诱发玉米幼胚愈伤组织及其再生植株耐盐性变异的研究

本文以玉米获白×Mo17单交种的幼胚为材料。以10g/1NaCl为起始浓度,利用逐步提高NaCl浓度的方法,筛选出耐20g/1NaCl的细胞变异体,并获得再生植株。同时对影响耐盐变异系筛选、分化的 因素进行了研究。讨论了愈伤组织变异体及其再生植株的稳定性。     

运用多步正选择系统筛选木槿耐盐变异体（简报）

采用多步正选择系统,建立起木槿耐盐变异体筛选体系并获得耐盐细胞系和再生植株（分化率高达78％）,分化苗能耐盐。耐盐细胞的体积减小,积累的Na 和K 含量都相对较高,而脯氨酸则与对照差异不大。     

药蒲公英(Taraxacum officinale Weber)耐1.5% NaCl变异体的筛选及特性分析

为提高药蒲公英的耐盐性, 用20~30 d大小的药蒲公英叶片诱导愈伤, 获得的愈伤以NaCl作为选择因子, 用直接筛选的方法, 每3周进行一次继代培养, 经3个月继代筛选获得了耐1.5% NaCl的药蒲公英愈伤组织, 将耐1.5% NaCl的药蒲公英愈伤组织接种在分化培养基上分化出芽, 之后将再生芽转接到生根培养基中进行生根培养, 经4个月得到了12株耐1.5% NaCl的药蒲公英再生植株。与野生型相比, 耐盐植株叶片宽大、叶柄粗短、叶表面覆盖白色细毛, 根粗壮较短, 花茎中部具2 cm左右的苞叶。RAPD(Random amplified polymorphic DNA , 随机扩增的多态性DNA)和SDS-PAGE检测表明, 耐盐植株与对照植株在DNA及蛋白水平上均存在明显差异。1.5% NaCl处理后, 与普通再生植株相比, 耐盐株系的抗氧化酶活性明显提高, 脯氨酸含量上升幅度更为显著, 而丙二醛(MDA)含量降低, 其主要药用成分黄酮的含量显著增加。这些结果说明耐盐植株的抗氧化防御能力明显增强。以上结果表明耐1.5% NaCl的药蒲公英再生植株为耐1.5% NaCl药蒲公英变异体, 这些耐盐变异体有望成为抗盐耐海水蔬菜家族的新成员。同时, 这些耐盐变异体植株比普通植株具有更高的医用商业价值。耐1.5% NaCl的药蒲公英再生变异体遗传稳定性的研究正在进行中。     

药蒲公英(Taraxacum officinale Weber)耐1.5% NaCl变异体的筛选及特性分析

为提高药蒲公英的耐盐性, 用20~30 d大小的药蒲公英叶片诱导愈伤, 获得的愈伤以NaCl作为选择因子, 用直接筛选的方法, 每3周进行一次继代培养, 经3个月继代筛选获得了耐1.5% NaCl的药蒲公英愈伤组织, 将耐1.5% NaCl的药蒲公英愈伤组织接种在分化培养基上分化出芽, 之后将再生芽转接到生根培养基中进行生根培养, 经4个月得到了12株耐1.5% NaCl的药蒲公英再生植株。与野生型相比, 耐盐植株叶片宽大、叶柄粗短、叶表面覆盖白色细毛, 根粗壮较短, 花茎中部具2 cm左右的苞叶。RAPD(Random amplified polymorphic DNA , 随机扩增的多态性DNA)和SDS-PAGE检测表明, 耐盐植株与对照植株在DNA及蛋白水平上均存在明显差异。1.5% NaCl处理后, 与普通再生植株相比, 耐盐株系的抗氧化酶活性明显提高, 脯氨酸含量上升幅度更为显著, 而丙二醛(MDA)含量降低, 其主要药用成分黄酮的含量显著增加。这些结果说明耐盐植株的抗氧化防御能力明显增强。以上结果表明耐1.5% NaCl的药蒲公英再生植株为耐1.5% NaCl药蒲公英变异体, 这些耐盐变异体有望成为抗盐耐海水蔬菜家族的新成员。同时, 这些耐盐变异体植株比普通植株具有更高的医用商业价值。耐1.5% NaCl的药蒲公英再生变异体遗传稳定性的研究正在进行中。     

