红菇子实体多糖的理化性质及抗癌活性

红菇（Russula vinosa Lindbl）子实体残渣经热水提取,Sevage法除去蛋白,用乙醇沉淀得到粗多糖,经DEAE-Sephadex A-25纯化,得到精制的红菇多糖,经聚丙烯酰胺凝胶（PACE）电泳和高效液相色谱（HPLC）分析表明其为均一多糖,平均分子量为1．8万,红外光谱分析具有多糖特征吸收峰,紫外光谱未见核酸和蛋白质特征吸收峰,通过纸层析和高效液相色谱（HPLC）以及咔唑-硫酸法分析,判断其含有半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸。总糖含量为89．3％,其中糖醛酸含量为3．36％。给小鼠腹腔注射多糖,能提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能和吞噬指数（P〈0．01）,对移植性肿瘤S180有一定的抑制作用。     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚一流酸法测得多糖A1糖含量为82．9％。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量MW＝142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl:Gal:Gal=1:1.02:2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素－2（IL－2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

附子多糖FI的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE- C32柱层析分离 ,再通过 Sephadex G- 2 0 0柱层析进一步纯化 ,得到一种纯白色粉末状多糖 ,糖含量为 97% ,平均分子量为 2 .6× 10 5,熔点为 2 70℃。经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析 ,证明为葡聚糖。     

猴头菌多糖脱色前后理化性质及生物活性的研究

以脱色前、后的猴头菌Hericium erinaceus粗多糖为研究对象,对其多糖含量、多糖中的单糖组成、分子量分布、红外光谱等理化性质和体外免疫活性、胃粘膜损伤的修复作用进行了比较研究。结果表明,猴头菌多糖脱色后,多糖含量提高、蛋白含量下降、小分子物质大量减少、单糖种类基本不变,岩藻糖所占比例略有下降、半乳糖及葡萄糖比例略有上升,红外光谱显示,脱色后多糖中的C=O基团减少;多糖脱色后体外免疫活性显著提高（P<0.05）,低浓度的未脱色多糖与模型组相比,对胃粘膜的损伤修复作用无显著性差异（P<0.05）,而低浓度的脱色多糖对胃粘膜的损伤修复作用显著提高（P<0.01）。     

箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究

采用分步提取的方式从中药箬叶中分离得到８种多糖组分：酸性杂多糖ＦＳ、ＦＥ、ＦⅠ,β－Ｄ－葡萄糖醛酸聚糖ＦⅡ和四种半纤维素多糖α－Ｄ－木聚糖ＦⅢ－ａ、ＦⅢ－ｂ、ＦⅣ－ａ及ＦⅣ－ｂ．紫外光谱、红外光谱、凝胶色谱、元素分析等结果表明８种箬叶多糖为纯品．并采用纸层析,气相色谱分析确定其单糖组成．采用高效凝胶渗透色谱ＧＰＣ法测定了４种箬叶多糖ＦＥ、ＦⅠ、ＦⅢ－ａ及ＦⅣ－ａ的重均分子量Ｍｗ、数均分子量Ｍｎ,均为大分子,分子量分布较窄,纯度较高．     

丹皮多糖PSM2b的纯化及其理化性质研究

从中药丹皮(MoutanCortex)蒸馏水浸提液得到粗多糖,经DEAE Cellulose 52柱层析分离得到降血糖组分PSM2b,Surperdex200柱层析进一步纯化得到PSM2b A和PSM2b B两个组分,快速层析纯化系统(FPLC)和电泳鉴定为均一的多糖蛋白复合物。FPLC法测定A和B两组分的分子量分别为1.16×105、1.30×104,苯酚 硫酸法测得其总糖含量分别为76.91%、32.00%,Folin 酚法测得其蛋白含量分别为9.90%、42.60%。气相色谱分析PSM2b A的单糖组成为:L 鼠李糖、L 岩藻糖、L 阿拉伯糖、D 木糖、D 甘露糖、D 葡萄糖、D 半乳糖,摩尔比依次为1.00∶0.18∶4.30∶0.50∶1.30∶2.41∶6.97,PSM2b B的单糖组成为:L 鼠李糖、L 岩藻糖、L 阿拉伯糖、D 葡萄糖、D 半乳糖,摩尔比依次为1.00∶1.17∶0.183∶2.34∶4.18。两者的红外光谱呈现多糖吸收特征峰,含有吡喃糖苷键。β消去反应初步证明所提取的两种糖蛋白不存在O 型糖肽键。     

