蝮蛇毒的神经毒成分的研究——Ⅰ.蝮蛇毒对神经系统的作用

用记录膈神经和膈肌的呼吸性发放的方法,对蝮蛇毒急性中毒引起的呼吸麻痹,在家兔和大白鼠上进行了实验分析。将稍大于最小致死量(1毫克/公斤体重)的蝮蛇毒,经静脉或肌肉注入动物体内,一般经数小时后出现软瘫性呼吸麻痹,若及时地给予人工呼吸,则在膈肌的呼吸性发放完全停止的情况下,心电和膈神经的呼吸发放都尚可维持相当长的时间。若将蝮蛇毒直接注入侧脑室内,甚至达每公斤体重30～50微克,既不引起动物出现明显的呼吸困难,亦未导致动物死亡。若将脑室注射量加大到每公斤体重100微克以上,则动物经一定时间出现四肢强直、头后仰,抽搐、流涎等症状而死亡。在离体标本上,蝮蛇毒具有不可逆地阻遏接头传递作用,并且这种阻遏的发展过程是缓慢的,和银环蛇毒素乙、肉毒杆菌毒素对接头传递的阻遏过程相似。     

蝮蛇毒的神经毒成分的研究——Ⅱ.神经毒素的初步分离

用二乙氨基乙基-纤维素柱层析法从蝮蛇毒中分离出三个血循毒组分和一个神经毒组分,再用交联葡聚糖G50柱层析法将神经毒组分进一步分成二个神经毒组分。这些组分为分别筛选对抗神经毒或血循毒药物提供了有关的资料。     

镍离子对神经肌肉传递的作用

一定濃度的鎳离子可引起神經干的重复发放及神經肌肉傳递阻滞;这种阻滞是可逆的。它不能被新斯的明所解除。鎳阻滞时,終板电位下降相的时程与箭毒阻滞时的无显著差別。此时自发微終板电位的頻率不变,有时还有所增加。鎳离子对乙酰胆硷在終板区引起的去极化电位、肌纤維膜的电性质和肌纤維的靜息电位皆无明显影响。鎳离子虽然在一定程度上可提高肌纤維的临界去极化值,但高濃度鈣离子却能解除鎳的阻滞作用。根据这些結果,我們认为,神經末棺在神經冲动的作用下釋放乙酰胆硷的减少可能是鎳引起傳递阻滞的主要因素。     

神经营养因子对神经肌肉接头传递的调制作用

运动单位由运动神经元及其支配的肌纤维组成。神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)传递受到严密的调节,因而能和运动单位的活动协调一致。在NMJ,神经调制物质的释放与运动单位的活动有关,并能决定突触传递的效能。脑源性神经营养因子(brain—derived neurotrophic factor,BDNF)和神经营养因子4(neurotrophin-4,NT-4)由运动神经末梢和肌纤维产生。肌肉释放营养因子受肌肉活动调节。在NMJ,BDNF和NT-4通过激活酪氨酸激酶B受体(tyrosine kinase receptor B,TrkB),能加强自发性和诱导性的突触活动。突触前Ca^2 量的迅速增加或突触胞吐过程的易化,都能增加突触囊泡的释放,从而改善NMJ的突触传递。事实上,BDNF能促进突触前细胞内Ca^2 的释放,TrkB的激活也能通过有丝分裂活化蛋白激酶,引起突触素I(synapsinI)的磷酸化,进而增加可释放的突触囊泡的数量。在NMJ,神经营养因子还能通过影响神经调节素(neuregulin)或其他神经源性调制物质的局部释放,对接头传递进行调节。本文对近年来在NMJ突触传递的调节,运动单位的NMJ特性以及神经营养因子对突触传递效能的影响等方面的研究进展做一综述。     

秋水仙素对大鼠神经肌肉接头传递的作用

在不均匀牵拉法固定的离体大鼠膈神经膈肌标本上,用秋水仙素探讨了突触后膜的微管在神经肌肉接头乙酰胆碱受体兴奋中的作用。秋水仙素使小终板电位的幅度下降;使串刺激(10Hz,50Hz)诱发的平均终板电位幅度和平均量子含量减少;并使有神经支配的膈肌终板区乙酰胆碱电位幅度降低;但不影响膜电位、小终板电位的频率及终板电位和乙酰胆碱电位的时程。结果表明该药对神经肌肉接头乙酰胆碱受体的兴奋有抑制作用。而其同分异构体光化秋水仙素则无此作用。据此本文提出突触后膜下的微管可能参与神经肌肉接头乙酰胆碱受体的反应过程。     

