OIP5对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭迁移能力的影响

目的:探讨OIP5对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭迁移能力的影响。方法:采用RNA干扰技术沉默肝癌细胞中OIP5的表达后,通过qRT-PCR和Western-blot技术检测OIP5的下调效率,CCK-8和平板克隆法检测肝癌细胞的增殖能力,Transwell法检测肝癌细胞的侵袭和迁移能力。结果:转染OIP5-siRNA后,肝癌细胞SMMC-7721中OIP5 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P0.05);同时,与对照组相比,OIP5-siRNA组肝癌细胞SMMC-7721的CCK-8实验的OD值、平板克隆法测得的克隆球个数、Transwell法测得的迁移细胞数与侵袭细胞数均明显低于对照组(P0.05)。结论:OIP5能够促进肝癌细胞的增殖和侵袭迁移,可能作为肝癌治疗的潜在靶点。     

桦褐孔菌乙酸乙酯提取物抗食管癌作用的研究

目的:探讨桦褐孔菌乙酸乙酯提取物对食管癌细胞EC-109、EC-9706增殖、凋亡和细胞周期等表型的影响。方法:用桦褐孔菌乙酸乙酯提取物处理食管癌细胞株EC-109、EC-9706,采用MTT法、流式细胞术、平板克隆实验分析桦褐孔菌乙酸乙酯提取物对食管癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:桦褐孔菌乙酸乙酯提取物可显著抑制食管癌细胞的增殖,并降低肿瘤细胞的克隆形成能力。流式细胞术显示,桦褐孔菌提取物可将食管癌细胞周期阻滞在G1期,并促进肿瘤细胞的凋亡。结论:桦褐孔菌乙酸乙酯提取物可抑制人食管癌细胞株的增殖和克隆形成,阻滞细胞周期并诱导肿瘤细胞凋亡,具有一定的抗食管癌活性。     

人参皂甙Rb1,Rg1,Re和Rh1对体外培养细胞增殖的影响

本研究应用体外培养的人胚肺成纤维细胞(2BS)和人宫颈癌细胞(Hela)为实验模型。在培养液中分别加入人参根总皂甙(SRG)和人参皂甙Rb_1、Rg_1、Re、Rh_1孵育3～7d后,用MTT法和细胞计数法测定细胞的增殖。MTT测定结果表明,Rb_1、Rg_1、Re、Rh_1可以促进衰老细胞的增殖,但对未衰老的细胞增殖没有显著影响,对Hela细胞的增殖有抑制作用。细胞计数法测定结果表明,总皂甙和4种皂甙单体都可以降低Hela细胞的群体增殖率和克隆生长率,其中Re、Rh_1作用显著。同时,增加衰老细胞的群体增殖率和克隆生长率,其中Rb_1和Rg_1作用显著。     

miR-223促进人胃癌MGC-803细胞增殖的研究

目的:探讨miR-223的表达与胃癌细胞的增殖能力的关系.方法:采用实时定量PCR检测人胃癌组织及细胞系中miR-223的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和克隆形成实验测定转染miR-223 inhibitors前后的胃癌细胞增殖的变化.结果:相对于正常胃粘膜组织及细胞,在胃癌组织和细胞中miR-223的表达水平出现了显著的上调,MGC-803细胞中转染miR-223 inhibitors能显著抑制miR-223的表达水平.抑制miR-223能降低胃癌细胞的增殖能力.结论:miR-223对胃癌细胞增殖的调控至关重要.miR-223的表达降低能显著抑制胃癌细胞的增殖能力.     

