新型脱毒肺炎链球菌溶血素衍生物激发的中和抗体提供抗感染和抗肺部损伤保护作用

<正>肺炎链球菌溶血素(PLY)是一种可产生毒性效应的导致肺炎球菌性肺炎的毒性因子。迄今,用适当的脱毒和免疫方法得到PLY候选疫苗是个具有挑战性的课题。经过适当脱毒并且保持其免疫原性的肺炎链球菌溶血素蛋白是一种理想的疫苗候选物。在本项研究中,作者评估了这种新的ply D1即     

用融合鞭毛蛋白的重组PspA鼻腔接种增强抗肺炎交叉保护免疫

<正>肺炎链球菌是一重要的呼吸道病原体,这种病原体在婴儿及老年人中引起较高的发病率和死亡率,尽管应用了抗生素和疫苗,但致死性肺炎球菌性疾病仍在流行。肺炎球菌表面蛋白A(PspA)是由所有肺炎链球菌产生的具有高度免疫原性的表面蛋白,能够激发抗致死性肺炎链球菌感染的保护性免     

猪源链球菌溶血性的检测*

用平板法和上清法检测了 1 9株猪源链球菌的溶血性 ,并通过加入还原剂或氧化剂分别作活化和抑制试验 ,对各菌株溶血素的性质做了初步鉴定。其中 8株猪链球菌 2型菌株在血平板上的溶血性较弱 ,仅为α溶血或弱 β溶血 ,但在THB和 5 %血清THB中都可产生很强的溶血性 ,其溶血性可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇所抑制 ,卵磷脂对其活性则没有影响 ,属于巯基活化类 (类SLO)溶血素。 9株马链球菌兽疫亚种菌株在血平板上呈显著的 β溶血 ,在不含血清THB中不能产生溶血性 ,在含血清的THB中可产生较强的     

猪源链球菌溶血性的检测

用平板法和上清法检测了19株猪源链球菌的溶血性,并通过加入还原剂或氧化剂分别作活化和抑制试验,对各菌株溶血素的性质做了初步鉴定,其中8株猪链球菌2型菌株在血平板上的溶血性较弱,仅为α溶血或弱β溶血,但在THB和5%血清THB中都可产生很强的溶血性,其溶血性可被还原剂活化,被氧化剂和胆固醇所抑制,卵磷脂对其活性则没有影响,属于巯基活化类（类SLO）溶血素,9株马链球菌兽疫亚种菌株在血平板上呈显的β溶血,在不含血清THB中不能产生溶血性,在含血清的THB中可产生较强的溶血性,其活性不被还原剂活化,不被氧化剂抑制,胆固醇能抑制大部分活性,卵磷脂则可全部抑制,属于类SLS溶血素,两株非典型兰氏C群链球菌菌株在血平板上呈显的β溶血,在THB中显示了非常强的溶血性,其活性不被还原剂活化,不被氧化剂抑制或卵磷脂抑制,但被胆固醇强烈抑制,属于非SLO,非SLS溶血素。     

羊源肠球菌溶血性的检测

[目的]了解羊源肠球菌溶血素的特性.[方法]以平板法、接触法、培养法、上清法及PCR法,对11株肠球菌临床分离株、30株健康羊分离株、肠球菌参考株和G群链球菌参考株进行了溶血性检测.[结果]接触法和上清法均不能检测到11株肠球菌临床分离株对兔血和羊血的溶血;平板法和培养法测得11株肠球菌临床分离株中,63.6%对兔血呈现β溶血,36.4%对羊血平板呈现α[溶血;基于检测cylA基因的PCR法,63.6%溶兔血菌能扩增出特异性条带,扩增产物序列与GenBank(L37110)中肠球菌同源性达99.3%.平板法测定30株健康羊分离株,初次分离培养53.3%对兔血β溶血,53.3%对羊血α溶血,43.3%对羊血β溶血,但二次传代后只有6%对兔血仍有溶血能力,且30株均不能检测到cylA.标准肠球菌对羊血平板有α溶血,而对兔血没有溶血性.[结论]提示肠球菌溶血性具有一定的溶血谱,不同检测方法检测的溶血情况不同;并且肠球菌溶血素必须在红细胞诱导下,通过细菌的生长繁殖产生;溶血素表型和基因型的检测不完全一致,对二者同时检测能提高肠球菌溶血素检测的准确性.     