杀虫环对黑胸大蠊神经突触传递的阻遏作用

用电生理糖间隙法研究杀虫环对黑胸大蠊神经突触传递的作用,并以α-银环蛇毒素作比较。结果证明:1)杀虫环阈浓度1×10^-5M即显著地抑制兴奋性突触后电位(EPSP)。作用开始使之阈值递增,此时只有增加刺激强度方可诱出EPSP。2)(虫非)蠊第Ⅵ腹神经节是胆碱能的。已知突触后阻遏剂如α-银环蛇毒素的作用是N型乙酰胆碱受体(n-AchR)的专一性配基,与杀虫环阻遏神经突触的传递颇为相似,二者均不影响突触后神经元的静息电位和动作电位的传导;而杀虫环对非胆磁能的神经肌肉接头则无影响。3)自发突触后电位随杀虫环处理时间的不同而变化。开始自发释放电位的振幅、频率逐渐增加,继之产生持续期较长的阵发性高频发放,以后又逐渐消失。     

蝮蛇神经毒素引起的神经肌肉接头超微结构变化

当小鼠接受6—8微克(皮下注射、超最小致死量)的蝮蛇神经毒素后,一般经1—2小时便因呼吸麻痹而死亡。在中毒早期,即出现呼吸困难症状时所取出的样品中,神经肌肉接头超微结构均正常,但在中毒晚期,即呼吸即将停止之前所取出的样品中,接头前部分发生明显变化,主要是突触泡显著减少,甚至完全被排空,线粒体肿胀、破裂、变性和减少。但神经末梢轴突膜平滑匀整,未见Ω型凹陷的形成,突触裂隙和突触后皱褶亦未见变化。这些结果提示,蝮蛇神经毒素也可能和太攀蛇毒素等相似,通过影响突触泡再循环过程,以阻遏神经肌肉间的传递。文中还讨论了蝮蛇神经毒素与其它蛇毒突触前毒素对接头超微结构作用的异同。     

浙江蝮蛇毒磷脂酶A抗凝作用的研究

本文研究分析了从浙江产蝮蛇毒提纯的三种磷脂酶A(PLA)的抗凝活性,结果只有碱性PLA具有抗凝作用,而酸性PLA与中性PLA(Agkistrodotoxin)均无此作用。碱性PLA能显著延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,影响血液凝血活酶的生成,抑制血小板磷脂与红细胞磷脂的促凝活性,但对凝血酶时间及纤维蛋白平板溶解试验无影响。这些结果表明,碱性PLA可能通过对膜磷脂的作用而干扰凝血酶原酶的形成。碱性PLA明显改变了血小板和红细胞的电泳速率,而酸性及中性PLA则影响较小,提示碱性PLA抗凝活性可能与膜磷脂特异活性部位的结合反应有关。     

肌肉不均匀牵张对神经肌肉接头传递电生理学影响的研究

大自鼠膈肌经不均匀牵张处理后,在牵张适度的肌纤维终板区,以细胞内微电极技术可同时记录到正常的迷质量子式自发释放产生的微终板电位(MEPP),较高幅度的递质量子式诱发释放引起的终板电位(EPP)和接近正常水平的静息膜电位(RMP)。此标本被认为是处于接近正常生理状态的神经肌肉接头标本。本研究观察不均匀牵张处理对突触前递质释放对Ca~(2 )浓度的依赖性和突触后肌纤维电生理学性质的影响。     