miR-34a-5p通过靶向醛缩酶A抑制肝癌细胞的增殖和迁移

[目的]证明醛缩酶A(ALDOA)在肝癌细胞的增殖和迁移作用并探索miR-34a-5p靶向调控ALDOA的分子机制,为肝癌治疗提供潜在的分子靶标。[方法]分子生物学技术构建了ALDOA表达质粒,蛋白质印迹(Western Blotting)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ALDOA的过表达和敲降效果,CCK-8验证细胞的增殖,划痕实验验证细胞的迁移。[结果]在肝癌细胞中过表达ALDOA能促进肝癌细胞的增殖与迁移(P 0.05),敲降ALDOA后肝癌细胞的增殖与迁移受到抑制(P 0.05),miR-34a-5p是通过靶向结合ALDOA的3'UTR抑制其表达从而抑制肝癌细胞的增殖与迁移(P 0.05)。[结论]miR-34a-5p通过靶向ALDOA抑制肝癌细胞的增殖和迁移。     

1504-siRNA对表达EphA3的肿瘤细胞HGC27的抑制作用

目的:研究原癌基因EphA3的小干扰RNA(siRNA)1504-siRNA对表达EphA3的胃癌细胞HGC27的增殖抑制作用。方法:将携带1504-siRNA的质粒用Vigorous转染试剂瞬时转染HGC27细胞,48 h后收集蛋白,用Western印迹检测EphA3及AKT信号通路中的蛋白分子表达;36 h后收集转染细胞,进行MTT、平板克隆形成和软琼脂克隆形成实验。结果:1504-siRNA能抑制HGC27细胞的EphA3蛋白水平,抑制其增殖、平板克隆形成和软琼脂克隆的形成,抑制pAKT、pmTOR、p-c-Raf、p-4ebp1等信号分子的表达。结论:1504-siRNA可能通过抑制AKT信号通路,而抑制HGC27细胞的增殖、存活能力和恶性程度,它可以作为肿瘤治疗的候选药物。     

shRNA沉默HuR抑制肝细胞癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移及侵袭能力

人抗原R (human antigen R,HuR)基因在肺癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中高表达。推测HuR基因也参与肝癌的发展过程。为探索HuR对肝细胞癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移和侵袭的作用,本研究通过蛋白质印迹实验,检测HuR在肝细胞癌细胞系和正常肝细胞中蛋白质的表达水平。结果显示,肝细胞癌细胞系SMMC-7721 HuR的表达量显著高于正常肝细胞HL-7702。合成特异性靶向HuR基因的shRNA,转染肝细胞癌细胞系SMMC-7721,检测结果发现,HuR基因表达量下调90%。沉默HuR,实时细胞分析技术(real time cell analysis,RTCA)结果显示,细胞增殖能力降低55%,侵袭能力下降75%;细胞划痕实验结果显示,迁移能力下降80%;克隆形成实验中细胞克隆数减少85%;此外,在HuR敲低稳转肝细胞癌细胞系SMMC-7721细胞中过表达Bcl-2,其细胞学现象部分获得逆转。激光共聚焦扫描系统检测结果显示,Bcl-2主要定位于肝细胞癌细胞系SMMC-7721的核膜及胞质。蛋白质印迹法检测结果显示,沉默HuR,Bcl-2下调92%,Survivin下调55%,Twinst1下调69%,N-钙黏着蛋白(N-cadherin)下调48%,E-钙黏着蛋白(E-cadherin)上调1.5倍。以上结果表明,HuR可能通过调控定位于核膜及胞质上的Bcl-2来参与肝细胞癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移、侵袭及克隆形成过程,HuR基因有望成为临床上治疗肝癌的一个新的潜在靶点。     

SiRNA沉默Notch2表达对Lewis肺癌细胞增殖和周期的影响

目的:采用RNA干扰技术下调Notch2基因在Lewis肺癌细胞(LLC)的表达,探讨Notch2表达下调对LLC增殖和周期的影响.方法:通过脂质体2000将Notch2-siRNA和对照con-siRNA分别转染LLC后,通过PCR,RT-PCR检测Notch2的表达情况;通过MTT、软琼脂克隆形成实验检测LLC的生长情况;并使用流式细胞技术检测细胞周期.结果:SiRNA转染LLC48小时后,PCR和RT-PCR检测结果显示Notch2在实验组的表达受到显著抑制;MTT实验显示干扰Notch2的表达显著抑制了LLC的增殖(P＜0.001);软琼脂克隆形成实验表明干扰Notch2的表达将影响LLC的克隆形成;细胞周期实验进一步证实干扰Notch2的表达使处于活跃增殖期(S期)的LLC数量明显减少.结论:Notch2在LLC中的表达发挥重要的促癌作用,干扰Notch2的表达能显著抑制LLC的分裂增殖和克隆形成,从而抑制肿瘤的生长.     

