一种从人血凝块中提取基因组DNA的方法

介绍了一种新的从人血凝块中提取基因组DNA的方法,用该方法提取的DNA成功地应用于PCR和限制性酶切等后续实验中。基本过程为首先机械粉碎,然后高盐高EDTA溶液处理,含蛋白酶K和SDS的消化液变换温度消化,苯酚氯仿抽提。     

龙须菜体表附生细菌的几种分离方法比较

采用超声波粉碎法、涡旋振荡法、超声波清洗法、研磨匀浆法等4种不同的方法处理龙须菜,分离其体表的附生细菌,并对分离细菌的数量、种类、形态结构、细胞壁特性等进行了观察和分析。通过对不同方法和相间方法的不同处理所得结果比较显示,超声波清洗法和研磨匀浆法对分离细菌的数量和种类效果都较差;超声波粉碎法和涡旋振荡法效果较好,尤以超声波粉碎法的30W30s处理效果最好,该方法分离到本项目4个方法13个处理获得的16个菌株中的12个菌株,龙须菜的细菌数1．75×10~6cells/g。     

DF-6 P3A型超声波粉碎机 DF-6P3A型智能超声波粉碎机

简讯 宁波师范学院实验总厂是浙江省教委、宁波市教委下属研究、生产生化仪器和教学仪器的科技实体,技术力量雄厚,质量检验手段先进,产品结构合理,性能可靠,并取得省科技部门和省教仪公司鉴定。该厂生产的超声波粉碎机是利用强超声在液体中产生空化效应原理,对生物材料等物质进行超声处理的多功能、多用途仪器,用于粉碎细胞、乳化、分散、提取、匀化、消泡、清洗及加速化学反应等,是生物、化学、农林、医药、食品、环保、卫生、能源等领域的得力工具。目前可供施种类型的超声波粉碎机。     

龙须菜体表附生细菌的几种分离方法比较

采用超声波粉碎法、涡旋振荡法、超声波清洗法、研磨匀浆法等4种不同的方法处理龙须菜,分离其体表的附生细菌,并对分离细菌的数量、种类、形态结构、细胞壁特性等进行了观察和分析。通过对不同方法和相间方法的不同处理所得结果比较显示,超声波清洗法和研磨匀浆法对分离细菌的数量和种类效果都较差;超声波粉碎法和涡旋振荡法效果较好,尤以超声波粉碎法的30W30s处理效果最好,该方法分离到本项目4个方法13个处理获得的16个菌株中的12个菌株,龙须菜的细菌数1．75×10⁶cells/g。     

用醋酸铵制备质粒DNA的简便方法

我们在生物化学与分子生物学实验教学中开设了质粒 DNA制备及酶切鉴定实验。鉴于本科生实验单元时间短 (4学时 ) ,用常规的 Brinboim和 Doly方法进行质粒 DNA的制备往往不能在规定学时内完成实验。因此 ,我们对原有的实验方法 ,略加改进 ,采用高离子浓度中性盐一步沉淀质粒 DNA,制备出高纯度、高产率的质粒 DNA样品。1　材料与方法1.1　材料　 p UC19重组质粒为本室构建 (内插入一约为 1kb大小的片段 ) ;LB培养基 ;溶液 (含 5 0 mmol葡萄糖 ,10 mmol EDTA,2 5 mmol Tris- HCl,p H8.0 ) ;溶液 (含新鲜配制 0 .2 N Na OH及 1%…     

末端终止法测定非特异性降解的DNA片段的顺序

用末端终止法测定DNA顺序的方法之一是用限制性内切酶将被测DNA降解,再与噬菌体M_(13)DNA重组、克隆。提取单链DNA做为模板,进行顺序测定。寻找一些非特异性的降解工具取代内切酶,有一定的经济价值,而且还可以扩大方法的应用范围。尤其在多酶切点的载体M_(13)mp系列出现后,更为DNA重组提供了方便。本文用酶法及超声波法切剪,得到了适合在M_(13)mp_8载体中以平齐末端重组的片段。一、材料与方法 1.材料小牛胸腺DNA及质粒PJDB     

狗尾草总DNA的提取与纯化研究

狗尾草杂草中富含多糖和酚类物质,而用已报道的提取方法均难得到高纯度DNA。为此,对提取植物DNA的SDS法进行了改进。用4．5ml细胞提取液,1．0ml饱和NaAc溶液,0．10倍样液体积的无水乙醇,氯仿／异戊醇溶液与样液体积比为0．80,与样液等体积的酚／氯仿／异戊醇溶液(28：21：1)和异丙醇,在65℃水浴加热60min,可从1．0g狗尾草中提取780μg纯DNA。     

花生总DNA的快速提取与纯化研究

优化了花生总DNA的提取条件。用3.50ml细胞提取液,2.50ml饱和KCl溶液,0．25倍样液体积的酚／氯仿／异戊醇(21：28：1)溶液,0.30倍样液体积的氯仿／异戊醇溶液,0.60倍体积的异丙醇,可从1．0g花生芽中提得4．0mg纯DNA。用该法提取总DNA的产率高,时间短,DNA的纯度高。     

