岱山盐场可培养嗜盐菌的多样性及其产酶活性筛选

从岱山盐场采集样品,利用选择性培养基分离培养嗜盐菌,对盐田环境中可培养嗜盐菌的多样性及产酶活性进行研究.共分离得到181株嗜盐菌菌株,通过真细菌和古生菌两对通用引物扩增其16S rRNA 基因,并采用限制性内切酶Hinf I进行ARDRA(amplified rDNA restriction analysis)多态性分析,共分为21个不同的操作分类单元(operation taxonomy units, OTUs),其中嗜盐细菌有12个OTUs,嗜盐古菌有9个OTUs.选取具有不同酶切图谱的代表菌株进行克隆测序,BLAST 比对及系统发育分析将嗜盐细菌归于7个属,其中嗜盐单胞菌属(Halomonas)的菌株数占优势,是嗜盐细菌总数的46.8%;嗜盐古菌归于4个属,盐盒菌属(Haloarcula)的菌株数占优势,是嗜盐古菌总数的49.1%.对分离菌株的产酶活性进行检测表明,岱山盐田环境蕴含丰富的产淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等生物活性酶的嗜盐菌, 其中盐盒菌属产酶菌株数最丰富.研究结果表明,岱山盐田环境中具有较为丰富的嗜盐菌多样性,是筛选产酶菌株的重要资源库.     

刺参消化道中蛭弧菌类的生物多样性分析

研究了刺参消化道中蛭弧菌类生物多样性。用刺参肠道内容物提取微生物总DNA,分别使用蛭弧菌类生物特异性引物Bd、Bac扩增获得16S rDNA目的片段,连接pMD19 T载体,转化到大肠埃希菌DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选及阳性克隆筛选,通过核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析(ARDAR)对阳性克隆进行分型,使用HaeⅢ和MspⅠ双酶切各60个阳性克隆,选取不同ARDAR型的阳性克隆测序,并进行生物学分析。结果显示：引物Bd、Bac的16S rDNA扩增产物分别分离获得3个和2个差异性序列,各属于一个类群,分属于蛭弧菌属(Bdellovibrio)和噬菌弧菌属(Bacteriovorax)。这些序列与数据库中相应菌株序列的最大相似性均为95.0%,这5个序列的菌株可能为潜在的新种。     

抗生素对小鼠菌群失调腹泻肠道菌群多样性的影响

目的探讨菌群失调腹泻抗生素造模对小鼠肠道菌群多样性的影响,为临床用药提供依据。方法运用混合抗生素建立小鼠菌群失调腹泻模型,采集肠道内容物,提取肠道微生物宏基因组,通过特定引物PCR扩增后进行扩增核糖体DNA限制性分析(Amplified rDNA Restriction Analysis,ARDRA)探讨其多样性的变化。结果正常组和模型组细菌的OTUs数为6、5,乳酸杆菌的OTUs数为6、4;模型组细菌和乳酸杆菌的多样性同正常组比较分别为59.91%、40.00%。结论抗生素造模使得肠道内的微生态平衡被破坏,肠道菌群多样性下降。     

ARDRA分型测定刺参养殖环境中蛭弧菌多样性

【目的】研究刺参养殖环境中蛭弧菌类微生物的多样性及其组成特征。【方法】对刺参养殖用水进行过滤,获得微生物并提取其总DNA,分别采用两对特异性引物Per和Bac扩增蛭弧菌类微生物相应的16S r RNA基因目的片段。通过核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析(ARDRA)方法,使用HaeⅢ和MspⅠ,双酶切各60个目的基因的单克隆,选不同条带克隆进行测序并对测序结果的多重序列分析比对。【结果】确定两对引物分别存在8和9种碱基差异序列,均属于噬菌弧菌属,分属于3个类群中。类群Ⅰ、Ⅱ为优势类群,且均为已知类群,类群Ⅲ为潜在的新类群;Per1(KP214541)和Bac44(KP214551)代表菌株分别为优势种。【结论】刺参养殖环境中蛭弧菌具有较高的多样性,包括已知类型和未知类型的蛭弧菌;可进一步进行蛭弧菌的分离、培养,用于刺参养殖中病害防治研究。     

野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化

为了提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆群体ＤＮＡ多态性的能力,随机扩增产物用限制性内切酶消化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物。结果发现：１．有的限制性内切酶能够消化野大豆群体ＤＮＡ的随机扩增产物,有的却不能。２．有的限制性内切酶消化无ＲＡＰＤ个体的扩增产物后能够产生多太性ＤＮＡ片段,有 内切酶不能产生。３．有的引物的无ＲＡＰＤ个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的ＤＮＡ片会面     

