抗hAFP单克隆抗体的制备

人甲种胎儿蛋白(hAFP)是一种重要的分化抗原和肿瘤相关抗原,是癌肿早期诊断和胎儿产前诊断中的一个重要标志物。本文应用 B 淋巴细胞杂交瘤技术,将为 hAFP免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/O 骨髓瘤细胞通过化学方式融合,从而筛选出稳定分泌抗 hAFP 单克隆抗体的二株杂交瘤细胞株。     

应用脾内直接免疫法制备鼠痘病毒单克隆抗体

采用脾内直接免疫法和杂交瘤技术获得５株杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养上清液和腹水中单克隆抗体效价分别为１∶８～６４和１０－３～１０－４（ＥＬＩＳＡ）。与其他１０种鼠源性病毒和ＢＨＫ２１细胞无非特异性反应。与传统免疫方法相比较,即节省了抗原、缩短了免疫时间,又可避免因免疫抗原致病性强而导致动物死亡的缺点,是一种具有实际应用的免疫方法。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

人凝血因子Ⅶ单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗人凝血因子Ⅶ单克隆抗体并鉴定其特性。方法：应用杂交瘤融合技术,以重组人凝血因子Ⅶ为抗原免疫BALB／c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化。结果：获得了3株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞3E8、3D2和1C5,诱生的腹水效价分别为1：1×10^7、1：1×10^6和1：1×10^6;亚类鉴定表明388为IgG2a,其余2株均为IgGl;特异性鉴定显示它们与多种血浆蛋白均无交叉反应,表明单抗是特异的;经过亲和层析,获得了纯化的单抗。结论：获得了特异性的人凝血因子Ⅶ单克隆抗体,为建立人凝血因子Ⅶ检测及纯化方法奠定了基础。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。     

人淋巴细胞表面抗原的研究——Ⅰ,一个和人的类Ⅰ_a抗原起反应的单克隆抗体(B_6)

K(o¨)hler和Milstein报道的杂交瘤方法为制备抗各个抗原决定簇抗体提供了精确手段。此技术已广泛应用于研究各种细胞表面抗原,可溶性、微生物和肿瘤的抗原。近年来,生产抗人淋巴样细胞的单克隆抗体(简称单抗)已取得迅速进展。至今报道的有抗HLA抗原,β-2微球蛋白,B淋巴细胞,胸腺细胞,单核细胞,T淋巴细胞的各种成份,活     

6株抗人IgE重链McAbs杂交瘤细胞株的建立和鉴定

IgE对过敏性疾病的重要性已被公认。临床上应用抗人IgE多克隆抗体对Ⅰ型过敏性疾病总IgE进行检测,以助诊断和研究过敏性疾病的机制。本文应用杂交瘤技术建立6株抗人IgE重链单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并应用McAb对IgE抗原决定簇进行初步分析。一、材料及方法细胞融合的基本材料及方法同常规方法。1.抗原、动物和免疫方法抗原人-IgE(骨髓瘤蛋白,由Ishizaka赠送。经过纯化后应用。基础免疫用0.55mgIgE加福氏完全佐剂,腹腔注入BALB/c小鼠(6-8周龄)。16天后腹腔注入0.5mgIgE(生理盐水配制),41     

抗人IgG-Fab(λ型)单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体的鉴定

淋巴细胞杂交瘤技术,已成为生物学、医学领域中十分重要的研究方法。Lowe指出抗人免疫球蛋白(Ig)单克隆抗体(McAb)的建立,不仅为鉴定Ig的类、亚类、型、亚型、亚群和基因型等提供有价值的试剂,而且还可以在决定簇的水平上进一步研究Ig的结构和功能。Lowe等曾对抗K和λ链的McAb性质进行了研究。李伟雄等建立了抗游离λ链的McAb(待发表)。本文对抗人IgG的Fab和抗人IgG的McAb进行了研究和探讨。一、材料和方法 1.抗原动物及免疫用人IgG经木瓜酶断链后提取的Fab片断蛋白作为免疫抗原。动     