蛇岛蝮蛇毒分离组分抑癌作用实验研究

我们采用4×4正交拉丁方的方法,对蛇岛蝮蛇毒12组分进行抑癌实验,从中选择抑癌较好组分,最好浓度和敏感的瘤株,其结果如下。 实验设计 一、实验用药:蛇岛采集蝮蛇毒经沈阳药学院分离获得12个组分制成注射液,每只含量0.1mg。按设计分0.03mg/kg,0.05mg/kg,0.075mg/kg,对照组用生理盐水共4个浓度。 二、实验瘤株:小鼠肉瘤180(S1880)小鼠肝肉瘤(H.S),小鼠艾氏腹水癌实体瘤(E.C),小鼠纲状细胞肉瘤(A.R.S),共4种瘤型。     

蛇毒神经毒的镇痛作用的研究

蛇毒神经毒的镇痛作用的研究沈阳生物资源医用研究所覃志忠经过对中华眼镜蛇毒中神经毒的一系列研究,发现其有较为理想的镇痛作用。我们通过观察小白鼠的热痛觉实验对此进行了探讨：一、神经毒的制备：制备神经毒用的原料系中国蛇协蛇毒研究所提供的眼镜蛇毒（Ｎａｊａｎ...     

尖吻蝮蛇毒类凝血酶促凝作用的研究

探讨尖吻蝮蛇毒类凝血酶（ＤＡＴＬＥ）的促凝作用特点及影响其药效的有关因素。方法测定ＤＡＴＬＥ诱导的体外全血浆及吸咐血浆凝固时间,不同实验条件对ＤＡＴＬＥ及凝血酶诱导体外全血浆凝固时间（ＴＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）和凝血酶原时间（ＰＴ）的影响。结果在体外,ＤＡＴＬＥ能直接使人全血浆及吸咐血浆凝固,并呈剂量相关性,该促凝作用不受ＡＴ－Ⅲ和肝素的影响,Ｎａ＋离子抑制,而Ｃａ２＋离子能增强其促凝作用;ＤＡＴＬＥ促凝作用的最适ｐＨ值在５．０～８．５之间;ＤＡＴＬＥ在体内能增强内源性和外源性凝血作用,在０．０５～０．１ｍｇ／ｋｇ的促凝剂量下,ＤＡＴＬＥ略使血浆纤原含量减少。结论ＤＡＴＬＥ为一类凝血酶,在一定剂量范围内,主要表现为促凝作用,有不同于凝血酶的特点。     

关于溴氰菊酯神经毒作用的生物化学研究

 本文利用生物化学的手段,对大鼠进行了急性和亚急性毒性实验,研究溴氰菊酯对动物中枢神经系统离子调节作用的影响。急性实验结果表明:<1>溴氰菊酯能显著抑制脑微粒体上的Ca~(2+)+Mg~(2+)-ATP酶和Na~++K~+-ATP酶活性,但并不降低ecto-Ca~(2+)-ATP酶(细胞表面的Ca~(2+)-ATP酶)的活性;<2>溴氰菊酯对大鼠小脑组织中的环腺苷酸含量无明显影响,但却能显著升高与其作用相反的环鸟苷酸含量。体外实验证明,溴氰菊酯能够减少线粒体对Ca~(2+)的主动摄取。在对大鼠进行的亚急性实验中,发现溴氰菊酯中毒组与对照组大鼠的Ca~(2+)+Mg~(2+)-ATP酶、Na~++K~+-ATP酶和ecto-Ca~(2+)-ATP酶的活性均无显著性差异。根据以上结果推测,在急性中毒的条件下,溴氰萄酯能引起大鼠脑神经细胞内Ca~(2+)和Na~+的浓度增高,致使神经兴奋性发生改变。     

川棟素在小鼠神经肌肉标本上的抗肉毒作用

本文用小白鼠离体膈神经膈肌标本,研究了川棟素的抗肉素作用。在我们所用的试验条件下,川棟素均显著地延长肉毒中毒标本对间接刺激收缩反应的麻痹时间,表明川楝素能在神经肌肉接头处对抗肉毒的阻遏作用。文中对川棟素的抗毒机理进行了讨论。     

菊花不同部位水浸液自毒作用的研究

研究了连作障碍比较明显的菊花(Dendranthema morifoliumTzvel.)栽培种高压太子不同部位水浸液处理对盆栽同种菊花生长及生理特性的影响.结果表明,不同部位水浸液处理抑制了盆栽菊花生长,受体菊花花枝长度、直径与花枝粗度比对照显著减小,处理浓度越高,抑制作用越大.水浸液处理显著抑制根系脱氢酶、硝酸还原酶、抑制PAL的活性.同时促进离子渗漏和膜脂过氧化的发生、抑制蛋白质的含量水平,尤以地上部水浸液的抑制作用最为显著.研究表明,自毒作用是导致菊花连作障碍的原因之一.     