MTERF2在人子宫颈癌细胞株中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:线粒体转录终止因子2(MTERF2)是线粒体类核的重要组成成分,且参与线粒体基因的表达调控。本研究旨在阐明MTERF2基因在体外培养的人类正常子宫颈上皮细胞株和子宫颈癌细胞株中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR和Western印迹检测正常子宫颈上皮细胞株(End1/E6E7)和子宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa、C-33A、C4-1、CaSki)中MTERF2 mRNA及其蛋白质的表达情况;分别构建MTERF2稳定过表达或下调表达的子宫颈癌HeLa细胞株,通过XTT实验、细胞划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和流式细胞术等方法观察MTERF2基因过表达或表达下调对子宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。结果:MTERF2蛋白及mRNA在子宫颈癌细胞株中的表达水平均低于正常宫颈上皮细胞株。与对照组相比,稳定过表达MTERF2的子宫颈癌HeLa细胞增殖能力下降,同时子宫颈癌HeLa细胞的克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降;细胞周期出现G1/S期阻滞,周期蛋白D1和pRb蛋白的表达水平明显下降。下调MTERF2表达的子宫颈癌HeLa细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均有所增强,且未出现细胞周期阻滞。此外,稳定过表达或下调MTERF2表达对子宫颈癌HeLa细胞凋亡均没有显著影响。结论:MTERF2基因在子宫颈癌细胞株中的表达水平低于正常子宫颈上皮细胞株,且负调控子宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,提示其可能在子宫颈癌发生发展中发挥类似抑癌基因的作用。     

转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:研究转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭作用的影响。方法:采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞WSTF高表达细胞系A549-WSTF和空质粒对照细胞系A549-control。细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;Trans-well迁移实验和侵袭实验观察WSTF对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot验证A549-WSTF细胞WSTF蛋白水平显著高于对照细胞A549-control,P=0.0004。WSTF高表达明显促进了肺癌细胞的增殖能力(1-4天P值分别为0.002、0.0004、0.0002和3.21×10-5)和克隆形成能力(P=0.004);WSTF过表达还显著促进了肺癌细胞从trans-well小室迁移到下室的作用,其OD570值分别为0.626±0.013(A549-WSTF)和0.322±0.010(A549-control),P=2.37×10-5;WSTF还促进肺癌细胞穿透基质胶迁移到下室,其OD570值分别为0.600±0.027(A549-WSTF)和0.333±0.017(A549-control),P=0.0004。结论:WSTF可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力而发挥促癌作用。     

CCDC3对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其作用机制

该文研究了CCDC3基因对人结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。采用CCK-8法检测CCDC3对人结肠癌HCT116细胞增殖的影响。采用平板克隆和软琼脂克隆方法检测CCDC3对癌细胞克隆形成能力的影响。采用Transwell方法检测CCDC3对HCT116细胞迁移和侵袭的影响。采用Western blot法检测CCDC3对HCT116细胞上皮间质转化相关蛋白质水平的影响。采用体内成瘤实验检测CCDC3对HCT116细胞致瘤能力的影响。结果表明, CCDC3在癌细胞的生长调节中发挥重要的作用。过表达CCDC3显著促进癌细胞生长,增强癌细胞的克隆形成能力,增强癌细胞的迁移、侵袭和致瘤能力;敲低CCDC3后,癌细胞的恶性减弱。同时,该研究还发现, CCDC3的表达与癌细胞发生上皮间质转化相关。这些研究结果表明, CCDC3可能是一个新的癌基因,为结肠癌治疗寻找新的治疗靶点提供了线索。     

