鸡Zong凝集素的分离纯化与性质研究

鸡Ｚｏｎｇ菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析３个主要步骤纯化得到一种凝集素（ＴＡＬ）。纯化的ＴＡＬ在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。ＴＡＬ的分子量为８９．４ｋＤ,亚基分子量为３８ｋＤ和５１ｋＤ,提示ＴＡＬ分子由两个不同亚基组成。ＴＡＬ具有供血动物种属专一性,使Ｗｉｓｔａｒ大鼠红细胞凝集所需ＴＡＬ最     

鳞毛蕨凝集素的分离纯化与性质

阔鳞鳞毛蕨[Dryopteris championi(Benth.)C.CHr.]的叶片组织经硫酸铵沉淀、活性炭柱及DEAE-SepharoseFF离子交换柱等步骤纯化得到鳞毛蕨凝集素(Dryopteris championi lectin)。纯化的鳞毛蕨凝集素(DCL)在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示1条蛋白质着色带。其中性糖含量高,氨基酸组成中队(苯丙氨酸)含量最高,His(组氨酸)含量最低。对不同动物红细胞及人的不同血型红细胞的凝集有专一性。其凝血活性能被果糖、半乳糖和N-乙酰半乳糖胺所抑制,对温度变化较不敏感,Mn^2 和Mg2 在一定浓度范围能激活其为EDTA-Na2所抑制的活性。     

洋紫荆凝集素的分离纯化和性质

利用酸化处理的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ亲和柱从洋紫荆种子中分离纯化出了洋紫荆凝集素（ＢＶＬ）,其比活性比抽提液提高了１５９倍,活力回收率为４９．０％。ＢＶＬ分子量为８１０００,由两个相同的亚基组成。等电聚焦凝胶电注测得其等电点为４．９５。其紫外吸收高峰在２７６ｎｍ处。ＢＶＬ具一定的的热稳定性和酸碱稳定性。Ｎ－乙酰－Ｄ氨基半乳能强烈地抑制ＢＶＬ对兔红细胞的凝集作用。乳糖、半乳糖也有较强的抑制定性。Ｎ     

洋紫荆凝集素的分离纯化和性质

利用酸化处理的Sepharose 6B 亲和柱从洋紫荆种子中分离纯化出了洋紫荆凝集素(BVL),其比活性比抽提液提高了159倍,活力回收率为49.0%。BVL分子量为81 000,由两个相同的亚基组成。等电聚焦凝胶电泳测得其等电点为4.95。其紫外吸收高峰在276 nm处。BVL具一定的热稳定性和酸碱稳定性。N-乙酰-D-氨基半乳糖能强烈地抑制BVL对兔红细胞的凝集作用,乳糖、半乳糖也有较强的抑制作用。     

狗脊蕨凝集素的分离纯化与部分性质

狗脊蕨叶组织经磷酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose(fast flow)离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析,获得具有凝集活性的狗脊蕨凝集素.用PAGE和SDS-PAGE检测均显示1条蛋白带,提示狗脊蕨凝集素分子只有一个亚基.Sephadex G-100层析和SDS-PAGE测得其相对分子质量在20 kD左右.该凝集素对红细胞有种属专一性,其凝集活性可被木糖、卵粘蛋白所抑制.狗脊蕨凝集素对热相当稳定,以100℃温度加热10 min仍保存部分凝集活性.凝集活性不依赖于金属离子Mg2 、Ca2 、Mn2 .它的中性糖含量为3.1%,Phe含量较高,His含量较低,不含Tyr和Pro.     

龙须藤凝集素的分离纯化和性质

利用酸化处理的Sepharose 6B亲和柱从龙须藤（Bauhinia championii)种子中分离纯化出龙须藤凝集素（BCL）,其比活性比抽提液提高了57倍,活力回收率达63．3％。经Sphadex G-100测得BCL的分子量为64000,SDS－PAGE的结果表明BCL由两个相同的亚基组成,亚基分子量为32000,等电聚集凝胶电泳测得其等电点为4．70。BCL是一种糖蛋白,其中性糖含量为3．0％。N－乙酰－D－氨基半乳糖能强烈地抑制BCL对兔红细胞的凝集作用。     

