LH-RH九肽类似物抑制蜕膜形成机理的研究 Ⅱ.对假孕大白鼠的实验

前文(刘以训,李树民1979)指出,在大鼠妊娠3—5天,每日注射高剂量LH-RH九肽类似物,可能通过血中雌激素水平上升而抑制胚泡着床和蜕膜分化;雌激素本身也有同样的抑制作用。最近有文献(Corbin等1975;Humphrey等1977;Rippel等1975)指出,LH-RH有可能直接作用于卵巢和子宫组织。为了澄清这一问题,并进一步阐明LH-RH的作用机理,我们在假孕和假孕去卵巢大鼠中进行了实验,尽可能排除通过卵巢内源激素的干扰,试图进一步探讨LH-RH类似物是否不经垂体卵巢轴而直接对于宫有抑制作用的可能性。     

黄体生成素释放激素的垂体外作用

本文从体内已发现的黄体生成素释放激素(LH-RH)的分布;某些垂体外组织存在低亲和力的LH-RH受体,以及LH-RH及其类似物对人和灵长目高等动物,直至对低等动物昆虫都有作用,甚至对传代株癌细胞也有作用;说明了LH-RH并非下丘脑所独有,也不仅仅作用于垂体;LH-RH对垂体外组织也有着直接的作用。     

~(125)Ⅰ标记金坏蛇毒和类心脏毒素在小鼠体内的分布

将动物分成三组,分别皮下注射小于致死剂量的~(125)I标记金环蛇毒或二个类心脏毒素(毒素 A或 B),在注射后1、2、4、8、16和24小时测定了一些组织(或脏器)中的放射强度(脉冲数/min/mg 湿重组织)。结果表明,除血液放射强度在注射后1小时已达最高值外,其余均在注射后2小时达到或接近最高值。至于三者从动物体内的排除,则毒素 B 似较快,如它在各组织中的放射强度在注射后8小时已降到接近对照水平,而毒素 A 和粗毒一般都在注射后16小时方降到对照水平,甚至还稍高于对照水平。注射后2小时,三种被标记物质在各组织中的放射强度均以肾为最高。如以肾的放射强度为100%计算,则肺、肝和脾的为3.5%,心肌、膈肌和骨胳肌的为1—2%,脑的最低,仅为0.3—0.5%。这些结果和 Lee 等报道的有关银环蛇毒在体内分布的资料相似。未观察到粗毒或二种纯化毒素在某一种组织中有特殊的积聚,用放射自显影法也未能显示毒素 A 或 B 在神经肌肉接头有明显的集中。     

外源性肝胞质RNA对人肝癌细胞的生物学作用及体内分布

从正常动物肝脏提取了以胞质RNA 为主的RNA,以聚丙烯酰胺电泳及对人体肝癌(7402)细胞的生物学作用证明,制品含有相当于7～18S 的不均一RNA,和具有mRNA 的模板活性以及对基因活动的调节控制活性。应用~(125)Ⅰ(及~(131)Ⅰ)标记的肝RNA 注入正常小鼠及肝内接种移植性肝癌的小鼠,从整体动物扫描及脏器比放射性分布,证明~(125)Ⅰ-RNA 优先进入肝及肝癌组织,~(125)Ⅰ-核苷酸(NT)则呈均匀分布。注射10～50微居里~(125)Ⅰ-RNA,15分钟后,细胞放射自显影显示,在肝及肝癌细胞中出现银颗粒的积聚。~(125)Ⅰ-NT 在同样条件下,肝及肝癌细胞中未见明显的银粒积聚,由此提示~(125)Ⅰ-RNA 可能有相当部分以一定的大分子形式进入肝及肝癌细胞。人肝癌(7402)细胞经正常鼠肝RNA 温育24小时后,以~(14)C-亮氨酸对血清白蛋白的参入证明,人体肝癌细胞不仅合成鼠血清白蛋白,并可显著促进人血清白蛋白的合成,高达未处理的肝癌细胞的3.6倍,由此说明我们所制备的肝RNA 不仅具有供体(鼠)肝的模板活性作用,同时具有调节宿主(人)肝癌细胞基因活动的作用。放线菌素D 可部分或全部阻断这种调控作用,但对模板作用影响较少,甚至可见有增强作用。肝RNA 制品中显示的模板和调控活性可能来自两类不同功能的RNA,对此作了讨论。无论是模板或调控作用,都可能促使肝癌细胞发生功能上的分化,反映出癌细胞表现型的改变。通过外源性正常肝RNA 的调控作用,纠正癌细胞基因活动的异常,从而导致向正常细胞表现型逆转,可能将为肝癌的防治提供新的途径。     