猪呼吸道支原体溶血和产生过氧化氢活性测定

用红细胞美蓝着色试验和血琼脂覆盖技术测定猪呼吸道支原体产生过氧化氢和溶血活性,发现猪肺炎支原体(M．Hyopncumoniae)定型菌种 NCTC 10110以及J、201等晶系和我国分离的血清学上证实为同种的13株均产生过氧化氢,具有溶血活性。对于测定技术、影响因素和猪肺炎支原体的致病因子进进了讨论。     

肺炎链球菌溶血素的研究进展

肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,PLY)是肺炎链球菌的一种重要毒力因子,包含4个结构域,是胆固醇依赖性细胞溶血素(CDCs)的家族成员之一。PLY可广泛作用于宿主组织细胞,发挥细胞毒性作用。PLY可活化补体经典途径,诱导巨噬细胞和单核细胞等产生细胞因子,介导机体免疫应答过程。PLY是肺炎链球菌蛋白疫苗和相关小分子药物研制的重要靶标。本文就PLY的结构、功能及相关疫苗的最新研究进展进行综述。     

含有两种常见肺炎球菌蛋白的疫苗的安全与免疫原性

<正>背景:为了提供抗肺炎球菌性疾病的广谱保护,新型的含有保守的肺炎链球菌蛋白的疫苗正在被人们开发出来。该研究评价了含有肺炎链球菌蛋白肺炎链球菌溶血素类毒素(dply)和三联组氨酸蛋白的Pht D的4种配方制剂在学步儿童中的安全和免疫原性。方法:在这项Ⅱ期临床试验中,采取了多中心,观察者盲性,在捷克的学步儿童(12~23月龄的儿童)中进行。按照随机原则(1∶1∶1∶1∶1)接受     

以蛋白为基础的新型肺炎球菌疫苗的安全性、反应原性和免疫原性:Ⅰ/Ⅱ期随机临床研究

正背景:含有高度保守的肺炎球菌蛋白,例如肺炎链球菌溶血素类毒素(d Ply)和三联组氨酸蛋白D(Pht D)都正被开发出来以期提供抗肺炎球菌病的保护。这项研究评价了不同的含肺炎球菌蛋白的疫苗配方制剂的安全性、反应原性和免疫原性。试验在成人中进行。方法:在Ⅰ期双盲临床试验中,健康成人(18~40岁)被随机(1∶2∶2∶2∶2∶2∶2)分组,按2个     

两种基于肺炎球菌蛋白质的观察性疫苗的安全性、反应原性和免疫原性:来自婴儿Ⅱ期临床随机研究的结果

正接种含有肺炎球菌蛋白抗原诸如肺炎球菌溶血素类毒素(d Ply)和组氨酸-三联体蛋白D(Pht D)的配方制剂,可扩大抗肺炎链球菌的肺炎球菌结合疫苗(PCVs)血清型相关的保护作用。在欧洲进行的这项多中心、观察者盲的Ⅱ期临床试验(NCT01204658),评估了两种含10种血清型特异性多糖结合物的观察性疫苗PHi D-CV,其分别含有10μg或30μg的d Ply和Pht D。按1∶1∶1∶     

肺炎链球菌及其多糖菌苗

<正>一、一般情况 肺炎链球菌(Strep Pneuwmoniac)又名肺炎双球菌,为链球菌科的链球菌属中的一种。为1881年由巴斯德首先分离出,之后美国Stornberg也报导了。肺炎链球菌对成人主要引起大叶性肺炎,对婴幼儿引起中耳炎。它引起的肺炎是一种呼吸道常见的急性传染病,在化脓性脑脊髓膜炎的病原中,它也是首要的病原菌。在正常人的口腔及鼻咽腔内,此菌经常存在形成带菌状态。在机体抵抗力下降时引起疾病,尤其是老年人及免疫缺陷病人,脾切除及脾功能障碍的病人,对本菌的感受性更高。可能与患者体内补体替代途径中某种成分的缺陷有关。 肺炎链球菌为革兰氏阳性,有荚膜,矛头状的双球菌,常排成直的短链,在含血清的肉水中弥漫地散在生长。在血琼脂上的菌落呈光滑型,其周围有一狭窄溶血环?-hemolysis为相对厌氧菌。有些菌株从临床标本分离时需要二氧化碳,加热     

一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体,原核可溶性表达△Al46Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin,Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae,SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示,Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失,△Al46ply突变体构建成功,并实现了△Al46Ply的可溶性表达,得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示,△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。     

产气荚膜梭菌双圈溶血现象之培养及其毒素分析

通过实验介绍了产气荚膜梭菌在血琼脂平板上经数次传代培养后恢复毒力产生双圈溶血现象的培养方法,并阐明了导致该现象产生的两种毒素(θ毒素和α毒素)的作用机理。     

肺炎链球菌溶血素基因在E·coli中的克隆及表达

<正>肺炎链球菌是人类重要病原,是引起危及人类生命的肺炎,细菌血症和脑膜炎以及流行极广的中耳炎等的主要病原菌。然而,对这类微生物侵袭损伤宿主组织的精细机制还不太清楚。最近我们研究了肺炎球菌溶菌素在致病过程中起的作用。这种毒素是巯基激活的细胞溶素,能结合胆固醇到宿主细胞膜上。我们已经证明,用高纯度的肺炎     