丛枝菌根真菌对紫薇耐盐性的影响

于盆栽条件下对紫薇(Lagerstroemia indica)接种Funneliformis mosseae,并施加不同浓度盐(0、0.15%、0.30%和0.45%NaCl)处理后,测定菌根侵染率、菌根依赖性、生长指标、根系参数、生理指标和耐盐系数。结果表明,接种F.mosseae显著提高盐胁迫下紫薇的株高、鲜重、干重、根长、根尖数、平均直径以及总长度,进而增大了紫薇根系的总表面积与总体积,促进了紫薇根系的生长;增加了叶片N、P、K和叶片叶绿素含量,其中0.15%NaCl胁迫下,接种处理紫薇叶片N含量比对照提高最大,为对照的1.5倍。0.45%NaCl胁迫下,接种处理后紫薇叶片P、K和叶绿素含量比对照提高最大,分别为对照的1.5、1.3和2.4倍;接种能显著降低盐胁迫下紫薇叶片Na+和Cl-含量,其中0.15%NaCl胁迫下,接种处理的Na+和Cl-含量比未接种降低幅度最大,分别为对照的59%和74%;降低盐胁迫下紫薇叶片丙二醛含量和膜透性,其中0.30%NaCl胁迫下,接种处理紫薇叶片的丙二醛含量和膜透性分别比未接种的降低33%和12%;接种F.mosseae后紫薇叶片脯氨酸含量显著降低,可溶性糖含量显著提高,且随盐浓度的增大,呈逐渐下降趋势;接种F.mosseae的紫薇耐盐系数比未接种处理提高27%。这些结果表明接种F.mosseae提高了紫薇的耐盐性。     

DNA分子量标准制备技术：方法与进展

DNA分子量标准是一组分子量大小已知的DNA片段混合物,用于指示核酸电泳中未知样品的分子量大小,从而帮助实验人员判断DNA样品的性质。因而DNA分子量标准成为目前分子生物学和基因工程领域不可或缺的一种电泳耗材。综述了目前各种DNA分子量标准产品的制备方法和技术原理及近年来该领域的一些技术进展情况。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA克隆片段的限制酶切分析

本文采用10种限制性内切核酸酶分析了单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)335株DNA BglⅡ8种克隆片段共12个重组质粒。发现了HSV-2 DNA L链末端区域有限制酶切位点的变异并对HSV-2 DNA单一序列区域和末端重复区域的稳定性进行了初步讨论。本文应用末端标记技术和末端杂交分析法对编码糖蛋白D的HSV-2 DNA BglⅡL片段和含有形态学转化基因的HSV-2DNA BglⅡN片段进行了详细的限制性内切核酸酶物理图谱分析。     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用AP-PCR和RAPD技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株V34基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析(RFLP),及对编码核糖体5.8SrRNA的DNA(rDNA)进行PCR扩增后的产物进行限制性内切酶长度多态性分析(PCR-RFLP)的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株中的两个菌株在遗传上有着较大程度的相似性。     

丛枝菌根真菌对辣椒光合特性及根际微生物多样性和酶活性的影响

在育苗和栽培基质中添加具有生物活性的微生物群体是改善无土栽培有机基质性状和提高应用效果的重要途径。该试验通过在辣椒育苗和栽培基质中添加丛枝菌根真菌制剂恩益碧(NEB-F),研究了AMF对辣椒生长、果实产量、光合特性以及根际微生物多样性和酶活性的影响。结果显示:(1)基质添加AMF显著促进了辣椒植株生长,并明显提高了产量。(2)AMF处理显著提高了辣椒植株叶片的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、水分利用效率(WUE),而使胞间二氧化碳浓度(Ci)显著降低,同时对辣椒叶片最大光化学效率(Fv/Fm)的影响不大,而使实际光化学效率(ФPSⅡ)、光化学猝灭(qP)和表观光合电子传递效率(ETR)显著提高。(3)基质添加AMF显著增加基质中细菌、放线菌数量,而降低真菌数量,并明显提高了根际微生物多样性指数以及过氧化氢酶、碱性磷酸酶和尿酶活性;添加AMF基质中的细菌、真菌、放线菌数量均与其过氧化氢酶、脲酶、碱性磷酸酶之间呈显著或极显著正相关关系。研究表明,基质添加AMF不仅增大了辣椒叶片气孔导度,而且促进电子传递速率,提高CO2同化利用效率和净光合速率;同时促使辣椒根际微生物区系从低肥力的"真菌型"向高肥力的"细菌型"转化,提高根际微生物多样性和酶活性,有助于维持辣椒根际生态系统的稳定性与和谐性,从而促进辣椒幼苗生长,并提高产量。基质中添加AMF是提高有机基质应用效果的有效途径。     

