血红蛋白的结构分析

本文应用指纹法和肽段氨基酸层析法对血红蛋白A(HbA)和血红蛋白S(HbS)进行结构分析。 指纹法:淀粉板电泳提纯的HbA和HbS,经胰蛋白酶酶解后,点样于60×25厘米的新华3号滤纸上,作高压电泳分离(缓冲液为呲啶:冰醋酸:水=100∶4∶900 V/V,电压2,800伏,电泳2小时),继而进行垂直于电泳方向的上行层析(溶剂系统为吡啶:异戊醇:水=35∶35∶30),茚三酮显色,得血红蛋白酶解图谱。和HbA比较,发现HbS酶解图     

乌梢蛇氨基酸图谱研究

目的建立乌梢蛇的氨基酸指纹图谱。方法采用L-8800型全自动氨基酸分析仪提取乌梢蛇水解氨基酸。色谱条件:分离柱直径4.6mm×40mm,离子交换树脂型,缓冲液流速0.4ml/min,茚三酮流速0.3ml/min;缓冲液泵压力茚三酮泵压力8~11.5Pa;柱温56℃。结果建立16个共有特征峰的水解氨基酸指纹图谱。结论本研究有助于提高乌梢蛇药材的质量控制水平。     

中药熏洗在肛瘘患者经挂线引流术后的临床应用

目的:探讨中药熏洗在肛瘘患者经挂线引流术后的临床应用效果。方法:收集我院收治的70例肛瘘挂线引流术后患者,随机分为实验组和对照组,每组35例,患者均行肛瘘经挂线引流术,术后对照组给予常规护理治疗,实验组患者给予自拟熏洗方进行中药熏洗。治疗结束后,比较两组患者的疼痛持续时间、恢复时间、创面愈合速度、症状评分并发症发生率以及复发率。结果:与治疗前相比,两组患者治疗后的症状评分均显著下降(P0.05),而实验组患者治疗后的症状评分、疼痛持续时间、恢复时间、并发症发生率以及复发率明显低于对照组(P0.05),创面愈合速度显著快于对照组(P0.05)。结论:中药熏洗能够有效促进肛瘘患者经挂线引流术后恢复并减少复发,且安全性较高。     

直接比色法测定发酵液中赖氨酸的含量

<正> 赖氨酸是人类和动物生长所必须的氨基酸之一。大量用作输液,营养药品,食品和饲料添加剂,目前它的制备普遍采用发酵提取法,在发酵过程中还产生多种其它氨基酸,因此要求快速测定发酵液中赖氨酸的含量比较困难,过去采用的分析方法有下述几种: 一、发酵液经泸纸层析,薄板层析或电泳分离后,将赖氨酸组份洗脱,加茚三酮试剂显     

贝莱斯芽孢杆菌Y6抗菌肽抑制白念珠菌活性的研究CSCD

目的对贝莱斯芽孢杆菌Y6代谢物抑制白念珠菌活性及其作用机理进行初步研究。方法采用平板结合牛津杯研究贝莱斯芽孢杆菌Y6发酵上清液对白念珠菌抑制活性,梯度稀释法测定了最小抑菌浓度(MIC),通过薄层色谱法对代谢物的活性成分进行筛检;同时比较抗菌肽处理前和处理后菌体胞内大分子释放量及荧光染料PI的摄入量的变化,考察抗菌肽对胞膜通透性影响。结果贝莱斯芽孢杆菌Y6代谢物能有效抑制白念珠菌生长繁殖,测试浓度为10 mg·mL^(-1)时,抑菌圈直径达到(38.2±0.5)mm,其MIC浓度为0.625 mg·mL^(-1);通过薄层色谱结合茚三酮显色对活性组分筛检发现Y6代谢物中有2个抗菌组分,其中主要活性组分遇茚三酮显紫色,推测为肽类组分;经抗菌肽处理后的白念珠菌胞内大分子释放量及PI摄入量明显高于对照组,表明菌株Y6抗菌肽对白念珠菌胞膜完整性具有一定的损伤作用。结论贝莱斯芽孢杆菌Y6产肽类抗菌物质,且对白念珠菌细胞膜存在一定的损伤作用,从而产生明显的抗菌活性。     

氨基酸的离子交换色谱(理论原理和实践)(续)