鸡腿菇子实体多糖的分离纯化、理化性质及抗氧化活性

本研究对水溶醇沉法提取的鸡腿菇粗多糖脱蛋白方法进行了比较,最终确定Sevage法为最优的脱蛋白方法。经DEAE-纤维素52离子交换及Sephadex G-200分子层析柱分级、纯化,最终得到2个主要的多糖组分Ccp-I-A和Ccp-I-B。理化性质测定结果表明,二者均为白色絮状固体,能溶于水,不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂;与斐林试剂,CTAB、硫酸-咔唑、碘-碘化钾及三氯化铁反应均为阴性。GC测定结果可知Ccp-I-A主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为2.03∶9.52∶1;Ccp-I-B主要由岩藻糖和半乳糖组成,其摩尔比为1∶5.21。另外,Ccp-I-A和Ccp-I-B对DPPH和·OH显示出良好的清除能力,而且,相比于Ccp-I-B,Ccp-I-A的清除能力更高,当浓度为300μg/mL,其对DPPH和·OH的清除能力可分别达到72.1%和55.3%。     

附子多糖FⅠ的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE-C32柱层析分离,再通过Sephadex G-200柱层析进一步纯化,得到一种纯白色粉末状多糖,糖含量为97%,平均分子量为2.6×105,熔点为270℃.经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析,证明为葡聚糖.     

核盘菌AROM蛋白的三级结构分析

核盘菌编码AROM蛋白的arom基因已经被克隆测序,本文根据该基因翻译的氨基酸序列用同源模建方法和从头模建方法分析了AROM蛋白各结构域的三级结构和功能位点,以及该蛋白二聚体可能的组装方式。结果表明,核盘菌AROM蛋白的脱氢奎尼酸合酶结构域进一步由N-端含有一个Rossmann折叠的α/β结构域和C-端的α螺旋结构域组成;5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶结构域则由两个相似结构域组成,每个结构域含有不同拷贝数的β折叠和α螺旋;莽草酸激酶结构域的N-端由三个β折叠组成;脱氢奎尼酸酶结构域为(α2β2)3多肽,在N-端有一对反平行的β链,在C-端有loop环;莽草酸脱氢酶结构域含有一个由α/β组成的催化结构域和一个含有Rossmann折叠的NADPH结合结构域。     

香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性研究

香菇多糖是从香菇菌丝体或子实体中提取纯化得到的高分子葡聚糖,作为香菇主要的生物活性物质,具有提高免疫力、抗病毒、抗氧化和抗真菌等生物活性。本研究对幼菇期、菌褶期、采收期、成熟期和开伞期5个不同发育阶段香菇粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性进行比较分析。结果表明,其粗多糖含量、理化性质和体外免疫活性具有明显差异。粗多糖得率呈现先增加后降低的趋势,菌褶期得率最高;粗多糖含量也呈现先增加后降低的趋势,成熟期含量最高;多糖的分子量因发育期不同而有较大差异,发育后期所得粗多糖分子量千万级以上组分的比例增加,分子量百万级和十万级的多糖组分比例降低;不同发育阶段香菇子实体多糖的单糖组成均包含果糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖4种单糖,且都以葡萄糖为主;5个阶段的多糖组分均有较好的体外免疫活性,其中幼菇期粗多糖在浓度500μg/mL时表现出最高的体外免疫活性。本研究探讨了香菇不同发育阶段子实体多糖的理化性质及体外免疫活性,为香菇采收期的确定及香菇多糖的制备与利用提供理论依据。     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究*