探究杂交瘤技术制备单克隆抗体时与骨髓瘤细胞有效融合的细胞类型

杂交瘤技术制备单克隆抗体,一般取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,并通过筛选获得杂交瘤细胞后再生产。脾脏内含有B1细胞、Mz-B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞、初始B细胞、致敏B细胞、短寿命浆细胞、中心母细胞、中心细胞、抗体分泌细胞等不同类型的细胞。制备单克隆抗体使用的抗原多为蛋白质,经典的免疫策略要用抗原反复刺激免疫动物,所获单克隆抗体类型多为高亲和力的免疫球蛋白G(IgG),结合近期发明的一些新技术等,可认为与骨髓瘤细胞有效融合的主要是由记忆B细胞增殖分化而来的抗体分泌细胞。     

提高抗原特异性杂交瘤生成率

<正>用脾细胞与骨髓瘤细胞杂交的技术以产生单克隆抗体,已经广泛地引起了学者们的兴趣。这项技术的主要缺点之一就是由于抗原特异性的杂交瘤细胞产生率很低,因此必须用大量的细胞进行融合,维持和筛选其是否产生抗体。这种令人失望的比率已经限制了杂交瘤技术的应用,并给杂交瘤的进一步发展带来了困难。作者们这里发表的两种技术,可在细胞融合后大大提高杂交瘤产量。     

抑制T细胞增殖的抗CD98重链单克隆抗体的建立

目的寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究。方法收集BALB/c小鼠脾细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到43株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究。结果显示其目标分子是CD98重链,同时后续实验显示抗CD98单克隆抗体能抑制纤连蛋白介导的细胞分布,但不影响氨基酸转运。而且混合淋巴细胞反应显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD98单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中。     

HSP70单克隆抗体的制备

利用DEAE 离子交换和ATP 亲和层析法从热休克的大鼠肝脏中分离纯化了热休克蛋白 70 (HSP70 )。用它做抗原免疫小鼠 ,通过分离脾淋巴细胞和细胞融合技术 ,得到了杂交瘤细胞 ;用酶联免疫吸附测定法筛选出了阳性克隆 ;经过多次亚克隆、抗体的大量制备及分离纯化 ,得到了抗HSP70的单克隆抗体。用此一抗和Western免疫印迹技术分析了C6 大鼠神经胶质瘤细胞中HSP70的表达。     

分泌抗北京鸭免疫球蛋白单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤CBH-2(简报)

淋巴细胞杂交瘤技术作为一种新的生物工程技术,已在生物学和医学领域内得到广泛的应用。我们继建立产生抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系CBH-1后,又建立了一株产生抗北京鸭免疫球蛋白(I_g)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为CBH-2。这种杂交瘤细胞经体外培养,能稳定地分泌抗北京鸭I_g的单克隆抗体。此单克隆抗体在以北京鸭抗体进行放射免疫和酶标等测定时,可用作第二抗体。现将主要结果简报于下。北京鸭I_g抗原的制备及免疫:从北京鸭颈动脉采血,分离血清,用50%和33%硫酸铵沉淀法提取二次。每只Balb/cJ小鼠腹腔免疫剂量为0.3毫克,共免疫三     

人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示：蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×10^5,腹水的抗体效价为1×10^7;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。     

马铃薯卷叶病毒单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,以马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virns,PLRV)为抗原,用直接将病毒注入脾脏和随后尾静脉注射的方法,免疫BALB/C小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。用Dot-ELISA和间接血凝试验筛选分泌抗马铃薯卷叶病毒抗体的阳性克隆,建立了分泌抗PLRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用微量玻片双扩散法测定单克隆抗体亚类为IgG_1和IgG2a,轻链为λ。注射杂交瘤细胞株A_1、A_3、C_3和D_3于小鼠腹腔,制备出含高效价单克隆抗体的腹水。用获得的四种单克隆抗体对马铃薯卷叶病毒15个分离物进行了鉴定。     