<正> 五、洗脱液中氨基酸的定量测定洗脱液中氨基酸的定量测定是根据洗脱液中各组分与各种显色试剂(见第一章)反应时产生的颜色强度借助光电比色计进行测量的。适合于此目的所有显色试剂中,象上面指出的最有效的是茚三酮。这种制备简单,使用方便,重复性好的茚三酮试剂由Moore 和Stein 首先提出。作为这种方法的还原剂采用氢化茚三酮—茚三酮的还原形。如所周知,在与氨基酸相互作用时茚三酮形成带颜色的物质—双配位茚酮胺(Ⅲ)和醛     

茚三酮直接加入展开剂显色的探索

在纸层析和薄层层析中,经典显色法是用显色剂对晾干后的层析谱进行喷显。1984年,朱婉华用微晶纤维素薄层层析法分析氨基酸,将茚三酮直接加进展开剂内,在展开过程中显色,获得成功。最近,我们用纸层析     

HPLC特征图谱结合含量测定的白芍及其炮制品的质量对比研究

建立白芍、炒白芍、酒白芍、硫熏白芍HPLC特征图谱,并结合多成分含量测定,为白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的质量控制提供参考。采用Intersustain C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液,流速为每分钟1 mL,梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。14批白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的特征图谱,标定了6个共有峰,并均被指认,分别为没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷,而硫熏白芍标定7个共有峰,峰7为白芍硫熏后产生;且各色谱谱峰有较好的分离,但不同炮制品特征图谱存在一定差异;含量测定结果显示,白芍炒制、酒制及硫熏后,6种成分均有不同程度的变化;借助中药色谱指纹图谱相似度评价系统和SIMCA-P13.0软件对14批白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍进行相似度和正交偏最小二乘判别(OPLS-DA)分析,所建立的白芍和炮制品及硫熏品的质量评价方法稳定性、重复性好,可用于白芍、炒白芍、酒白芍和硫熏白芍的质量控制和评价。     

稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的实验研究（一）茚三酮显色剂在不同存放时间内对氨基酸含量的影响

本项目采用新的技术,对茚三酮显色试剂进行了研究,利用国内新引进的６３００黄金系列氨基酸分析仪对不同存放时间内的节三酮显色剂对氨基酸含量的影响进行了实验研究。观察了第１天,第７天,第１４天,第２１天,第２８天内进口茚三酮显色剂与自制茚三酮显色剂对氨基酸含量的影响。并对３８种氨基酸与自制茚三酮试剂和进口茚三酮试剂反应后的实验结果进行了观察。实验结果表明,第１天至第２８天内,自制茚三酮试剂的稳定性、灵敏度,重度性,分辨率等项指标均优于进口的茚三酮试剂,统计结果,说明用自制的茚三酮试剂取代进口的茚三酮试剂是可靠和可行的。     

恶性肿瘤患者LGT指纹转阴前后的对比研究

目的:分析恶性肿瘤患者危重病人预警蛋白(Lost Goodwill Target,LGT)指纹由阳性向阴性转变后是否出现有意义的差异指纹.方法:应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测10例恶性肿瘤患者(分析组)LGT指纹由阳性向阴性变异前后血清样本的蛋白质指纹谱,以质/核比(M/Z):11100+H～11900+H,出现丰度＞10%峰簇(cluster),视为LGT阳性,反之为阴性.另选择12例肿瘤患者,各取1份血清样本,间隔1wk检测1次,再选择5例肿瘤患者连续两天血清标本各1份,以此作为影响因素对照组.去除与对照组相同差异指纹后,寻找LGT转阴后差异蛋白质组指纹.结果:分析组中恶性肿瘤患者LGT指纹由阳性向阴性变异时,有17个蛋白质指纹差异有统计学意义(P＜0.05),对照组中有差异指纹44个,其中M/Z为1007、1057的指纹与分析组相同,将之剔除后,剩余了15个有统计学意义的差异蛋白质指纹,其中上调指纹的m/z(质/核比)值分别为12262、6933、7964、8069、1171、915和1232.下调指纹的m/z值分别为2740、2818、4089、8828、2932、3191、3261和801.结论:SELDI-TOF-MS技术检测恶性肿瘤患者血清捕获的m/z:12262、6933、7964、8069、1171、915和1232蛋白质指纹呈上调趋势,m/z:2740、2818、4089、8828、2932、3191、3261和801蛋白质指纹呈下调趋势,可视为恶性肿瘤患者LGT指纹由阳性向阴性转变后伴随的相关蛋白质组指纹图谱.     