利用超声波促进苯胺生物降解

报道了用超声波降解苯胺的试验 ,探讨了超声波辐射时间、溶液中苯胺的初始浓度、溶液温度、pH等因素对苯胺降解效果的影响。试验表明 ,超声波辐射的较适时间为 8min ,苯胺的较适浓度为 15 33mg/L ,适宜降解的培养条件为 ,温度 30℃ ,pH 7.5 ,培养时间 12d。此条件下的苯胺最高降解率可达 94 .2 %。     

用粘粒载体克隆霍乱弧菌染色体基因方法的建立

本文采用我国 El Tor 型霍乱弧菌805菌株(稻叶血清型,噬菌体-生物型 ld)为实验菌株,对粘粒载体(Cosmid)基因克隆的方法,进行了探索.首先从感染噬菌体λ突变体的溶原菌(HB 2688,HB2690)制备包装抽提物。制备方案有二:一是直接制备 HB2688,HB2690混合包装抽提物;另一是用超声波处理制备 HB2690抽提物;用冻融法制备 HB2688抽提物.包装时再将两者混合.本文认为以 pHC79为载体进行包装时,两方案效果一样,第一方案操作较简便些.在核酸操作中,从805菌株提取染色体 DNA,要求 DNA 的长度约为100kb;进行染色体 DNA部分消解时,应使大部分 DNA 片段在30～40kb 之间;连接时,碱性磷酸酶处理过的载体量应为30～40kb DNA 的10倍.本文以 pHC79为载体,建立805菌株染色体 DNA 无性繁殖系,得到500多个克隆子。     

绿豆核DNA的快速提取方法研究

为缩短提取核DNA的时间,提高DNA的得率,对绿豆核DNA的提取条件进行了优化,用4.00ml细胞提取液,2.50ml饱和KCl溶液,0.30倍样液体积的酚/氯仿/异戊醇（21：28：1）溶液,0.30倍样液体积的氯仿/异戊醇溶液,0.90倍体积的异丙醇,可从1.0g绿豆芽中提得4.0mg纯DNA。     

介绍一种从胶凝中回收DNA的方法

在基因的结构与功能的研究中,如基因的物理图谱,测定DNA序列,DNA杂交,DNA重组,都必须首先获得高纯度的足量的DNA片段。如何从凝胶中回收DNA组份则是比较困难而又关键的问题。从已发表的文献来看,目前尚没有一种公认满意的方法。我们根据本实验室的具体条件,摸索建立了一种“带前洗脱槽法”,用此法从凝胶中洗脱回收DNA取得了非常满意的效果。在紫外灯下确定DNA带的位置,在带前挖一个适当大小的凹形槽(图1)。用适当宽度的透析膜包被梳子的一面,两侧面和底面(图2)。将梳子置DNA带前,未包被透析膜的一面紧贴带的凝胶。凹形槽其余部分用较高浓度(1％)的琼脂糖凝胶填     

利用染色质免疫共沉淀技术确定转录因子RIN调控的靶基因

以粉红期番茄果实为材料,用含不同浓度甲醛的缓冲液交联DNA和蛋白质,利用超声波将其染色质随机断裂成大小为200-1 000 bp的片段,用RIN蛋白的特异性抗体免疫沉淀与RIN蛋白结合的DNA片段,然后解交联和纯化DNA片段,最终用普通PCR试验和测序验证与转录因子RIN结合的DNA序列.结果表明,适用于番茄果实的最佳ChIP试验条件为:用1％甲醛溶液交联DNA和蛋白质的复合物;用20％功率,工作6s,间隔10s,脉冲3次超声破碎该复合物,可以得到适当大小的片段,用于后续的试验.普通PCR和测序验证结果证明转录因子RIN与LeACS2和LeACS4启动子区域的CArG box序列结合.     

厨房中粗提DNA

DNA是生物遗传信息的载体,经典的DNA提取方法需要多种专门的试剂和仪器,所以人们对DNA有种神秘感,总觉得离自己很遥远。其实,科学就在我们身边,DNA就在我们的一日三餐里。本文介绍一种利用厨房中的材料和工具进行DNA粗提的方法。1原理DNA是极性分子,易溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它的钠盐比游离酸易溶于水。DNA在不同的盐溶液中溶解度差别很大,如在0．14 mol／L的氯化钠溶液溶解度最低,仅为在水中溶解度的1％,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至2 mol/L氯化钠溶液中的溶解度     

一种快速简便构建DNA病毒测序文库的方法

为了对1株中国棉铃虫核型多角体缺失病毒HZ-9进行基因组测序,采用了一种新的方法,通过超声波振断HaBacHZ9细菌人工染色体质粒（bacterial artificial chromosome plasmid,Bacmid）基因组DNA,用Taq酶在DNA片段两端加腺噤呤A,胶回收后得到预期的1—2kb的DNA片段,然后与pGEM-Teasy载体连接,构建了中国棉铃虫缺失病毒HaBacHZ9的亚克隆文库。结果随机挑选10个克隆子酶切分析,显示9个克隆子有1500bp左右的插入片断,并对HaBaeHZ9进行了全基因组测序。结论成功构建了HaBaeHZ9的DNA测序文库,为HZ-9功能基因组学研究奠定了基础,这是一种简单快速的构建DNA病毒测序文库的方法。     