利用组织培养选择烟草耐盐愈伤组织变异体并分化出再生植株

烟草(品种革新一号)叶片为外植体,直接置入含0.5%NaCl的修改MS培养基中,诱发产生耐盐的愈伤组织。然后采取逐步提高NaCl浓度的措施,分别获得耐0.5%、1.0%、1.5%及2.0%NaCl细胞系。耐盐细胞系在无盐条件下,生长9—11代后仍保持其耐盐性。从各个耐盐细胞系均分别获得再生苗。耐2.0%NaCl的04—9细胞系共得到15株再生植株,叶片狭长、多锯齿、并具有较多的花茎,多数花粉粒畸形,经过人工授粉获得少量种子。04-9变异型再生植株水培于含有1.0—2.0%NaCl的Hogland溶液中生长85天,仍然存活。原始型愈伤组织的细胞呈不规则椭圆形,耐盐细胞系的细胞均近似圆形;耐盐浓度愈高则细胞愈小。耐盐细胞系愈伤组织的叶绿素含量随耐盐浓度增高而增加;渗透势则随耐盐水平提高而降低。耐2.0%NaCl细胞系04—9愈伤组织内脯氨酸含量高40.7倍,其再生植株叶片内的脯氨酸含量亦较原始型增加两倍。耐2.0%NaCl细胞系再生植株的幼年与成年叶片的过氧化物同工酶的酶谱与原始型均有显著差别。以上试验结果均说明耐2.0%NaCl细胞系04—9及其再生植株是一个耐盐变异体。     

烟草耐盐愈伤组织变异体对盐渍的适应性

用组织培养及逐步增加,NaCl浓度的方法,筛选出烟草耐盐愈伤组织变异体。能耐盐(2％ NaCl)的愈伤组织在2％ NaCl中继代29次,再移入无盐培养基中培养11和20代后不能保持提高的耐盐性,分别退化到只耐1.5％与1.0％ NaCl的水平。耐2％ NaCl愈伤组织产生的再生植株自交后代,其萌发种子、幼苗及成长植株均未能表现出耐盐性,说明用选择胁迫方法所筛选出的耐盐细胞系,其耐盐性的提高属于生理适应性。     

利用组织培养研究植物耐盐机理与筛选耐盐突变体的进展

概要介绍近年来利用组织培养研究植物耐盐的机理,培养的细胞与整株植物之间耐盐的相关性,列举国内外从17种植物筛选出的耐盐细胞系及其再生植株的研究结果,讨论了选择细胞的耐盐性在再生植株表达的问题,并展望这项研究工作的前景。     

疣粒野生稻体细胞超低温保藏与原生质体培养体系的确立

疣粒野生稻是原产于我国的 3种野生稻之一 .疣粒野生稻具有优异特性但极难培养 .从疣粒野生稻的幼穗诱导出无再生能力的愈伤组织 ,经过继代培养和超低温保藏后获得了胚性愈伤组织 ,建立了悬浮细胞系 ,分离出原生质体并再生出植株 .人工接种鉴定表明 ,再生植株的强抗病性没有改变 ,但获得了培养力高的特性 .研究结果证明了植物愈伤组织的超低温保藏可能是获得胚性细胞系的一种新途径 .原生质体再生体系的确立是应用原生质体融合技术转移疣粒野生稻有用基因的重要一步 .     

提高小麦原生质体再生植株频率的研究

从小麦徐州211的成熟种子诱导愈伤组织,建立了胚性悬浮细胞系。酶解悬浮细胞获得原生质体,用含o．8％琼脂糖的改良Ms培葬基进行琼脂糖珠培养,再生细胞分裂,并形成愈伤组织。诱导再生愈伤组织分化．得到了完整的再生植株。原生质体培养两周后,加入降渗培养液可促进克隆的形成。在分化培养基中,低浓度蔗糖可提高植株分化率。高浓度的激动索和玉米素对芽的分化有效并能抑制愈伤化。再生愈伤组织诱导分化时期的早晚影响植林分化频率。     