辐射诱导对犬胆管平滑肌细胞凋亡中BCL-2活性的影响

目的:探讨γ射线对BCL-2基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响。方法:实验犬24只(15～18kg),随机分为普通支架组和~(125)I支架组各12只。用切断吻合法,造成胆总管损伤。术后30天胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内。置入支架后60d分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法进行凋亡细胞,BCL-2蛋白基因检测,并用计算机图像检测系统检侧两组胆管腔面积。结果:~(125)I支架组犬胆管组织中BCL-2基因表达较普通支架组减弱,且BCL-2基因低表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;而普通支架BCL-2基因高表达,且犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论:~(125)I放射性支架通过抑制BCL-2基因,促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,可以抑制犬肝外胆管狭窄。     

重组人ω-干扰素在金黄地鼠和Wistar大鼠体内的组织分布和排泄

目的:为进一步的临床试验提供重组人ω-干扰素(rhIFN-ω)的分布和排泄试验数据。方法:用125I同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法测定各主要器官组织的总放射性浓度和酸沉淀部分放射性浓度,获得rhIFN-ω的尿粪排泄和胆汁排泄数据。结果:各主要器官组织的总放射性浓度AUC0-4h排序由大到小依次为:尿、胸腺、胆囊、膀胱、肾、肾上腺、肠内容物、肠淋巴结、空肠、肺脏、血清、卵巢、脾、肝、肌肉、心脏、骨髓/股骨、睾丸、脂肪、脑。皮下注射125I-rhIFN-ω后48h尿和粪的累计排出量分别达到注入放射量的87.9%±2.8%和4.0%±1.6%,尿粪合计排出量占注入放射性量的91.9%±2.1%,而皮下注射125I-rhIFN-ω后20h内胆汁排泄放射性量占注入放射性量的3.34%。结论:rhIFN-ω在泌尿系统分布比较高,与血清蛋白结合比较少,在脑、脂肪和肌肉等组织的药物浓度最低。rhIFN-ω主要以尿的形式排泄。     