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚—硫酸法测得多糖A1糖含量为82.9%。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量Mw=142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl∶Gla∶Glc=1∶1.102∶2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的理化性质及抗肿瘤活性

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)色谱分离纯化,得灰色粉末状多糖DCPP1 a-1。采用薄层层析、高效液相色谱、紫外光谱、红外光谱和高碘酸钠氧化等方法进行组成结构分析;并研究了DCPP1 a-1的体内抗肿瘤作用。结果表明,DCPP1 a-1为均一组分,具有α-吡喃糖苷键,分子中1→6键、1→2/1→4键、1→3键所占的比例分别为4.0%,52.1%和44.9%,平均分子量为189kD,由甘露糖和葡萄糖按7.015∶1的摩尔比组成,是首次从原球茎中分离出的新型多糖。多糖DCPP1 a-1的三个剂量组50、150、250 mg/kg对H22肝癌小鼠有不同程度的抑瘤作用,抑瘤率分别为28.6%、19.3%和15.7%。其中以低剂量组的抑瘤效果最好(P<0.05),并显著提高了胸腺和脾指数(P<0.05)。     

不同基质栽培的猴头菌子实体多糖理化性质和体外免疫活性

【背景】猴头菌多糖是猴头菌(Hericium erinaceus)中主要的活性成分,具有提高免疫力、抗肿瘤、降血糖、抗突变、抗衰老等多种功效。目前对于猴头菌多糖的研究主要集中在结构分析上,有关不同基质栽培对于猴头菌子实体多糖理化性质的影响鲜见报道。【目的】研究不同基质栽培的猴头菌子实体多糖的理化性质和体外免疫活性,筛选出高产优质猴头菌的栽培配方。【方法】采用7种不同配方的基质经工厂化栽培获得不同的猴头菌子实体,对其子实体产量和粗多糖含量进行统计和分析测定,并对7种不同基质栽培获得的猴头菌子实体多糖的分子量分布及单糖组成等理化特征进行分析,比较其对刺激RAW264.7巨噬细胞株释放NO的差异。【结果】综合各项指标表明,配方2 (木屑30%,玉米芯40%,棉籽壳15%,玉米粉2%,麸皮6%,米糠5%,石膏1%,石灰1%)和配方7 (玉米芯39%,棉籽壳10%,麸皮10%,米糠30%,大豆皮5%,甜菜渣4%,碳酸钙2%)栽培获得的猴头菌子实体具有较高的多糖含量和活性。【结论】所选配方适合作为栽培猴头菌深加工原料的培养基质。     

两株致病力不同的核盘菌形态变化研究

比较了强弱致病型不同的核盘菌Ep-1PNA5和Ep-1PN的菌落、菌丝、细胞的形态变化。结果发现强致病型的Ep-1PNA5在平板上的菌落呈圆形均匀扩展,气生菌丝少,形成的菌核多,细胞的原生质均匀浓密,内部结构完整。弱致病型的Ep-1PN菌落呈扇形扩展,不均匀,气生菌丝发达,形成的菌核少,菌丝顶端分枝异常,有原生质外渗,且原生质不均匀,内部结构不完整。Ep-1PN致病力减弱和生长抑制可能与其菌丝结构和细胞形态变异有关。     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖的理化性质及体外抗氧化活性

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖。经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖=10.5∶1.7∶1。通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(.OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性。     

密环菌胞外多糖的发酵条件研究

密环菌是天麻的共生菌,有研究证明,密环菌的菌丝及发酵液有与天麻相类似的药理作用,为此,我们进行密环菌深层发酵产胞外多糖条件的研究。研究结果表明：菌丝生长和多糖产生的最适初始pH为5．9左右;消泡剂用量在一定内增加,有利于菌丝的生长,但增加消泡剂用量会不利于多糖的产生;接种量大,菌丝得率高,但接种量为10％时的多糖得率最高;装液量试验表明,通气量大,有利于菌丝的生长和多糖的产生;机械搅拌对菌丝的生长和多糖的产生都不利;生长动态实验证明,密环菌可在6d内完成液体发酵;以豆粕粉作氮源时,菌丝得率最高,以麸皮作氮源时,多糖产量最高;红薯粉为密环菌菌丝生长和多糖产生的最适碳源。     

