大肠杆菌噬菌体T4DNA连接酶基因(G30)无性繁殖系的建成和鉴定

通过限制性内切酶EcoRl 或 HindIII部分降解T₄．含胞嘧啶DNA,并把它们连接到运载体pBR 322上,转化大肠杆菌KH 802,获得了5000余株T4。基因无性繁殖系。用标记援救的遗传学试验,从中筛选出2株带有T4．基因30片段的无性繁殖系,其中pAM 3158带有比较完整的基因30。琼脂糖凝胶电泳表明该菌株中的杂合质粒DNA分子量比pBR 322的大,并日经 Hind Iil降解后可见一条新带。     

DNA连接酶、RNA连接酶、多核苷酸激酶和DNA聚合酶的同时分离纯化

本文报道从T4amN82噬菌体诱导的大肠杆菌E.coliB 同时分离和纯化四种酶的一般方法。先用硫酸链霉素沉淀把RNA连接酶,DNA连接酶与多核苷酸激酶和DNA聚合酶加以分离。然后用DEAE纤维素柱层析把DNA连接酶与RNA连接酶加以分离,用DEAE-Sephadex-A50柱层析把多核苷酸激酶与DNA聚合酶加以分离。本文着重介绍T4DNA聚合酶的分离纯化。     

PKCγ过表达诱导C3H10T1/2细胞生长失控的初探

通过DNA重组构建蛋白激酶C_γ(PKC_γ)亚类的重组质粒并经基因转染技术和DNA印迹、蛋白质印迹与PKC活性分析,获得了过表达PKC_γ的C₃H₁₀T_1/2细胞——NCP4.NCP4细胞生长速率提高,流式细胞光度术检测表明,NCP4细胞G1期百分率下降,S期和G2+M期百分率升高,与对照组细胞相比,血清依赖性明显下降,贴壁依赖性降低,在软琼脂中形成小集落,出现部分转化表型.进一步检测,首次观察到NCP4细胞中癌基因c-sis表达明显增强,这可能是NCP4细胞血清依赖性下降的分子机理之一.实验表明,在正常C₃H₁₀T_1/2细胞中PKC_γ的过表达可直接导致细胞增殖加速并可诱导出现部分转化特征.     

电击法介导的紫孢侧耳原生质体转化

使用基因脉冲导入仪成功地将糙皮侧耳DNA导入紫孢侧耳单核原生质体内,获得了具有"锁状联合”特征的双核转化菌株T₁,和T₂。转化率为8．2×10^-5,转化比为3．6％。酯酶同I酶分析结果表明,转化菌株除具有受体菌的酶带外,还存在供体菌的酶带,由此证明转化菌株确为紫孢侧耳和糙皮侧耳DNA重组的产物。转化菌株子实体形态也发生了变化。两菌株子实体均不释放孢子;T₁。菌柄中生,T₂成熟子实体菌盖中部易长出菌丝。     

原生质体融合技术构建糖化型啤酒酵母的研究

融合亲株B_6-5（Ala^-,Cys^-α）和T_3-4（His,Thr^-α）细胞于35％PEG（6000）－50mmol／LCaCl₂溶液,28℃下诱导融合30min,筛选出融合株,融合频率为6．2×10^-5。融合株细胞的体积和DNA含量均为两系株细胞之和。融合株有水解淀粉的能力,又有发酵度高于生产用酵母的特点。     

生长抑制激素基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酸三酯法化学合成生长抑制激素基因的两个DNA片段A_s2,A₂₃,退火聚合成平端双链后,插入到经Smal酶切的pUCl2质粒DNA中。通过抗性筛选,正性标记筛选以及酶切位点分析,分子杂交,序列分析,证实化学合成的生长抑制激素基因已在大肠杆菌JM83中无性繁殖。     

免疫微球在放射免疫分析及细胞识别中的应用

用 ⁶⁰Co辐照法聚合了直径1微米、大小均匀的羟基微球。用羟基微球制备了固相二抗,并成功地应用于T₃、T₄、TSH、β₂-MG和地高辛的RIA中。观察了用固相二抗识别人辅助T淋巴细胞的效果,结果与荧光标记二抗法的结果相符。     