~(14)C-醋酸棉酚在大鼠体内的药物动力学的研究——Ⅰ.在大鼠体内分布、定位的整体及组织放射自显影的动态观察

以~(14)C 标记的醋酸棉酚喂饲成年雄性大鼠,一次口服组的剂量为94微居里/35毫克;累加服药组为4.5微居里/日。分别于服药后不同时期取材制成整体或组织放射自显片。追踪标记棉酚在体内各脏器和组织中的吸收,分布和累积的定位变化动态。相应的组织切片用H、E 染色,作细胞病理学观察。结果摘述如下:1.一次口服标记棉酚后1—2天,标记物主要分布于胃、肠道和肝脏中。4—9天后,心、脾、肺、肾、胰、睾丸、附睾、附属性腺、肾上腺、垂体、胸腺、唾腺、骨髓、淋巴结和肌肉等脏器组织中的活性均迅速达到各自的高峰水平。以后标记物逐渐扩布至全身。14天后,活性明显下降。19天后,活性已不易追踪。未见有长期定位的累积现象。累加服药组的吸收和分布状态与一次服药组基本相同。2.定位于各脏器组织中的标记物活性强度以消化道为最高,其次为肝脏。以下的大体顺序为:脾、淋巴结>心、肾、垂体、肾上腺、骨髓>唾腺、胸腺、肌肉、睾丸、附睾、附属性腺、胰、肺>血液> 膀胱>脑及骨髓。骨质在后期活性略有升高。脑和脊髓的活性反应微弱,可能与血脑屏障的保护性作用有关。3.脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓和各脏器中的网状内皮系细胞(枯否氏细胞、尘细胞、淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等)均呈现高强度的放射活性。表明网状内皮系统可能参与清除棉酚的解毒过程。4.实验中出现较高活性分布的心、肝、脾、肾、肺、胰、骨髓等主要脏器组织均未见有细胞病理改变,而处于中等活性水平的睾丸曲细精管则出现明显的细胞损伤。表明生精上皮细胞对棉酚的敏感性较其他脏器组织为高。毒性反应与剂量水平在一定范围内似无正比相关,而与细胞的敏感性和耐受性的高低则有密切关系。5.与生殖及水盐代谢有关的内分泌腺:肾上腺、垂体和睾丸间质细胞均有较高的放射活性。丘脑下部有关核团及正中隆突亦有微弱的活性定位。提示了棉酚在某种条件下对上述内分泌激素分泌及植物性神经中枢产生影响的可能性。6.本报导联系临床上出现的口干、乏力及过渡性肝功能和心电图异常等毒性症状与相应脏器(唾腺、肌肉、肝及心脏)中标记棉酚活性分布的状态及其间的可能相关予以讨论。     

LH-RH九肽类似物抑制蜕膜形成机理的研究——Ⅰ.对妊娠大白鼠的实验

丘脑下部促黄体素释放激素(LH-RH)对垂体促性腺激素生理功能的调控已有大量系统研究。近几年来,不少报道指出,LH-RH及其类似物有显著的抗妊娠作用。根据Corbin和Beattie(1975)的报道,大鼠在受孕1—7或7—12天间,每天注射高剂量LH-RH,结果受试动物终止了妊娠。Lin等(1976)从大鼠受精第一天开始每日注射高剂量LH-RH,连续注射7天或9天,发现受精卵着床延缓。而如果在妊娠6—B天注射则无影响,或效果甚微(Humphrey等1977)。另外,Hilliard(1976)对家兔的实验指出,孕后3—6天每日注射高剂量LH-RH,并不妨碍受精卵着床;若在8—13天注射则可引起超排     

促黄体素释放激素类似物抗早孕机理的分析

近几年在动物实验中发现大剂量的促黄体素释放激素(LH-RH)及其高活性类似物能抑制生殖系统的机能,并且有抗生育作用。我们实验室曾报道,给大鼠大剂量使用一种LH-RH的高活性类似物([D-Ala~(?)des-Gly NH_2~(10)]-LHRH-ethylamide)具有明显的抗早孕作用(袁其晓等,1978)。尽管许多研究者对于大剂量LH-RH抑制生殖系统及抗早孕作     

~(125)Ⅰ—蜂毒肽在小鼠体内分布、吸收、排泄的研究

以氯胺T为氧化剂参照Hunter和Greenwood的多肽类化合物的碘化标记法,制备了~(125)I—标记的蜂毒肽在小鼠体内分布、吸收、排泄的研究,实验证明小鼠肌注~(125)I—蜂毒肽后,吸收很快,主要分布部位为肾、肺、心、肝、小肠、关节、脾与肌肉,脑组织中含量很少,肌肉注射后5分钟血液中含量可达70％,~(125)—I蜂毒肽主要经肾排泄,肌注后30分钟肾脏浓集最高,而尿液中以1.5小时为最高,而粪便中排泄少。     

LH-RH及其类似物的垂体外作用

经典的看法认为下丘脑分泌的黄体生成素释放激素(LH-RH)仅仅作用于垂体,调节促性腺激素的释放。但是,目前又有许多新的实验结果证明,LH-RH 及其高活性类似物具有垂体外抑制作用,从而动摇了最初的一些观     