核盘菌arom基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因已经被克隆、测序。该基因编码的AROM蛋白是芳香族氨基酸合成途径中催化第二步到第六步的五功能多肽。为了对扩增的核盘菌arom基因进行功能验证和探索大量获得AROM蛋白的成熟方法,克隆了arom基因的编码框序列,并将其与载体pYES2连接,构建了酵母表达载体pYES2-arom。用LiAc/SSDNA/PEG方法将该表达载体转入酿酒酵母H158(Saccharomyces cerevisiaeH158)中。酶活测定、RT-PCR和Northern杂交结果显示,核盘菌arom基因在酿酒酵母胞内获得了表达,转化子具有AROM蛋白结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶的催化活性。不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明,当转化子在30℃的条件下,在SC-U酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以180r/min被振荡培养时,其外源AROM蛋白的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶酶活在培养72h达到最高。     

ARTP诱变猴头菌株的发酵菌丝体多糖理化性质及体外免疫活性

为探讨常压室温等离子体诱变的3株高产多糖猴头菌和出发菌株的多糖组分差异,通过液体发酵获得的菌丝体经水提、分级醇沉获得8个胞内多糖组分,对它们的理化性质、结构特征及体外免疫活性进行了研究。结果表明,3株ARTP诱变菌株414、321、236菌丝体多糖含量较出发菌株有较明显提升;ARTP诱变的猴头菌20%醇沉多糖组分较出发菌株分子量大,所占比例增加;诱变菌株60%醇沉多糖组分的分子量略大于出发菌株,所占比例相近。20%醇沉多糖主要由半乳糖、葡萄糖、甘露糖构成,诱变菌株该多糖组分中葡萄糖和甘露糖的比例较出发菌株均有明显提升,60%醇沉多糖组分单糖组成无明显差异;8个多糖组分均具有体外刺激巨噬细胞释放NO的活性,其中20%醇沉多糖的活性优于60%醇沉多糖,诱变菌株的生物活性优于出发菌株。本研究探讨了ARTP诱变对猴头菌胞内多糖结构及活性的影响,为猴头菌相关产品的开发提供了优质资源。     

Naphtho-[2,3-b ]pyrandiones类抗生素SP-1的发酵﹑理化性质及活性研究

从产生菌Z-2002的发酵产物中,纯化得到抗生素SP-1,属于有广泛生物活性但少见的3,4-dihydro-2H-Naphtho-[2,3-b]pyran-5,10-quinones类化合物,该化合物与已知抗生素（＋）-Cryptosporin一致.SP-1对23种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌进行了体外抑菌活性评价,抗菌谱表明：SP-1对G＋菌有一定的抑制活性,对临床分离的耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）、表葡菌（MRSE）呈中等程度的抑制,MIC为8μg/mL,对革兰氏阴性菌的抗菌活性较弱.     

两株毒力不同的核盘菌产草酸、果胶酶的比较

对强弱毒力不同的核盘菌Ep-1PNA5和Ep-1PN的主要致病因子草酸和果胶酶的产生进行了比较研究。结果发现强毒力的Ep-1PNA5和弱毒力Ep-1PN都可产生草酸,并且在发病油菜活体组织上,弱毒力Ep-1PN的病组织中的草酸含量高于Ep-1PNA5病组织;两个菌株在发病油菜活体组织上的果胶酶产量没有差异,但在诱导培养基中Ep-1PN菌株比Ep-1PNA5的果胶酶产量高。这一结果表明弱毒力Ep-1PN菌株毒力的衰退并不是因为其所携带的dsRNA因子抑制了草酸和果胶酶所产生的。