三碘甲状腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)固相放射免疫联合测定法

三碘甲状腺原氨酸(T₃)、甲状腺素(T₄)固相放射免疫联合测定法,是将₃抗体涂布在塑料小球上,将T₄抗体涂布在塑料管上。这种联合测定主要解决了T₃抗体对T₄的交叉反应。本法能在同一试管内进行,只需50μl血清样品,90分钟反应,可同时精确地测出两种激素水平,它比以往单独测定T₃或T₄的PEG双抗法更精确、快速和简便。     

外源H2O2对盐碱胁迫下苹果矮化砧木幼苗生理特性的影响

以2年生苹果矮化砧木M9 T337为试材,采用盆栽试验法,设置浇灌清水(CK)和盐碱胁迫(0.1 mol/L NaCl+NaHCO₃溶液)+ 喷施5种浓度的H₂O₂ ［0(T₁)、0.2 mmol/L(T₂)、0.4 mmol/L(T₃)、0.6 mmol/L(T₄)、0.8 mmol/L(T₅)］ 处理,测定各处理叶片叶绿素含量、光合气体交换参数、渗透调节物质含量、抗氧化酶活性和细胞膜透性,并利用相关性与主成分分析进行综合评价,以探讨外源过氧化氢(H₂O₂)增强其盐碱耐性的生理机制。结果表明：(1)随着盐碱胁迫(T₁)的时间延长,M9 T337幼苗叶片叶绿素a(Chl a)含量、叶绿素b (Chl b)含量、叶绿素总量(Chl t)、净光合速率(P_n)、气孔导度(G_s)、蒸腾速率(T_r)、可溶性蛋白(SP)含量均呈逐渐下降趋势;胞间CO₂浓度(C_i)、可溶性总糖(TSS)含量、脯氨酸(Pro)含量、过氧化氢酶(CAT)活性、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性、相对电导率(REC)、丙二醛(MDA)含量均呈上升趋势;超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性均呈先升后降趋势。(2)与CK相比,盐碱胁迫+外源H₂O₂(T₂- T₅)处理后M9 T337幼苗叶片各指标均呈现不同幅度变化,且存在明显浓度效应,并以T₃(0.4 mmol/L H₂O₂)处理叶片的Chl a、Chl b、Chl t、SP和G_s降幅最小,C_i、REC、MDA升幅最小,TSS、Pro、APX升幅最大。(3)M9 T337幼苗叶片P_n与T_r、G_s、Chl a、Chl b、Chl t、SP、SOD、POD呈显著正相关,与C_i、MDA、CAT、APX、REC呈显著负相关。(4)综合评价表明,各处理对M9 T337幼苗叶片生理特性的效应依次为：CK>T₃>T₄>T₂>T₅>T₁。研究发现,叶面喷施适宜浓度H₂O₂可有效改善盐碱胁迫下M9 T337幼苗光合能力,显著提高抗氧化酶活性和渗透调节物质的含量,降低细胞膜透性,从而达到缓解盐碱胁迫的作用,并以0.4 mmol/L H₂O₂处理效果最佳。     

碱基上的氨臂对T4多核苷酸激酶催化的影响

寡聚核苷酸内部和5′末端含有的氨臂修饰胸苷酸,能够明显地影响T₄多核苷酸激酶催化的[γ- ³²P]ATP的转移反应.其转移效率为未修饰寡聚核苷酸的50%和2%.这种修饰的寡聚核苷酸对T₄ RNA连接酶催化的反应没有影响.     

酵母tRNAAla中修饰核苷酸T54,Ψ55的生物功能

酵母tRNA^Ala的3′半分子与一个11聚的DNA片段(5′GGAATCGAACC3′)杂交后用RNase H酶解,该酶能在Ψ₅₅的3′侧定点剪切,这样就制备得片段C₃₆-Ψ₅₅该片段经1～2个高碘酸氧化和β-消去得片段C₃₆-T₅₄和C₃₆-G₅₃机器合成了3个酵母tRNA^Ala的片段,分别j是片段C₅₆-A₇₆,U₅₅-A₇₆(以U替代Ψ₅₅)和U₅₄-A₇₆(以UU替代T₅₄Ψ₅₅).合成和制备的片段以适当的组合用T₄RNA连接酶连接,产物是酵母tRNAtRNA^Ala的3′半分子或其类似物.3种3′半分子或其类似物分别与天然5′半分子连接得重组天然酵母tRNA^Ala(tRNAr)和2个酵母tRNA^Ala的类似物:(1)tRNAa(以U替代Ψ₅₅),(2)tRNAb(以UU替代T₅₄Ψ₅₅).体外测定了它们的丙氨酸接受活力和参入活力,发现酵母tRNA^Ala的类似物tRNAa和tRNAb与天然重组酵母tRNA^Ala相比,它们的氨基酸接受活力分别降低了25%和55%,参入活力分别降低了35%和30%.说明酵母tRNA^Ala中的修饰核苷酸T₅₄和Ψ₅₅对该tRNA的功能有重要的影响.     