白藜芦醇通过下调MEK/ERK/c-Jun信号通路抑制H2O2诱导的肺癌细胞增殖

目的:探讨白藜芦醇(Res)是否通过下调ERK激酶/胞外信号调节激酶/原癌基因(MEK/ERK/c-Jun)信号通路抑制小剂量过氧化氢(H2O2)诱导肺癌细胞增殖。方法:采用MTS实验检测小剂量20μM H2O2以及分别加入MEK阻断剂U0126和Res后H2O2对肺癌细胞NCI-H1395增殖的影响,采用Western Blot检测H2O2对ERK1/2和Akt蛋白磷酸化水平以及加入Res后H2O2对MEK、ERK1/2和c-Jun蛋白磷酸化水平的影响。结果:小剂量H2O2对肺癌细胞NCI-H1395具有促增殖作用,H2O2通过活化ERK1/2和Akt蛋白的磷酸化水平促进肺癌细胞NCI-H1395增殖,加入MEK阻断剂U0126后H2O2对肺癌细胞NCI-H1395增殖作用降低(P<0.05)。Res可抑制H2O2诱导的肺癌细胞NCI-H1395增殖,加入Res后,H2O2引起的MEK、ERK1/2和c-Jun蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论:小剂量H2O2对肺癌细胞NCI-H1395具有促增殖作用,Res通过抑制MEK/ERK/c-Jun信号通路来抑制H2O2对肺癌细胞NCI-H1395的促增殖作用,其具体机制还需进一步研究。     

从反面利用G-CSF的癌增殖作用

日本中外制药公司和麒麟啤洒-三共公司最近进行粒状白细胞集落刺激因子(G-CSF)的临床试验,探讨它作为增强抗癌剂效果的增强因子的作用。这是从反面利用分化增殖因子的癌增殖作用。以前,因为担心癌增殖作用,所以在日本分化生长因子等迟迟不能进入临床试验。这次试验也许能成为生物技术医药开发的典型实例。 G-CSF和粒状白细胞巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素1～8、上皮细胞生长因子等体内的分化生长因子不仅有诱引正常细胞分化、增殖的作用,而且还有使某种癌细胞自     

LncRNA AC006449.2抑制卵巢癌细胞增殖

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs, lncRNAs)是一类无蛋白质编码功能的RNAs。多项研究表明,lncRNAs在肿瘤的发生发展中发挥重要的作用。GEPIA数据库结合qRT-PCR结果提示,lncRNA AC006449.2在卵巢癌组织中的表达量显著低于正常组织,且其在卵巢癌细胞中的水平也低于正常卵巢上皮细胞。进一步分析发现,lncRNA AC006449.2的表达量与卵巢癌患者较差的预后负相关,与瘤体大小和远端转移密切相关,而与卵巢癌患者年龄、淋巴结转移及TNM分期无关。细胞功能研究发现,上调AC006449.2,卵巢癌细胞的增殖和平板克隆能力降低;而下调AC006449.2之后,该细胞的增殖和平板克隆能力显著增加。深入的机制研究发现,AC006449.2可上调细胞周期相关蛋白p21和p27的表达量,上调促凋亡蛋白Bax的表达,而下调抗凋亡蛋白Bcl2的表达量,最终抑制卵巢癌细胞的增殖。上述研究结果推测,lncRNA AC006449.2在卵巢癌细胞中可能发挥抑癌因子的作用。     

巨噬细胞集落刺激因子克隆化成功

日本森永乳业公司和美国 Genetics Institute(GI)公司都宣布成功地克隆化了有待查明其机理的血液增殖分化因子——人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF,CSF-1)的基因。M-CSF 是刺激巨噬细胞的前驱细胞,促进巨噬细胞增殖分化的因子。巨噬细胞是能吞食细菌和癌细胞等,并从体内排出的非特异性的免疫系统的主力,是活体防御的重要细胞。GI 公司开发 M-CSF 的目的是为了制造肺炎等感染症的治疗药,现在正进行临证前期试验,计划在1987年内进入临床试验。森永乳业公司是否要开发重组 M-CSF,现在似乎还没有决     