新型肺炎链球菌疫苗研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是引发人类肺炎、中耳炎、脑膜炎的主要病原体。为了预防肺炎链球菌感染,人类已研制出了多种相关的疫苗。目前,常用23价肺炎球菌多糖疫苗(23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23)预防成人和2岁以上儿童肺炎链球菌的感染,用7价、10价、13价肺炎球菌结合疫苗来预防婴幼儿肺炎链球菌的感染。虽然荚膜多糖类疫苗能预防其所包含的肺炎链球菌血清型的感染,但非疫苗血清型的菌株还是可以在鼻咽部定植,并引起感染,而且结合疫苗研制工艺复杂、价格昂贵,在发展中国家使用还不普及。鉴于上述原因许多疫苗公司开始研发具有保护力强、价格低廉的新型疫苗。近年来,肺炎链球菌全细胞疫苗和肺炎链球菌纯化蛋白疫苗由于其血清非依赖性和较低的生产成本已成为人们关注的焦点。现对肺炎链球菌新型疫苗的研制及临床应用作一概述。     

一种防止肺炎链球菌和伤寒沙门菌致病的双价疫苗

<正>在发展中国家的儿童中,肺炎球菌和伤寒沙门菌感染是两种主要疾病,对于伤寒,已上市的Vi多糖疫苗在2岁以下的儿童中是无效的,虽然据调查Vi结合疫苗已经在临床试验中是有效的,但它们目前只适用于少数地区。肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗对儿童是非常有效的,但受到一些限制,包括成本高和有限的血清型覆盖率,我们先前已经表明,由肺炎链球菌融合蛋白PsaA和与多糖结合的肺炎链球菌     

肺炎球菌毒力因子Tu的免疫增强了抗肺炎链球菌感染的血清型非依赖性保护

疫苗接种是预防肺炎球菌疾病的一种有效方法。目前,肺炎链球菌上市疫苗包括多糖疫苗(PPSV)和结合疫苗(PCV),它们靶向以荚膜构成为基础的94种肺炎链球菌血清型中最常见的血清型。然而,据报道,PPSV对2岁以下儿童无效,并且PCV诱导了血清型替代,这意味着在广泛接种疫苗后肺炎链球菌菌群发生了变化,非疫苗血清型引起的侵袭性肺炎球菌病的案例增加。因此,开发新型肺炎球菌疫苗以替代或补充目前的基于多糖的疫苗十分必要。     

化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白的制备

生物信息分析化脓性链球菌溶血素O(streptolysin O,Slo)蛋白结构表明,Slo蛋白除含有由461氨基酸残基组成的溶血活性结构域Thiol_cytolysin外,在N端还有一跨膜结构域。利用pET101-GENE蛋白表达系统,成功构建出表达具有Slo活性重组蛋白的重组子,采用镍柱亲和层析分离技术,纯化目的蛋白;纯化蛋白SDS-PAGE检测分析表明,重组蛋白与预测的溶血活性结构域的分子量相一致;溶血实验显示,纯化重组蛋白具有溶血活性。以纯化的重组蛋白为免疫原,对大鼠进行4次免疫,所获得免疫血清经 Elisa检测,抗Slo血清效价达到 1 ∶12 800;Western blot检测猪链球菌、马链球菌和化脓性链球菌中的链球菌溶血素结果显示,抗Slo多克隆抗体仅能与化脓性链球菌溶血素O发生反应,表明研究制备的化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白抗原具有较好的特异性,所制备的抗原Slo 可用于进一步开发抗链球菌溶血素O(ASO)试剂盒。     

肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定

肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌 ,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难 ,本实验以寡核苷酸引物YH1 YH2、YH7 YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,通过改变各种反应条件 ,建立了这两种病原因子基因的PCR检测方法。用此方法对 2 0株肺炎链球菌标准菌株及 7株对照菌株进行了鉴定 ;其扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和和AccI进行酶切以确认扩增产物是否正确 ;用酚 氯仿抽提纯化的全细胞DNA对PCR方法的检测灵敏度进行了测定 ;并利用此方法对 2 8份临床标本分离物进行了鉴定。结果　所有 2 0株肺炎链球菌均可分别用引物YH1 YH2、YH7 YH8扩增出 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,而对照菌株均呈阴性 ;自溶素及溶血素基因的扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和AccI消化后产生的片段和预期的完全一致 ;两对产物均可从 10fg的全细胞DNA中扩增出目的DNA片段。所建立的两套PCR系统对 2 8份临床标本分离物进行鉴定 ,其中PCR阳性的 15份分离物经生化学特性检查被鉴定为肺炎链球菌。本试验所建立的两套PCR检测系统具有特异性强 ,灵敏度高及操作简单等优点 ,均可用于肺炎链球菌的鉴定。     

靶向鼻腔树突细胞的Flt3配体作佐剂激发抗致死性肺炎球菌性肺炎保护

<正>作者以往的研究证明以肺炎球菌表面蛋白A(PspA)为基础的疫苗含有编码Flt3配体(FL)基因的DNA质粒(pFL),这种DNA质粒可作为一种鼻腔佐剂,该疫苗能够预防肺炎链球菌在鼻腔的定植。在本项研究中,作者进一步研究了这种鼻腔投递疫