不同砧木对西瓜嫁接苗耐寒性的影响

以西瓜(Citrullus vulgarris)郑抗1号为接穗,日本南瓜（C. moschata）、黑籽南瓜（C. ficifolia）、葫芦（Lagenaria siceraia）为砧木,研究了嫁接苗和自根苗在（7.5±0.5）℃低温胁迫下叶片相关耐寒性指标的变化。结果表明：低温处理后嫁接苗丙二醛（MDA）含量、电解质渗透率显著低于自根苗;叶绿素、脯氨酸（Pro）、可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性显著高于自根苗。与处理前相比,12 d时日本南瓜砧、黑籽南瓜砧和葫芦砧嫁接苗叶绿素含量分别降低了30.48%、28.48%和52.69%;葫芦砧嫁接苗MDA含量6 d时较处理前增加了313.16%;3～12 d日本南瓜砧和黑籽南瓜砧嫁接苗电解质渗透率显著低于葫芦砧嫁接苗;低温处理期间,日本南瓜砧嫁接苗可溶性糖含量分别比黑籽南瓜砧和葫芦砧嫁接苗高出24.71%和31.17%,SOD、POD、CAT酶活性高于另外2个组合。综合各项指标显示：3种砧木均能提高接穗对低温的忍耐能力,其顺序为日本南瓜砧＞黑籽南瓜砧＞葫芦砧。     

丛枝菌根真菌在田间的分布特征、代谢活性及其对甘薯生长的影响

研究了大田条件下丛枝菌根(AM)真菌的分布特征、代谢活性及其对甘薯的生长效应.结果表明,接种Glomus intraradices 8周后,甘薯地上部干重,薯块鲜重和薯块个数均明显高于不接种对照;植株地上部和根系的吸磷量显著提高.与不接种对照相比,接种处理的甘薯菌根侵染率、甘薯根外菌丝密度以及甘薯根内菌丝的活性(根内菌丝碱性磷酸酶活性)显著提高.进一步分析甘薯根际不同方位上的菌丝分布,发现接种处理中平行于垄的方向的菌丝密度显著高于苗子下方的菌丝密度,而不接种处理的各个方向总菌丝密度无差异;活菌丝(具琥珀酸脱氢酶活性的菌丝)密度在各个方向的分布规律与总菌丝密度的分布规律一致.接种后根内菌丝活性的增强,根外活性菌丝密度的增加及其分布特征的改变,是甘薯产量增加的主要原因.     

AM真菌与植物共生的生理生化效应研究进展

丛枝菌根真菌是广泛分布的一类土壤微生物,与植物共生后,能够促进宿主对土壤中矿质元素的吸收,调节宿主体内的代谢活动,增强植物的抗逆性,促进植物生长,增加作物产量,改善作物品质,本文综述了上述方面的研究进展和取得的主要成就。     

植酸钠对菌根真菌根内菌丝碱性磷酸酶活性及根外菌丝生长的影响

采用三室隔网培养装置,以玉米为宿主植物,接种丛枝菌根真菌(AM)(Glomus intraradices),研究了不同用量的植酸钠对AM真菌生长和代谢活性的影响．研究发现,接种AM真菌的植株地上部和根系的P浓度和吸P量,比非菌根植物的提高了1～2倍．外源植酸钠的存在,显著降低了AM真菌根内菌丝的碱性磷酸酶活性,增加了AM真菌在土壤中的菌丝密度．结果表明,外源植酸钠对根内AM真菌碱性磷酸酶活性和真菌根外菌丝的生长具有调控(增减)作用,并且AM真菌提高了植物对土壤固有养分和外源植酸钠中P的吸收和利用．     

接种丛枝菌根（AM）真菌对植物DBP污染的影响

在温室进行盆栽试验,以DBP(邻苯二甲酸二丁酯)为研究对象,以豇豆(Pigna sinensis)为宿主植物,分别接种AM真菌Acaulospora lavis(光壁无梗球囊霉)和Glomus caledonium(苏格兰球囊霉),观察接种AM真菌对植物DBP污染变化的影响．结果表明,接种AM真菌明显控制了植物对DBP的吸收,降低了植物体内DBP的浓度．在低浓度DBP(4mg.kg^-1)土壤处理时,接种Acaulospora lavis和Glomus caledo-nium分别使植物体内DBP浓度比不接种(CK)最大下降32．7％和21．7％;高浓度DBP(100mg.kg^-1)土壤处理时,分别比CK最大下降30．5％和30．0％．接种AM真菌还抑制了DBP由植物根系向地上部的迁移,对减轻植物遭受DBP污染起了一定的作用．     