‘哲引3号’ב北京杨’杂交子代悬浮细胞系的建立和植株再生

采用“固—液—液—固”培养方法,分别以［‘哲引3号杨’（Populus pseudo-simonii×P.nigra ‘Zhenyin3#’）ב北京杨’（P.×beijingensis）］杂交子代的种子、子叶和下胚轴为材料,开展了多个杂交子代悬浮细胞系建立和培养研究,结果显示：（1）不同基因型的种子愈伤诱导率差异显著,不同基因型的子叶、下胚轴愈伤诱导率差异不显著;不同基因型的初始悬浮细胞系密实体积差异均显著。（2）采用静置分层和细胞筛双层过滤结合的方法能把游离胚性细胞从初始悬浮细胞系中分离出来,不同基因型来源的游离胚性细胞数量差异不显著。（3）种子和子叶来源的胚性悬浮细胞系能在不含NH+4的液体培养基中诱导出球形愈伤,这些愈伤薄片能在含有CPPU的分化培养基上实现植株再生,最后共获得了20个基因型的来自种子球形愈伤的再生植株和另外20个基因型的来自子叶球形愈伤的再生植株。     

拟南芥悬浮细胞系的玻璃化法超低温保存

悬浮培养细胞系是植物生理生化研究的好材料之一。为了保持细胞系的遗传稳定性,需要采用超低温保存技术。玻璃化法是一种不用程序降温仪的超低温保存技术。本文报道了从模式植物拟南芥建立悬浮细胞系并对其进行玻璃化法超低温研究。细胞经过合理的预培养处理和保护剂处理,直接投入液氮贮存。复温后的细胞能恢复生长,恢复生长的细胞保持着植株再生能力。国外,拟南芥悬浮细胞系的程序降温法保存和包埋脱水法保存已经报道,玻璃化法保存尚未见报道。     

应用组织与细胞培养技术筛选耐盐突变体的进展

本文概要介绍了近年来利用植物组织和细胞培养研究培养的细胞与整株植物之间的耐盐相关性,以及从各种植物筛选出耐盐细胞系及其再生植株的研究结果,并对这项研究前景进行了展望。     

棉花原生质体再生小植株

80年代植物原生质体培养取得突破性进展,水稻、小麦、玉米和大豆等重要农作物先后获得再生植株。但棉花原生质体培养至今仍停留在细胞分裂和形成细胞团阶段,原生质体培养得到愈伤组织仅有一例。本文首次报道从陆地棉柯字棉312品种的细胞悬浮培养系原生质体培养获得再生小植株的试验结果。     

枸杞花药愈伤组织悬浮培养条件下胚状体发生与植株再生

采用枸杞花药进行离体培养,建立细胞系,诱导植株再生,结果在含不同激素的4种培养基上都诱导出了愈伤组织,诱导率为17%～169%。愈伤组织在MS 2,4D05mg/L的固体培养基上,经2～3次培养后,获颗粒状胚性愈伤组织,颗粒状胚性愈伤组织转入含相同成分的液体培养基中进行振荡培养,24h后获得大量单细胞。单细胞液经过多次继代培养,建立起稳定的悬浮系。悬浮细胞在液体培养基中培养8～10d可获得含有大量胚状体的愈伤组织块,收集悬浮培养物转移到MS 6BA02mg/L的固体培养基上,胚状体能够萌发形成大量绿色小芽,小芽转入生根培养基(MS NAA02mg/L)中20d后得到完整植株。植株根尖细胞经细胞学鉴定为单倍体。     

苹果胚性细胞原生质体培养获得再生新梢

苹果原生质体再生愈伤组织已有报道,但再生植株的报道仅有一例。以往的工作,多采用茎、叶、叶愈伤组织或悬浮培养物分高原生质体,培养成愈伤组织后不易发生器官分化。本文首次报道从新红星苹果胚珠愈伤组织建立的胚性悬浮细胞系分离原生质体,经培养获得无根绿苗的结果。 1.材料及悬浮细胞系的建立试材为中国农科院果树所果园内14年生新红星苹     