桑寄生凝集素的纯化及部分性质研究

利用DEAE一纤维素柱盐离子浓度梯度洗脱,再经猪胃粘蛋白-Sepharose 4 B亲和柱可以从中药桑寄生中分离纯化出桑寄生凝集素。经pH8.9,Tris-EDTAN_2a-borate的PACE和SDS-PAGE测定均呈现单一蛋白带,测得其分子量为67 500,中性糖含量为14.6％,DNS法测得N-末端氨基酸为缬氨酸。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含酸性氨基酸,而碱性氨基酸含量较少,不含精氨酸。当凝集素浓度为15.6μg/mL时,即可凝集兔红细胞,而对人的A、B、O型血细胞,凝集素浓度高达1000μg/mL,也不发生凝集反应。Gal、GalNAc、山梨糖、岩藻糖和松三糖对凝集兔红细胞的能力有抑制作用。桑寄生凝集素是一种促有丝分裂原,对猪血淋巴细胞的转化率达78％,细胞分裂比率为11.2％。     

鸡菌的液体培养及其多糖物质研究

采用不同的液体培养基,探索了鸡堆放(土从)菌(Termitomyces albuminosus)人工培养的最适条件,多糖形成的动态变化,并对鸡(土从)多糖进行了分离、纯化,及其免疫活性测定。结果表明:鸡(土从)菌从碳源玉米淀粉,氮源花生蛋白,生长因子麸皮浸汁,pH4.7,25℃为最适生长条件;Sephadex-G100分离多糖出现两个峰;鸡(土从)多糖作为刺激原对人淋巴细胞转化有促进作用。     

常山凝集素的分离纯化及其性质研究

 本文采用分子筛层析和离子交换技术,从植物常山(Dichroa febrifuga Lour)的鲜叶中,分离纯化出一种新的凝集素,定名为常山凝集素(DFL)。并对其理化性质进行了鉴定:测得其亚基分子量为37,000道尔顿;等电点为4.2。DFL是一种糖蛋白,糖含量为2.8％。DNS-CI法测得其肽链的N-末端为L-缬氨酸。本文还对其糖专一性、不同动物红细胞的凝集专一性,以及对猪精子和某些肿瘤细胞的凝集活性等生物学性质进行了研究。     

甘薯凝集素的提取及性质研究

抗蔓割病甘薯的叶片组织浸取液,经硫酸铵分级沉淀,甲壳素柱层析及葡聚糖凝胶过滤得到一种在PAGE或SDS－PAGE上均呈现单一蛋白带的甘薯凝集素。该凝集素没有血型专一性及被测动物红细胞专一性,其凝集活性可被N－乙酰葡萄糖胺或岩藻糖所抑制。甘薯凝集素在75℃加热10min,即丧失全部凝集活性,其凝集活性依赖于Ca^2 和Mg^2 ,Mn^2 则无作用。经Sephadex G-100和SDS－PAGE测定,凝集素相对分子质量为63000,中性糖含量为6.21%,该凝集素对蔓割病菌有抑制作用,是一种酸性糖蛋白。     

粗柄鸡菌菌丝体培养和无性繁殖过程研究初报

鸡菌属菌物是一类具有商业前景的食物蕈菌。对Ｔｅｒｍｉｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕｍｉｎｏｓｕｓ（Ｂｅｒｋ）Ｈｅｉｍ进行了广泛研究,其它种类的研究仅见于Ｔ．ｆｕｌｇｉｎｏｓｕｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｈｅｉｍ。笔者首次对Ｔ．ｒｏｂｕｓｔｕｓ（Ｂｅｅｌｉ）Ｈｅｉｍ粗柄鸡菌进行了纯培养研究,其菌丝体生长所需的碳源以麦芽糖为佳,葡萄糖、蔗糖次之;氮源以蛋白胨、酵母粉较好;天然材料的热水提取物,如松针、蚁巢圃、马铃薯、平菇出菇废料、蚕豆的混合物能促进菌丝生长;培养基在ｐＨ４．５左右最佳,可用０．０５％的柠檬酸调节。菌丝体纯培养很容易形成大量分生孢子和小白球菌,表明小白球菌是粗柄鸡菌菌丝体无性繁殖过程的一个阶段。     

紫藤凝集素的分离纯化及理化性质研究

用常规方法处理的ＤＥＡＥ离子交换纤维素柱,通过线性离子强度梯度洗脱,从紫藤种子的蛋白粗提液中得到一定纯度的紫藤凝集素。纯化的凝集素凝集兔红血球的比活提高４０倍,总活力回收率为１９．２％。紫藤凝集素的分子量经ＰＡＧＥ鉴定为２０５ｋｄ,是由两种亚基构成的四聚体,这两种亚基各有２个,分子量ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定分别为７７６００ｄ和２５１００ｄ。紫藤凝集素是一种糖蛋白,等电点约为４．６０。它可凝集人的各种血     