福尔马林保存的动物标本基因组DNA的提取方法

从在福尔马林长期保存的动物标本中提取基因组DNA用于分子生物学研究一直是一个未得到彻底解决的难题。本文提出了一种从浸泡在福尔马林的大仓鼠肝脏和日本鳗鲡肌肉标本中提取基因组DNA的新方法。取浸泡于福尔马林中的大仓鼠肝脏或日本鳗2鲡肌肉适量,用PBS溶液冲洗,放在灭菌的吸水纸上将其揩干,于超净工作台内用无菌剪刀将材料剪成50mg的小块,放入PBS液浸泡12－24h;然后转入70％的乙醇中处理12－24h。依次换入下列梯度酒精中处理：80％乙醇,2h,重复一次;90％乙醇,2h,重复一次;95％乙醇,2h,重复一次;100％乙醇,1h,重复一次。然后将材料放入1／2倍的PBS液中浸泡12h。其间更换一次溶液。提取方法参考Sambroock等人（1989）,加蛋白K瓣量按标准量（100μg/mlL),在50－56℃温浴3－6h处理过程中,不断轻摇混匀,视消化效果可以重复加入标准量的1／2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止;酚氯仿抽提最后一次的上清液移入透析袋中透析;沉淀DNA时,在－20℃下20min效果为宜。该方法主要特点在于对标本进行预处理,在保证不使DNA进一步了解的前提下,首先去除标本中所含的福尔马林溶液的成分,然后利用改进的酚氯仿抽提法提取该类标本的基因组DNA,再进一步用透析法纯化DNA。研究结果表明,采用该方法提取和纯化被试标本基因组DNA能较好地应用于RAPD,微卫星位点的PCR扩增、Suthern和斑点杂交。     

染色体粉碎——基因组灾难性事件产物

"染色体粉碎"是最初在肿瘤细胞中发现的一种复杂的基因组重排现象.在该事件中,细胞的一条或几条染色体在短时间内发生大量的DNA双链断裂,形成小的DNA碎片,之后这些碎片被细胞的DNA修复机制随机地拼接起来,形成新的染色体.染色体粉碎事件会造成大量的基因组重排,引起DNA拷贝数的变异和基因融合,从而导致正常细胞向肿瘤细胞的快速转化.这与传统的癌症发生理论不同,传统理论认为肿瘤的发生是由基因突变逐步积累而导致的,因此染色体粉碎现象可能揭示了一种肿瘤发生的新机制.目前,该现象的内在机制还不完全清楚,其判别标准也存在争议.本文综述了近年来关于染色体粉碎现象的判别标准和产生机制,探讨了该现象与肿瘤发生发展的关系,为进一步研究染色体粉碎事件提供参考.     

流感病毒基质蛋白DNA疫苗的免疫保护作用研究

流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)在病毒复制和毒力方面有重要作用.编码基质蛋白的M1基因和M2基因胞外域序列是A型流感病毒的保守序列,是研究具有交叉保护能力流感疫苗的候选基因.我们构建了真核表达质粒pCAGGSP7/M1和pCAGGSP7/M2,用质粒DNA免疫小鼠以观察其免疫原性.分别在M1DNA免疫2、3、4、5、6次或M2 DNA免疫4、5、6次7 d后,用致死量同源流感病毒A/PR/8攻击小鼠,通过检测小鼠血清抗体滴度、肺部病毒量和小鼠存活率来观察质粒DNA的保护效果.结果表明,随着免疫次数增加,M1 DNA免疫组在病毒攻击后小鼠存活率增高,而M2 DNA免疫组小鼠攻毒后全部死亡.说明M1 DNA多次免疫后能提供抗流感病毒的部分保护,M2 DNA没有免疫保护作用.     

书刊介绍

本书是介绍重组DNA必需具备的方法技术、实验材材、操作过程等的实用参考书。对分子生物学、遗传工程的科研、技术人员是很实用的。内容先汇集主要名词解释,然后分四部分:一、基本技术,包括质粒DNA分离的快速方法用氯化铯-溴乙淀(CsCl—EtBr)超速离心或柱型色层分离法分离质粒DNA,从CsCl-EtBr溶液复原质粒DNA,从     

超声波对谷氨酸结晶过程影响的研究

利用超声波这一能量场对谷氨酸结晶过程进行了研究,通过对谷氨酸溶液的表面张力和电导率测定,分析了超声波场影响谷氨酸溶液结晶机理。实验结果表明:超声波可提高谷氨酸溶液的结晶速率,并可改善谷氨酸晶体颗粒质地。在超声波功率为50 w条件下3 min内谷氨酸结晶速率可达到90%以上,比未经超声波处理同等条件下提高70%。