Cetus克隆菌落刺激因素-1

编码菌落刺激因素-1(CSF-1)的人体基因已由Cetus公司(埃默里维尔,加利福尼亚)首次克隆并得到表达。CSF-1与巨噬细胞上的特定受体相结合。它刺激骨髓中未分化的前体细胞生长和发育,如巨噬细胞和单核细胞。此外 ,CSF-1诱导血液中成熟单核细胞的增殖和血管外成熟巨噬细胞的增殖。它也促使干扰素、肿瘤坏死因素和粒细     

克隆新的巨核细胞增殖因子

中外制药公司和京都府立医科大学合作纯化并克隆目前未报道过的新型巨核细胞(血小板的前驱细胞)增殖因子获得成功。现在正在探讨用基因操作大量生产,使动物个体增加血小板。增殖红细胞的促红细胞生成素、增殖白细胞的粒细胞刺激因子都作为大型医药。 该公司等从人胰癌的HPC-Y5株用小鼠骨髓细胞集落刺激形成法纯化巨核细胞增殖因子(MPF)获得成功。分子量为32000,在N配糖体键上结合一个糖链。目前报告了具巨核细胞增殖活性的白细胞介素6(IL6)和离体的巨核细胞增殖活性几乎相同。     

长非编码RNA SNHG18对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响

目的:探究长非编码RNA SNHG18对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中lncRNA SNHG18的表达;采用MTT和克隆形成试验观察转染SNHG18过表达质粒后胃癌细胞BGC823增殖活力的变化;通过流式细胞术检测lncRNA SNHG18对胃癌细胞BGC823凋亡的影响。结果:相较于癌旁组织和胃正常粘膜上皮细胞系GSE-1,胃癌组织及胃癌细胞系中SNHG18的表达水平显著降低(P0.05);胃癌细胞过表达SNHG18增殖活力以及克隆形成的能力均显著降低(P0.05),而细胞凋亡率明显升高(P0.05)。结论:胃癌组织中长非编码RNA SNHG18呈低表达,可促进胃癌细胞增殖并抑制其凋亡,可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。     

“三明治”杂交法对斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA克隆株的鉴定

用限制性内切酶HindⅢ将斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA切割为A、B、C、D_1、D_2、E、F七个片段,与载体pUC18体外连接后转化大肠杆菌TG_1。通过“三明治“杂交法鉴定,分别获得七个片段的克隆株。但A片段克隆株中外源DNA片段发生了缺失。     

慢病毒介导NCL基因沉默的胃癌细胞系的建立及对细胞增殖影响的研究

目的:本研究通过建立慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系,研究NCL沉默对胃癌细胞增殖能力的影响,为深入探究胃癌发生发展的分子机制提供理论基础。方法:利用小发卡RNA(shRNA)介导的慢病毒系统沉默胃癌细胞中的NCL,并利用RT-q PCR和免疫印迹检测基因沉默效果;并利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力的改变。结果:琼脂糖凝胶电泳实验检测经酶切鉴定的pKLO.1-NCL载体,显示5000 bp和2000 bp两条带,测序峰图显示与设计序列一致;利用HEK293T包装病毒,感染胃癌细胞SGC-7901,免疫印迹结果显示sh NCL组NCL蛋白水平显著低于对照组,RT-qPCR结果显示,sh NCL组NCL表达量显著降低,为对照组的0.4209±0.087倍(P0.001);CCK-8实验结果显示,sh NCL组在第5天的吸光值较对照组显著降低(P0.001),平板克隆形成实验结果显示,sh NCL组克隆形成能力较对照组显著降低,克隆形成数量显著低于对照组(P0.01)。结论:建立了慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系SGC-7901,并利用此系统研究了NCL基因对胃癌细胞增殖能力的影响,证明了NCL基因能够促进胃癌细胞的增殖,为后续研究NCL基因在胃癌细胞中的作用提供基础。