鼠背根神经节中ROS、MDA和SOD;免疫荧光染色检测炎症小体NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组miR-99b-5p含量较低;与模型组比较,agomiR-99b-5p治疗组可以显著增加大鼠背根神经节miR-99b-5...     

Adam10基因在成年小鼠中枢神经系统的表达模式研究

目的研究adam10基因在成年小鼠中枢神经系统表达的脑区分布特点以及细胞类型。方法构建小鼠源性adam10 cRNA探针,通过原位杂交技术,观察adam10 mRNA在成年小鼠中枢神经系统分布特点,并在原位杂交后进行免疫组织化学染色,把adam10原位杂交信号和神经元、星形胶质细胞特异性细胞标记物进行双标,观察adam10基因表达的细胞类型。结果 Adam10基因在成年小鼠大脑皮层、海马、丘脑和小脑中表达,原位杂交后进行免疫组织化学染色结果显示adam10原位杂交阳性信号主要和神经元标记物NeuN共标,而和星形胶质细胞标记物GFAP不共标。结论本研究证实了在成年小鼠中枢神经系统中adam10基因在大脑皮层、海马、丘脑和小脑中都有表达;并且首次明确了大脑中ad-am10基因主要在神经元中表达,在星形胶质细胞中不表达,小脑中主要在小脑颗粒细胞和蒲肯野细胞中表达。     

Localization of aldolase C mRNA in brain cells

The expression of aldolase C and aldolase A mRNA was assessed by Northern blot hybridization using RNAs purified from cultured rat and mouse brain neurons and astroglial cells. Neurons were found to contain about 4-fold more aldolase C mRNA and about twice as much aldolase A mRNA than astroglia. Analysis of the cellular localization of aldolase C mRNA by in situ hybridization to brain slices showed a predominantly neuronal labeling with an irregular distribution. A strong signal was observed in Purkinje cell somata and a weaker signal in subpopulations of neurons in cerebral cortex, striatum, hippocampus, hypothalamic nuclei and primary olfactory cortex.     

cDNA cloning of putative rat acetyl-CoA transporter and its expression pattern in brain

Rat acetyl-CoA transporter gene (Acatn) encodes a hydrophobic multi-transmembrane protein involved in the O-acetylation of gangliosides. O-acetylated gangliosides have been found to play important roles in the embryonic development of the nervous system. We have isolated rat Acatn cDNA by PCR cloning. The amino acid sequence of rat Acatn exhibited 92% and 96% homology with human and mouse sequences, respectively. The mRNA was expressed in brain at all developmental stages. Acatn expression was higher in embryonic and postnatal rats than in adult rats. Cellular localization of Acatn mRNA in adult rat brain was also analyzed by in situ hybridization. Acatn mRNA expression was detected in the neuronal cells of cerebellum, hippocampus, hypothalamus, cortex, olfactory bulb, and dorsal and ventral anterior olfactory nucleus in adult rat brain.     

Expression of dihydropyridine-sensitive brain calcium channels in the rat central nervous system.

We have localized dihydropyridine (DHP-sensitive calcium channels in rat brain by in situ hybridization and immunohistochemistry. The mRNA for the dihydropyridine-sensitive calcium channel alpha 1 subunit (DHPR-B) is prominently localized in neuronal cells in the olfactory bulb, dentate gyrus, hippocampus, arcuate nucleus, paraventricular nucleus, ventromedial nucleus, cerebral cortex, superior colliculus and the cerebellar Purkinje cell layer. Strong expression of DHPR-B mRNA was also found in the pituitary and pineal glands. DHP-sensitive calcium channel alpha 1 subunit distribution has also been examined immunohistochemically with polyclonal antibodies raised against synthetic peptides specific for the DHPR-B alpha 1 subunit protein. The results from immunohistochemistry were in good agreement with those from in situ hybridization. Thus, regional distribution and localization of DHPR-B mRNA and alpha 1 subunit protein in rat brain suggest that this type of DHP-sensitive brain calcium channel may play an important role in excitation-secretion coupling functions in the neuroendocrine system.     

免疫组织化学方法检测脑红蛋白在大鼠中枢神经系统的分布

目的 探讨脑红蛋白（NGB）基因在中枢神经系统中的分布。方法 用免疫组织化学ABC法研究了NGB蛋白在成年大鼠脑内的分布和定位。结果 NGB蛋白在成年大鼠脑中有非常广泛的表达。其分布区域包括大脑皮质,海马,丘脑和下丘脑的部分核团,脑桥及小脑,NGB免疫反应阳性物质定位于神经元的细胞质。结论 NGB蛋白在大鼠脑中有非常广泛的表达,提示NGB基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用。