杜鹃对SO2胁迫的抗氧化防护效应

以SO2耐受性植物杜鹃(Rhododendron sp.)为材料,在2个高浓度SO2熏气后,检测了叶组织中丙二醛(MDA)、可溶性蛋白和叶绿素含量以及抗氧化酶活性.结果表明:40和80mg?m-3SO2熏气4h(1d)后,杜鹃叶片超氧化物歧化酶(SOD)活性和MDA含量均分别比对照显著增加了11.26%、11.86%和73.32%、76.43%;随熏气时间的延长,SOD、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性持续增高,且SOD和CAT活性显著高于对照,MDA含量逐渐降至对照水平;SO2熏气导致叶片可溶性蛋白含量显著降低,但叶绿素含量却无显著改变.熏气后恢复期间,抗氧化酶活性相对降低,可溶性蛋白含量恢复至对照水平.研究发现,杜鹃对SO2的耐受性与细胞中抗氧化酶活性的诱导性增强有关,抗氧化能力增强是植物适应SO2胁迫的重要原因.     

表面增强激光解吸离子化技术稳定性的分析

目的:表面增强激光解吸离子化(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)技术的重复性和稳定性进行分析.方法:将17名患者分成A、B两组,A组12名肿瘤患者清晨空腹血,离心后分成两份:一份立即行SELDI技术检测,另一份-80℃保存一周后再行检测;B组5名肿瘤患者连续两天各采血一次,并于采血当天行SELDI技术检测.所捕获的指纹经Biomarker Wiz-ard3.1、ProteinChip 3.2和Biomarker Pattern软件分析有无差异指纹.结果:两种采样方法都发现了差异指纹,其中有部分差异指纹在两种采样方法的检测中都出现,所有差异指纹M/Z(质荷比)由731到1167.结论:SELDI技术的确存在有重复性差、系统不稳定因素,但都发生在M/Z小分子量位段,对大位段数据分析未发现有明显影响.     

臭氧熏气下春小麦叶片脂质过氧化作用的研究

 应用开顶式熏气装置,以低浓度(0.1ppm)的臭氧对春小麦(Triticum aestivum)进行了长时间的熏气,观测到：随着熏气时间的延长,叶片内叶绿素含量下降,丙二醛(MDA)积累增多,膜透性增大。在较高浓度(0.2ppm、0.3ppm、0.4ppm)臭氧熏气下,臭氧浓度越高,叶片内叶绿素降解越快,MDA含量越高,膜透性越大。低浓度和短时间的臭氧熏气可使超氧化物歧化酶(SOD)活性升高,而高浓度和长时间的臭氧熏气则导致SOD活性下降。试验结果表明,由臭氧熏气所引起的植物体内代谢紊乱与诸多伤害是由于脂质过氧化作用的结果。     

恶性肿瘤患者LGT指纹阴转阳的对比分析

目的:分析恶性肿瘤危重病人预警蛋白(LGT-Lost Goodwill Target)指纹由阴性向阳性转变后是否出现有意义的差异指纹.方法:应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight MassSpectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测21例恶性肿瘤患者(分析组)LGT指纹由阴性向阳性变异前后的血清蛋白质指纹谱,以质/核比(M/Z):11100+H～11900+H,出现丰度>10%峰簇(cluster),视为LGT阳性,反之为阴性.另选择12例肿瘤患者各1份血清样本,间隔一周检测一次,再选择5例肿瘤患者取连续两天血清标本各1份进行检测,以此作为影响因素对照组.去除与对照组相同差异指纹后,比较LGT阳性向阴性转变后差异蛋白质组指纹有无显著性.结果:分析组中恶性肿瘤患者LGT指纹由阴性向阳性变异时,有18个蛋白质指纹差异有统计学意义(P<0.05),对照组中有差异指纹44个,其中M/Z为1005、1008的指纹与分析组相同,将之剔除后,剩余了16个有统计学意义的差异蛋白质指纹,其中上调指纹的m/z(质/核比)值分别为6626、2889、6429、8866、3452、1259、3052、3699、8531、757、1146和8765.下调指纹的m/z值分别为17650、7979、778和1006.结论:SEL-DI-TOF-MS技术检测恶性肿瘤患者血清捕获的m/z:6626、2889、6429、8866、3452、1259、3052、3699、8531、757、1146和8765蛋白质指纹呈上调趋势,m/z:17650、7979、778和1006蛋白质指纹呈下调趋势,可视为恶性肿瘤LGT指纹阴转阳的差异蛋白质.     