鸡胚肝凝集素受体的放射自显影和扫描电镜观察

近些年来用标记过的外源凝集素作探针以研究细胞膜的结构和功能已取得很大进展。本文首次用~(125)I标记鸡胚肝凝集素,再以~(125)I-凝集素亲和标记鸡胚肝细胞。标记的鸡胚肝细胞经放射自显影(ARG),可用扫描电镜(SEM)对细胞表面受体的位点进行直接观察,以研究鸡胚肝凝集素受体的分布特征。     

新合成一种与心肌腺苷酸受体特异结合的放射性配基

腺苷酸对心肌收缩有明显影响,但心肌腺苷酸受体的含量很少,只达脑组织的1/25左右。因此,~3H-环己基腺苷酸、~3H-2-氯腺苷酸及~(125)I-羟苯异丙基腺苷酸(~(125)I-HPIA)等放射性配基虽广泛应用于研究脑组织的腺苷酸受体,但这些放射性配基与心肌膜制备结合时的非特异与特异结合比太高,因而很难应用于心肌腺苷酸受体研究。最近,美国Oklahoma医学研究基金会的Linden等自腺苷酸经N~6-4-硝基苯腺苷酸(N~6-4-Nitroben-zyladenosine)合成N~6-4-氨苯腺苷酸(N~6-4-aminobenzyladenosine,ABA),再以~(125)I标记,得到一种新型的腺苷酸受体放射性配基~(125)I-氨苯腺苷酸(~(125)I-ABA),并在大鼠心、脑等膜制备与~(125)I-HPIA进行了     

糖尿病大鼠的SOD活性与抗氧化剂治疗对机体抗氧化状态的影响

目的探究糖尿病大鼠主要脏器SOD活性及蛋白表达水平的变化,并观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)短期治疗(4周)后对机体抗氧化状态的影响。方法 STZ诱导的糖尿病大鼠(D组,n=8)每天给予NAC 1.5 g/kg灌胃治疗(D+N组,n=8),正常对照组(C组,n=8)同时给予同体积生理盐水。4周后,获取心、肺、肝、肾组织,试剂盒检测血浆总SOD、总抗氧化物浓度、脂质过氧化特异性标志物15-F2t-isoprostane及各组织总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blotting分析SOD亚型Cu/Zn-SOD及MnSOD蛋白表达水平。结果与C组相比,D组大鼠血浆15-F2t-isoprostane与总抗氧化物浓度及心肌组织中总SOD活性显著升高,而血浆、肺、肝、肾组织总SOD活性显著降低;心、肺组织中Cu/Zn-SOD蛋白表达水平明显升高,而肝、肾组织中明显降低;肺、肾组织中Mn-SOD蛋白表达水平明显降低,而肝组织明显升高,但心肌组织变化不明显。NAC干预能不同程度逆转上述改变,但进一步降低肾组织Mn-SOD表达。结论糖尿病大鼠各组织中总SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达水平具有组织差异性,抗氧化剂NAC能不同程度恢复糖尿病大鼠各组织抗氧化水平,从而起到阻止或延缓糖尿病相关的靶器官功能损害的作用。     

DBP致雌性仔鼠卵巢的氧化应激及VC的干预作用

为探明邻苯二甲酸二丁酯(DBP)宫内暴露对雌性仔鼠卵巢脂质过氧化水平的影响及维生素C(Vit C)的抗氧化应激作用。本研究将20只Wistar孕鼠随机分为5组,分别为高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP染毒组以及高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP+Vit C(125 g/L)干预组和对照(玉米油)组,每组4只。自妊娠第1~19天,每天1次灌胃染毒DBP(10 m L/kg);采用自由饮水方式进食Vit C(约40 m L/d)。待雌性仔鼠出生21 d时,取其卵巢组织,称重,并测定MDA、GSH含量和GSH-Px、SOD、CAT活性。研究发现,与对照组相比,高、低剂量DBP染毒组MDA含量均明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活性均明显降低(p0.05)。高、低剂量DBP+Vit C干预组的仔鼠卵巢组织中MDA含量与相同剂量DBP染毒组相比显著下降,GSH-Px、SOD、CAT活性显著升高(p0.05)。综上所述,DBP宫内暴露可致雌性仔鼠卵巢组织产生脂质过氧化反应,诱导氧化应激,造成潜在生殖毒性,抗氧化剂Vit C对于DBP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的保护作用。这为进一步开展DBP生殖发育毒性的机制研究和预防干预提供理论依据。     