噬菌体T4诱导的脱氧核糖核酸(DNA)连接酶的分离和纯化

本文介绍一个从噬菌体T4诱导的大肠杆菌中纯化DNA连接酶的简法。这是从同一起始原料(噬菌体T4感染的大肠杆菌菌体)同时提纯三种酶(多核苷酸激酶,DNA连接酶及RNA连接酶)的步骤的一部分。这个方法包括以下几步：超声破碎菌体,抽提粗酶,用硫酸链霉素沉淀去除多核苷酸激酶和DNA．甩I)EAE纤素素(DE-52)柱层折将DNA建接酶与RNA连接酶分离开来,用磷酸纤维素(P-II)分步冼脱DNA连接酶,对在Tris-HCI,pH7.6中含50％甘油的缓冲液透析加以浓缩。最终得到高浓度(5500单位／毫升)和高纯度酶制品。     

β-溶血性链球菌的苏氨酸基因在大肠杆菌中的无性繁殖和表达

用限制性内切酶BamHI分别酶解β-溶血性链球菌染色体DNA和pBR322质粒DNA,经T4DNA连接酶连接后转化到受体菌大肠杆菌C600,采用插入钝化法筛选含β-溶血性链球菌DNA片段的Ap~rTc~s无性繁殖系,然后利用受体细胞从营养缺陷型转变为原养型的遗传学功能互补选择方法筛选到含苏氨酸基因的57-5号菌。对57-5号菌进行营养标记和抗药性标记测定,证实它带有苏氨酸基因。通过琼脂糖凝胶电泳分析和电子显微镜观察进一步证实57-5号菌所含的杂种质粒pFD201 DNA是由β-溶血性链球菌DNA和pBR322 DNA重组而成。     

Effect of experimentally induced thyrotoxicosis on oxidative energy metabolism in rat heart mitochondria

Treatment of rats with T₃ resulted in a significant decrease in body weight, while the heart weight increased. T₄ treatment had less marked effect on body weights but resulted in decreased heart weights. Serum T₄ levels decreased significantly with simultaneous increase of T₃ level following T₃ treatment, whereas with T₄ treatment, levels of both T₄ and T₃ increased in the serum. Low doses of T₃ (0.5 μg ) caused decrease in mitochondrial protein content while high dose of T₄ (1 μg), caused significant increase in mitochondrial mass. The state 3 respiration rates were significantly depressed following T₃ and T₄ treatments, in a substrate specific manner with the effects being more pronounced with T₃; these responses with T₄ were dose-dependent for succinate and ascorbate + N,N,N′,N′-tetramethyl-p-phenylenedíamme. State 4 respiration rates also exhibited similar corresponding changes. ADP/O ratios were not changed but ADP-phosphorylation rates were decreased significantly particularly so with the T₃-treated animals. Treatment with T₃ also resulted in lowering of intramitochondrial cytochrome contents. Similar effects were seen also with higher doses of T₄. The results thus indicate that T_3- and T_4- thyrotoxicosis results in impaired energy metabolism in heart mitochondria.     

超临界CO2流体对纤维素酶催化反应的影响

超临界二氧化碳流体预处理对纤维素超分子结构及纤维素酶催化反应有重要影响。一定含水量的微晶纤维素用SC-CO₂ 在 10MPa,50℃处理 30min ,其结构发生了有利于进一步被酶解的变化。上述超临界条件单独作用于纤维素酶时 ,并未造成酶催化活力的降低 ;但与纤维素共同进行SC-CO₂ 处理时 ,纤维素酶则失去催化活性 ,但这种处理却能提高纤维素进一步被酶解的效率。一定范围内处理时的酶用量与酶解效率的增加正相关。纤维素的含水量对SC-CO₂ 处理后的酶解效率有显著影响.     