厚果鸡血藤凝集素的纯化及性质

从厚果鸡血藤（ＭｉｌｅｔｉａｐａｃｈｙｃａｒｐａＢｅｎｔｈ．）的种子中分离纯化出一种具强凝集活性和强促有丝分裂原的凝集素。种子经磨粉、浸取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳＰＡＧＥ上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得分子量为４０７００,ＳＤＳＰＡＧＥ测得亚基分子量为１９８００;含有１７８％的中性糖。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ和Ｌｅｕ,同时含有４个Ｔｒｐ,当凝集素浓度为０．４８μｇ／ｍＬ时,即可凝集兔红细胞;对人Ａ、Ｂ和Ｏ型血细胞都能发生凝集,故无血型专一性;其凝集兔红细胞的凝集活性,不能被常见糖类抑制,但可被甲状腺球蛋白、胃粘蛋白和卵粘蛋白所抑制;其凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋的存在,但Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋对其凝集活性全无促进作用;该凝集素是一种强促有丝分裂原,对人外围血中淋巴细胞的转化率高达８４３％,细胞分裂比率可达７８％。     

泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)血淋巴液凝集素的分离纯化及其性质研究

泥蚶是一种重要的海产经济贝类,其血淋巴液经硫酸铵二步分级沉淀后,再经Sephadex G- 100凝胶过滤和Sepharose 4B亲和层析纯化制得泥蚶血淋巴液凝集素。经测定,该凝集素分子量约为123Kda,为两个亚基的蛋白质,其相对分子量分别为15 KDa和16 KDa,分子中含5．02％的糖。在氨基酸组成中,天门冬氨酸(Asp)含量最高,其次是谷氨酸(Glu)和组氨酸(His),不含蛋氨酸(Met)。泥蚶血淋巴液凝集素对多种天然或经酶修饰的人或动物红细胞具有不同的凝集作用,其中对兔红细胞的凝集活性最大。半乳糖和乳糖对其凝集活性具有抑制作用。凝集活性依赖于Ca2 ,在pH7．0较稳定,热稳定性不高,在30℃-70℃时凝集效价由原来的25下降为21,当温度超过80℃以后,凝血活性完全丧失。     

黑色菜豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化和性质

黑色菜豆(phaseolussp.)种子中含有对人A型血专一凝集的凝集素。用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂和Sephadex G-200凝胶过滤,可以纯化这种凝集素。纯化的凝集素在pH8.9,Tris-EDTANa_2-borate缓冲液的PAGE中,呈现单一蛋白带;酚-硫酸法测得总糖含量为3.22％。在SDS-PAGE中发现其分子由两种亚基所组成,亚基分子量分别为38,000和35,000。当凝集素浓度分别为0.98μg/ml和1.95μg/ml时能强烈地凝集人A型和AB型血细胞。在凝集素浓度高达500μg/ml时,B型血细胞能发生弱凝集反应,但对O型血和兔红细胞则完全不发生凝集反应。其凝集活性可被GalNAC、L-Fuc、猪甲状腺球蛋白和卵粘蛋白所抑制。该凝集素对人外周血中淋巴细胞的转化率达80％,细胞分裂比率高达37.1％;氨基组成分析表明,凝集素分子中Asp和Glu含量较高,而cys和Met含量很低。     

牛舌菌凝集素的分离、性质及细胞凝集活性

牛舌菌子实体经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和Sephadex G-100柱层析纯化得到牛舌菌凝集素(Fistulina hepatica Lectin,FHL)。FHL经PAGE显示单一条带,SDSPAGE测得其亚基相对分子质量为63．6KD,Sephadex G-100凝胶过滤测得相对分子质量为63KD,FHL中性糖含量为9．7％,IEF-PAGE测得其等电点为5．36。该凝集素对人的A、B、AB和O型血细胞具有凝集作用,对兔红细胞的凝集作用可被乳糖和N-乙酰半乳糖胺所抑制。氨基酸组成分析表明,FHL含有16种氨基酸,其中天冬氨酸和谷氨酸含量较高。FHL对热、酸具有一定的稳定性,经60℃处理10min,仍有较高的活性,在pH3．0～6．0范围内较稳定,但在碱性pH环境中(pH7．0～10．8),FHL的凝集活性下降明显。β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。抗肿瘤活性测定表明,FHL对HeLa细胞具有明显抑制作用。