动物细胞培养及单克隆抗体

924039抗肺炎球菌英膜多糖4、8、22F和19A门gF型的鼠单克隆抗体〔英」/Kolberg,J.“·了APMIS一1092,100(i)一91~04〔译自DBA,1902,11 (8),92一04640〕 用12声923价的荚膜多糖肺炎球菌疫苗Pneu-movaxN皮下注射BALB/c下小鼠。33周后即融合前4天,动物得到6产g疫苗。或者用6声g疫苗经皮下注射免疫小鼠2次(间隔1周),44周后(融合前4夭),小鼠获得10声9 19F多糖。利用标谁的技术融合脾细胞和NSO骨髓瘤细胞,以23价疫苗为外壳抗原筛选第一次融合获得的杂种细胞上清液。用个别疫苗组分组成的小组进行了抗皿实验之后,选择出3种杂交瘤并克隆之…     

抗人内皮抑素单克隆抗体杂交瘤细胞的制备及筛选

用亲和层析纯化的酵母表达重组人内皮抑素为抗原,经皮下多点注射免疫Balb/c小鼠,鼠抗血清效价达到1：10000,选免疫效果最好的小鼠,取其脾细胞用PEG法与同系骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,通过间接ELISA法对杂交瘤细胞进行筛选,对阳性孔进行有限稀稀,经3次亚克隆获得4株阳性杂交瘤细胞。     

泡疹病毒特异性MHC限制的T辅助细胞杂交瘤的制备及其特性的初步研究

将HSV-I免疫过的小鼠淋巴结细胞在体外扩增,收集富集HSV-I抗原特异性的T细胞与BW 5147胸腺瘤细胞融合。对融合后产生的杂交瘤细胞进行抗原特异性及MHC识别限制选择。结果所得的T杂交瘤细胞具有在HSV-I特异刺激下,MHC一致时,有分泌IL-2的能力,并在体内耳廓病毒清除中发挥作用。它们是HSV-I抗原特异性,H-2~d限制的,具有辅助活性的T杂交瘤细胞。     

抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备

目的制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体（McAbs）。方法用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合。以酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位;免疫双向扩散试验确定IgG亚类;腹腔接种法、辛酸-硫酸铵盐析法大量制备、纯化单克隆抗体。结果经过ELISA筛选获得11个阳性杂交瘤细胞株,其效价最高达1：4×10^5以上,并与实验动物常见的15种病原菌呈阴性反应;IgG亚类为IgG2a和IgG2b;免疫印迹试验显示,6株（A-F）与胆汁螺杆菌大约相对分子质量（172、0、21、30、52、66）×10^3的抗原特异结合,5株（G-K）皆与胆汁螺杆菌、幽门螺杆菌等三种螺杆菌大约相对分子质量（52、82）×10^3的抗原呈阳性反应,表明A-F株针对的是胆汁螺杆菌特异性抗原,G-K株可能具有属特异性。结论筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,所结合的抗原为胆汁螺杆菌或螺杆菌的免疫优势抗原,为进一步的种、属生物学特性研究、菌株分型及血清学检测方法建立等奠定了基础。     

抗人肝素酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:肝素酶在白细胞游走和恶性肿瘤转移的过程中发挥重要作用,肝素酶抗体的制备对于自身免疫病和肿瘤的良恶性鉴别诊断具有重要意义。制备抗人肝素酶单克隆抗体,用于肝素酶的研究及临床恶性肿瘤的鉴别诊断。方法:通过杂交瘤技术将分泌抗人肝素酶单抗的小鼠B细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,获得稳定分泌抗人肝素酶单抗的杂交瘤细胞;用有限稀释法获得单克隆,以重组人肝素酶及含肝素酶的血小板裂解液对抗体进行Western印迹检测。结果:Western印迹结果显示制备的单抗与人肝素酶具有特异性免疫识别特性。结论:获得了能够特异性免疫识别人肝素酶的分泌性抗人肝素酶单克隆抗体。