枸杞LbMYB103基因克隆及转化拟南芥的研究

以枸杞品种‘宁杞1号’花药为材料,采用 RT-PCR技术,分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框（ORF）的cDNA片段,碱基序列与已知基因HQ415755完全一致。运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103,利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白（GFP）的过表达载体转入洋葱表皮细胞,将LbMYB103基因定位在细胞核。实时荧光定量PCR分析发现,LbMYB103基因在花药中优势表达,果实中表达量较低,在根、茎和叶中均未检测到其转录本,推测LbMYB103基因可能在花药发育过程中起重要作用。通过根癌农杆菌介导法将pMDC83-LbMYB103转入拟南芥（Col-0）,经筛选获得T₁代抗性再生植株52棵,PCR鉴定有41棵阳性植株,收获T₁代种子,经抗性筛选获得T₂代抗性植株29棵,PCR鉴定有23棵阳性植株。实时荧光定量PCR分析表明,LbMYB103在拟南芥植株的基因组中正常表达。表型观察发现T₁和T₂代拟南芥花药发育异常,花发育迟缓,果荚短小无种子,进一步表明LbMYB103可能与植物的育性有关。该结果为进一步开展枸杞遗传转化,深入研究LbMYB103基因在枸杞花药发育过程中可能发挥的调控功能奠定了基础。     

DCE-MRI联合DWI对直肠癌患者术前T、N分期及系膜淋巴结良恶性的诊断价值

摘要 目的：探讨动态对比增强磁共振(DCE-MRI)联合弥散加权成像（DWI）诊断直肠癌术前T、N分期和系膜淋巴结良恶性的价值。方法：收集2017年2月至2019年10月中国医科大学附属本溪中心医院和中国医科大学附属盛京医院接诊的80例直肠癌患者,均进行常规核磁共振成像（MRI）、DCE-MRI、DWI扫描,获得DCE-MRI、DWI定量参数[转运常数（K ^trans ）、细胞外血管外空间的体积分数（V _e ）、速率常数（K _ep ）、表观扩散系数(ADC)],比较不同T、N分期、不同性质系膜淋巴结DCE-MRI、DWI参数,及其对T、N分期和系膜淋巴结性质的诊断效能。结果：直肠癌癌灶K ^trans 、 K _ep 、V _e 高于正常肠壁,ADC低于正常肠壁（P＜0.05）。TNM分期为T_Ⅲ～Ⅳ期的患者K ^trans 、 K _ep 、V _e 高于T_Ⅰ～Ⅱ期,ADC低于T_Ⅰ～Ⅱ期（P＜0.05）;TNM分期为N₁期的患者K ^trans 、K _ep 、V _e 高于N₀期,ADC低于N₀期（P＜0.05）。联合诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值较高。结论：DCE-MRI联合DWI对直肠癌术前T、N分期、系膜淋巴结性质诊断价值较高。     

大肠杆菌噬菌体T4基因42和43DNA片段无性繁殖系的鉴定和分析

含胞嘧啶的T4 DNA用核酸内切酶Eco RI、Sal Ⅰ、和Hind Ⅲ切割,特别是用Eco RI不完全切割,所得片段以质粒pBR 322作载体,在大肠杆菌E.coli KH 802菌株中进行了无性繁殖。5,000个无性繁殖系经标记获救法作遗传鉴定,筛选基因42和43的无性繁殖系,并对其所带T4 DNA片段的图位和有关基因的功能表达进行了初步分析。试验证明,10个无性繁殖系带有基因43片段,其中CC-20还带有全部imm基因及基因42;基因43内B22和B263突变位点之间有一个Eco RI酶切位点,基因42或imm内也有一个酶切位点,无性繁     