五龄恩茅松毛虫幼虫的肠道好氧细菌多样性分析

采用16s rDNA通用引物进行PCR扩增,16s rDNA扩增片段经寡位点酶组合(HaeⅢ+HindⅢ)和多位点酶组合(HinfⅠ+TaqⅠ)酶切后得到ARDRA指纹图谱,ARDRA指纹图谱通过MVSP软件进行聚类分析(UPGMA),并对5大类群的代表菌株进行测序,研究了5龄思茅松毛虫Dendrolimu kikuchii Matsumura肠道细菌的多样性。结果表明:寡位点酶组合(HaeⅢ+HindⅢ)或多位点酶组合(HinfⅠ+TaqⅠ)酶切得到的ARDRA指纹图谱不能反映5龄思茅松毛虫肠道细菌的多样性,两组酶切结果组合后可以充分反映5龄思茅松毛虫肠道细菌的多样性。通过测序可知,5龄思茅松毛虫的肠道内主要定植产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)、雷金斯堡约克氏菌(Yokenella regensburgei)、克雷伯氏杆菌(Klebsiella peneumoniae)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),多样性丰富,它们形成的肠道微生物生态系统可以抵制外来菌对恩茅松毛虫的侵害,维持恩茅松毛虫的健康。     

维吾尔药材地锦草HPLC指纹图谱的研究

目的:建立地锦草高效液相色谱指纹图谱。方法:Shim-pack ODS C18(150 mm×4.6 mm.i.d.,5.0μm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水系统为流动相(梯度洗脱),检测波长为272 nm,柱温为30℃。结果:测定了产于新疆的10批地锦草的指纹图谱,标定了13个共有指纹峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。经计算机模拟相似度计算软件计算,相似度大于0.9。结论:建立的HPLC指纹图谱分析方法可作为地锦草的鉴别方法之一,为地锦草的质量控制提供了依据。     

糖的有色试剂标记微量测定法

本文报告用有色试剂4-N,N-二甲氨基-4′-氨基偶氮苯标记还原糖。标记产物可在聚酰胺薄膜上经双向层析分离鉴定。用盐酸熏后,标记产物由黄绿色转为蓝紫色。灵敏度达10~(-9)～10~(-10)克分子糖。本法可鉴定寡糖的组成成分和聚合度;结合酶解可鉴定寡糖的还原末端。     

糖的有色试剂标记微量测定法

本文报告用有色试剂4-N,N-二甲氨基-4'-氨基偶氮苯标记还原糖。标记产物可在聚酰胺薄膜上经双向层析分离鉴定。用盐酸熏后,标记产物由黄绿色转为蓝紫色。灵敏度达10~(-9)～10~(-10)克分子糖。本法可鉴定寡糖的组成成分和聚合度;结合酶解可鉴定寡糖的还原末端。     

二甲亚砜作为氨基酸分析中茚三酮试剂的溶解剂

乙二醇甲醚已广泛作为氨基酸分析中茚三酮试剂的有机溶剂。然而,经常使用一种试剂有许多不利,乙二醇甲醚有毒性,易产生过氧化物。二甲亚砜试验就是在为得到一种化学性质更好,相对乙二醇甲醚无毒代用品的情况下,经过连续试验产生的。该试验证明:二甲亚砜较之乙二醇甲醚对还原性茚三酮是一种更好的溶剂。它能以等体积替换乙二醇甲醚,在茚三酮试剂的混合液中能产生和乙二醇甲醚相等的效应,同时还可增强稳定性。本结果采用75％二甲亚砜、25％、4M、pH5.2的醋酸锂缓冲溶液配成茚三酮和还原性茚三酮溶液。这类含有一定量还原性茚三酮的混合溶液用来代替原含有乙二醇甲醚的茚三酮溶液在氨基酸自动分析仪和人工茚三酮法的氨基酸定量测定中已受到人们的欢迎。