南湖霉素对神经肌肉传递的影响和机理探讨

南湖霉素是我国学者筛选的一个新的多醚类抗生素，具有抑制枯草杆菌生长和抗鸡球虫病的作用。本工作利用电生理胞内记录方法，在小鼠膈神经膈肌标本上观察了它的作用。结果为（１）ＮＨＭ不可逆地阻遏神经肌肉传递，２０μｇ／ｍｌ时１．５－２ｈ完全阻遏。（２）２－２０μｇ／ｍｌ浓度的ＮＨＭ引起小终板电位发放频率显著地和阵发性地升高，持续４０－６０ｍｉｎ；其间，终板电位的平均量子含量也相应升高，并随传递阻遏的发生，终     

国内蝮蛇毒制剂的药理研究近况

蝮蛇毒制剂在临床上应用越来越广泛,这是由于蝮蛇毒的作用途径和机理的多样性所决定.本文介绍了国内蝮蛇毒药理作用研究近况,表明蝮蛇毒具有抗凝、去纤、溶栓、抗炎、抗癌、抗菌等功效.     

蝮蛇毒诱导小鼠急性肾损伤的研究

目的观察蝮蛇毒诱导小鼠急性肾损伤肾脏病理变化特点,为肾损伤的防治提供理论依据。方法将小鼠分为N组（正常对照组）、L组（蛇毒低剂量组,0.50 mg/kg）、H组（蛇毒高剂量组,2.00 mg/kg）,每组按时相点又分为3、6、244、8 h四个亚组。96只小鼠随机分配到各亚组,采取肌注蝮蛇毒的方式建立动物模型。结果 SCr值,L组24 h升高（P〈0.05）,48 h下降（P〈0.05）;H组持续升高（P〈0.05）。光镜下肾损伤病理评分,L组6 h开始升高（P〈0.05）,48 h下降（P〈0.05）;H组3 h开始持续升高（P〈0.05）。SCr与光镜下,肾损伤病理评分呈正相关（L组：r=0.883,P〈0.01;H组：r=0.891,P〈0.01）。结论 SCr在一定条件下能反映肾损伤的严重程度,但急性肾损伤的发生早于SCr升高;急性肾损伤的严重程度与蝮蛇毒的剂量呈正相关。     

2种国产蝮蛇毒降纤酶的降纤作用比较

目的　比较尖吻蝮蛇毒降纤酶及白眉蝮蛇毒降纤酶降凝血因子 的作用。　方法　选用 1个厂家生产的以尖吻蝮蛇毒为原料的降纤酶及 2个厂家生产的以白眉蝮蛇毒为原料的降纤酶分别治疗 1 7例、 4 0例、 31例急性脑梗死。用降纤酶 1 0 u加入 0 .9%生理盐水 2 5 0 ml中 ,静脉滴注 ,1 h滴完 ,每天 1次 ,共 3天 ,每次用药前用凝固法测定凝血因子 。　结果　 2种白眉蝮蛇毒降纤酶降纤作用不明显 ,尖吻蝮蛇毒降纤作用明显且迅速。用药前 Fg为 4 .0 4± 1 .2 g/L,用药 1次后 Fg降至 2 .1 1± 0 .6 g/L,P <0 .0 1。　结论　尖吻蝮蛇毒降纤酶降纤作用明显优于白眉蝮蛇毒降纤酶。     

江浙蝮蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin的研究Ⅰ.分离纯化和初步表征

江浙蝮蛇毒中存在有多种精氨酸酯酶,其中有多种已被纯化,本研究应用离子交换和凝胶过滤等方法,新分离纯化了一种精氨酸酯酶,命名为Agkihpin,分子量约为25．46KDa,等电点约为7．43,含235个氨基酸残基,糖蛋白染色阴性,是单链蛋白,对TAME的最适pH为8．2。