超重力胁迫下‘平邑甜茶’幼苗叶片生理指标及其转录组分析

该试验以‘平邑甜茶’60 d龄幼苗为材料,设置T₁(5 000 r/min×3 h)、T₂(5 000 r/min×6 h)、T₃(10 000 r/min×3 h)和T₄(10 000 r/min×6 h)超重力处理,以未进行超重力处理为对照(CK),考察超重力处理下幼苗叶片叶绿素、可溶性蛋白、丙二醛、脯氨酸含量和膜透性等与逆境相关的生理指标的变化,并对其进行转录组分析,初步探究‘平邑甜茶’在超重力处理下的转录组响应机制。结果表明：(1)超重力处理造成‘平邑甜茶’幼苗叶片由舒展状生长状态向不同萎缩生长状态转变,其中T₄处理萎缩生长状态明显。(2)超重力处理下,‘平邑甜茶’幼苗叶片叶绿素和丙二醛含量在T₃和T₄处理下显著高于CK, T₁和T₂处理下与CK无显著差异;叶片脯氨酸含量在各超重力处理下均显著高于CK;膜透性在T₄处理下显著高于CK, T₁、T₂、T₃处理与CK无显著差异;可溶性蛋白含量在各超重力处理下均不同程度降低,但均与CK差异不显著。(3)样品测序结果显示,大多数转录本的序列长度在1 000 nt以上,有37 725个,占全部转录本79.15%,且CK、T₂、T₄样品以及相对应的新基因中均以FPKM值小于5.0的转录本数为主,其转录本数依次分别有21 412、20 162、22 368个和1 352、1 411、1 406个,占比分别为45.78%、43.10%、47.82%和81.45%、85.00%、84.70%。(4)GO功能注释与富集分析显示,随着超重力处理强度的加大,差异表达基因在GO富集分类中存在明显不同的途径,说明‘平邑甜茶’对超重力的响应是复杂的,但主要集中在转录因子活性、蛋白质去磷酸化过程方面。(5)差异转录因子表达分析显示,随超重力处理强度的增加表达上调幅度比较大的基因家族有bZIP、WRKY和ERF,其中bZIP和WRKY转录因子家族中的基因表达量均随超重力处理强度的增加呈上升趋势,但ERF家族中的MD01G1177100、MD08G1096000、MD13G1130700基因表达量随超重力处理强度的增加有下降的趋势。研究表明,超重力处理对‘平邑甜茶’幼苗造成了不同程度的伤害,且叶片总叶绿素、丙二醛、脯氨酸含量以及膜透性均受到显著影响,故幼苗叶片中叶绿素、可溶性蛋白、丙二醛及脯氨酸含量以及细胞膜膜透性均可作为评价超重力胁迫的抗性指标;研究推测超重力胁迫对‘平邑甜茶’转录因子的影响主要集中在WRKY、bZIP和ERF转录因子家族。该研究结果为候选抗性基因的挖掘和筛选奠定了理论基础。     

不同的麻醉方案对脑幕上肿瘤手术患者麻醉苏醒期血流动力学的影响

摘要 目的：对比不同麻醉方案对脑幕上肿瘤手术患者麻醉苏醒期血流动力学的影响。方法：选取2017年10月至2019年10月于我院择期行脑幕上肿瘤手术患者为本次研究对象,将其随机分为研究组(n=40)和对照组(n=40)。对照组术中接受右美托咪定麻醉,研究组术中接受异氟醚麻醉,观察并对比研究组和对照组在麻醉诱导前(T₀)、麻醉后30 min(T₁)、麻醉后1 h(T₂)以及手术结束时(T3)血流动力学指标[心率(Heart rate,HR),平均动脉压(Mean arterial pressure,MAP)]、脑氧代谢情况[颈内静脉球部血氧饱和度(Oxygen saturation of the bulb of internal jugular vein,SjvO₂), 动脉血氧含量(Arterial oxygen content,CaO₂),脑静脉氧含量(Cerebral jugular venous oxygen content,CjvO₂),脑氧摄取率(Cerebralextractionofoxygen,CERO₂)],并分析研究组和对照组麻醉效果(优、良、差)和手术相关指标(手术时间、麻醉时间、苏醒时间、输液量)情况。结果：与T₀时相比,研究组和对照组在T₁~T₂时MAP和HR均降低,且对照组明显低于研究组(P<0.05);与T₀时相比,T₃时研究组MAP和HR均增加(P＜0.05);与T₀、T₁、T₃时相比,研究组和对照组T₂时MAP和HR均较低,对照组低于研究组(P<0.05);与T₀时相比,研究组和对照组在T₁~T₃时CjvO₂明显增高,CERO₂明显降低,研究组在T₁~T₃时CjvO₂高于对照组,研究组在T₁~T₃时CERO₂低于对照组(P<0.05),在T₀~T₃时研究组和对照组SjvO₂、CaO₂差异不明显(P＞0.05);与对照组相比,研究组患者麻醉效果优良率较高(P<0.05),苏醒时间明显缩短(P<0.05),研究组和对照组手术时间、麻醉时间、输液量差异不明显(P＞0.05)。结论：：右美托咪定用于脑幕上肿瘤手术患者麻醉效果较好,可以有效稳定血流动力学,降低脑氧代谢,缩短苏醒时间。