丛枝菌根真菌对烟草钾素吸收的研究

在盆栽条件下研究了接种AM真菌Glomus mosseae对烤烟K素吸收的影响。结果表明,施钾量与AM真菌对烤烟K累积量与分配有明显的影响,对烤烟不同时期生长、不同叶位含钾量影响显著(P<0．01)。菌根菌与施钾量二者组合对烤烟烟叶含钾量的提高作用在生长中、后期最为显著,接种AM真菌对烤烟整株烟叶含钾量的影响,主要是提高了上、中、下位叶的含钾量,进而提高了整株烟叶的含钾量;接种AM真菌提高了钾在叶中的分配比例。降低了K在茎中的分配比例,比较而言,在0．75～1．125g·kg^-1施钾(K2O)水平,AM真菌对烤烟K的累积与分配及含钾量的作用效果最佳。     

Studies on the Relationship Between Photosynthesis and Nitrogen Fixation in the Symbiotic System of Soybean and Nodule Bacteria( Rhizobium)

The relationship between photosynthesis of soybean and nitrogen fixation of the nodules by symbiotic Rhizobium was studied. The contents of total nitrogen and chlorophyll, the net photosynthetic rate and seed yield of soybean were much higher in either hydroponically cultivated or field-grown plants inoculated with Rhizobium B16–11C (or Clark nodulating strain) than in control without inoculation (or Clark non-nodulating strain). These results show that the symbiotic nitrogen fixation has a beneficial effect on photosynthesis. However, the effect was indirect and slow so that there was no change in the net photosynthetic rate of the soybean leaves until three clays after removing nodules from the soybean roots. On the other hand, decreasing the photosynthate supply to nodule by shade, defoliation or shoot removal of the soybean, the nodule activity declined significantly. It seems that the supply of photosynthate to root nodule is a limiting factor for symbiotic nitrogen fixation. However, the diurnal variation of the nodule activity could not be explained by change neither in the contents of sucrose and starch of the root nodules nor in the ambient temperature. The factor controlling the diurnal variation deserves further study.     

食真菌线虫与真菌的相互作用及其对土壤氮素矿化的影响

采用悉生培养微缩体系,探讨了食真菌线虫(燕麦真滑刃线虫)与两种真菌(真菌Ⅰ：外皮毛霉和真菌Ⅱ：丛梗孢科的一种)间的相互作用及其对土壤氮素矿化的影响．结果表明,燕麦真滑刃线虫在取食两种真菌时表现为在真菌Ⅱ上的生长优于真菌Ⅰ,两个处理的线虫数达到显著差异．食真菌线虫对真菌的取食活动促进了真菌的增殖：接种真菌Ⅱ加线虫处理中真菌Ⅱ的数量是仅接种真菌Ⅱ处理的2．5～3．5倍,增幅在整个培养期基本稳定;而接种真菌Ⅰ加线虫处理中真菌Ⅰ的数量在培养前期(10d)是仅接种真菌Ⅰ处理的1．1～2．0倍。之后增幅达5．0～5．7倍．线虫和真菌的生长及增殖基本保持同步．食真菌线虫与真菌的相互作用显著提高了土壤铵态氮和矿质态氮含量,促进了土壤氮的矿化,其中线虫与真菌Ⅰ的相互作用对提高矿质态氮含量的贡献显著大于线虫与真菌Ⅱ的相互作用。     

接种AM真菌对PAEs污染土壤中微生物和酶活性的影响

土壤灭菌条件下 ,添加 5 0mg·kg-1DEHP和 5 0mg·kg-1DBP ,在温室进行盆栽试验 ,观察土壤施加DEHP与DBP和接种AM真菌 (Acaulosporalavis,光壁无梗球囊霉 ,菌号 :34)后菌根际 (简称A)、菌丝际 (简称B)和常规土 (简称C)中土壤微生物和部分土壤酶活性的变化。结果表明 ,土壤施加DEHP和DBP后 ,A、B和C层土中土壤微生物数量和土壤酶含量下降 ;接种AM真菌后 ,受AM直接影响的A和B层土中细菌、放线菌和真菌数量比不接种低 ,而C层土中三菌数量比不接种高 ;A和B层土中中性磷酸酶和脲酶含量下降 ,脱氢酶含量在A、C层土中下降 ,在B层土中稍有增加 ,AM对土壤脱氢酶活性影响不大。接种AM真菌没有降低DEHP和DBP对土壤微生物生长和土壤酶活性不利影响的程度     

Interaction between growth regulator and polyamine effects on membrane permeability

Kinetin and tomatin increase betacyanin efflux from discs of beetroot tissue, whereas gibberellic acid and ethrel decrease the efflux. Auxins and chloroethanol have no effect. Spermine enhances the inhibitory effect of gibberellic acid and ethrel, and reverses the effect of kinetin and tomatin.