中药半夏单细胞悬浮培养、胚胎发生及植株再生

以悬浮细胞作为靶标材料,在COLC诱导获得多倍性细胞后,经诱导分化和再生形成纯合的多倍体植株,是一条可行且高效的多倍体诱导途径。但该途径的前提是成熟、高效的单细胞悬浮培养和植株再生体系建立。鉴于此,在获得优良胚性愈伤组织的基础上,对半夏细胞悬浮培养、细胞分化及再生植株所涉及的关键问题及其影响因素进行研究,结果获得了以近圆形细胞为主的高质量单细胞悬浮系,细胞生长曲线呈典型的"S"型,细胞密度可达2.0×106以上,活细胞率可达86.80%,近圆形细胞率可达82.64%;明确了其细胞胚胎发生的两种可能途径,并通过诱导细胞分化,成功获得了愈伤组织增殖,最终实现了高效的植株再生,愈伤分化率可达94.46%,丛生芽诱导率可达337.42%,幼芽成苗率可达90.75%,幼苗生根率可达95.40%,移栽成活率可达98.83%,从而建立了高效的半夏悬浮细胞培养和植株再生体系,为后续的基于单细胞水平的半夏多倍体诱导研究提供技术参考和科学依据。     

八倍体小黑麦耐盐细胞系产生的遗传机制

实验选用来源于八倍体小黑麦（×ＴｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅＷｉｔｍａｃｋ）杂种一代Ｂ、Ｃ和原种Ｆ三个品系的成对单倍体和双倍体细胞系,在１％、１．５％和２％ＮａＣｌ水平进行耐盐变异体筛选及其发生机制研究。实验和分析结果表明,未经筛选的细胞系由三类细胞组成,第一类是占大多数没有任何适盐性的细胞,第二类是具有一定适盐性的非变异体细胞,可在继代筛选中被淘汰,第三类细胞是变异体细胞;第二类细胞在杂种材料细胞系中所占比例少于原种细胞系,故杂种细胞较易筛选到耐盐变异体;比较三个级别筛选的变异体频率发现,后一级筛选的变异必须以前一级筛选的变异为基础,即耐盐变异体发生的遗传机制是基因扩增;双倍体细胞中正常同源染色体对基因扩增变异的表达有干扰作用,这种干扰因材料不同在各级筛选中呈现不稳定状态。     

番茄耐盐体细胞变异体的离体筛选

以上海主要栽培番茄品种“鲜丰”的下胚轴作为外植体诱导愈伤组织,用NaCl进行直接高盐胁迫和逐渐加大盐浓度胁迫筛选。研究结果表明,逐渐NaCl浓度胁迫筛选获得的耐盐性大多属生理适应性,直接高盐胁迫筛选才有可能获得真正的耐盐突变体。直接高盐胁迫筛选再生出的12株耐盐植株,在150mmol/L NaCl的盐胁迫下,幼苗的成活率可达66％,而未经胁迫筛选过的原始株成活率则为零。其中,2株耐盐突变株能正常开花、结果。其在盐胁迫培养基中芽体的生根率、鲜重及干重均显著高于原始株。     

水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究

从１２个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过ＭＳ培养基中２,４－Ｄ浓度的变换,研究了２,４－Ｄ对水稻愈伤组织生长的影响。用ＡＡ培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需３个月。由悬浮细胞系游离的原和一质体在改良的ＫＰＲ培养基中进行液体浅层培养,有１０个品种获得高植板率的细胞团。变换使用不同的分化培养基,从７个品种得到再生植株。实验重复性达到８０％,初步实现了水稻原生质体培养的程序化。     

生姜离体叶片愈伤组织悬浮细胞系建立与植株再生

以‘莱芜大姜’为试材,研究了生姜离体叶片愈伤组织的诱导以及细胞悬浮系建立与植株再生。结果表明,以生姜试管苗叶片为外植体,接种到MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的培养基上,可有效诱导出生长迅速、质地疏松的愈伤组织。将获得的愈伤组织接种到MS+0.15 mg/L 2,4-D+6.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的液体培养基上,25℃黑暗条件下震荡培养25-30 d,可建立分散性好、生长迅速的悬浮细胞系,细胞悬浮系培养的适宜参数为:初始接种量为1.0-1.5 g,继代培养的适宜间隔期为15 d,继代培养液体培养基更新比例为3/4。将悬浮细胞接种到固体培养基MS+0.2 mg/L NAA+10.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖上可获得再生植株。