养殖半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的组织化学定位

目的研究半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POX)的分布及组织定位。方法取健康半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心组织进行固定,冰冻切片后进行酶组织化学染色和光密度定量统计分析。结果 ACP活性部位为棕色,主要分布于肝胰小叶间胆管和静脉,中肾肾小体中的肾小球和肾间质的肾小管,头肾和脾中的巨噬细胞以及心肌层中,在鳃中未见有分布;ALP活性部位被染为蓝紫色,主要分布于肝胰的胰腺腺泡内,中肾肾间质的肾小管,鳃的鳃丝血管和上皮细胞,脾静脉的管壁处和椭圆体,心外膜和肌膜上以及头肾的血窦腔内皮;POX活性部位被染为茶褐色,主要分布于肝胰小静脉和肝血窦内的血细胞,中肾肾间质的血细胞,鳃的鳃丝血管、鳃小片血窦和上皮细胞,头肾、脾内的血细胞以及心的心肌层和血细胞中。ACP活性由大到小依次为心、肝胰、脾、中肾、头肾;ALP活性由大到小依次为中肾、鳃、头肾、脾、心、肝胰;POX活性由大到小依次为脾、头肾、肝胰、中肾、鳃、心。结论 ACP、ALP和POX在半滑舌鳎6种组织中分布特点不同,其活性大小在不同组织中有显著差异。     

天门冬纳米制剂对小鼠抗氧化系统的影响

目的:探讨中药天门冬及其纳米制剂对小鼠心肌线粒体中超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,观察纳米制剂能否更有效地改善机体的抗氧化能力.方法:采用D-半乳糖致衰老小鼠分别ig相同剂量的天门冬水提液及其纳米中药15 d,测定衰老小鼠心肌线粒体中SOD活性、MDA含量及肝组织中GSH-Px活性.结果:天门冬水提液及其纳米中药均能显著增强天门冬及其纳米中药均可提高小鼠心肌线粒体中SOD的活性(P<0.01),肝组织GSH-Px活性(P<0.01),降低心肌线粒体中MDA(P<0.05),且纳米中药的药效强于天门冬水提液的药效(P<0.01).结论:天门冬纳米制剂抗氧化能力优于天门冬超声波水提液.     

^125I标记白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶代谢动力学研究

研究白眉蝮蛇(Agkistrodon halys ussuriensis)毒精氨酸酯酶的代谢动力学,为临床应用提供依据。125I标记的精氨酸酯酶对大鼠一侧颈静脉给药,不同时间从另一测颈静脉取血。5h后处死动物,取各组织、尿液、胆汁和粪便,对各样本的放射性进行测定并拟合时间-放射性关系曲线。代谢动力学拟合曲线符合一室模型,其中生物半衰期T1/2为55.9min,K值为0.0124min-1。125I标记的精氨酸酯酶在体内各组织广泛分布,但有血脑屏障存在,肝、肾和尿液中的放射性比其它组织要高很多,主要通过肝脏降解,肾脏排泄。     

125 I标记白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶代谢动力学研究

研究白眉蝮蛇(Agkistrodon halys ussuriensis)毒精氨酸酯酶的代谢动力学,为临床应用提供依据。125I标记的精氨酸酯酶对大鼠一侧颈静脉给药,不同时间从另一测颈静脉取血。5h后处死动物,取各组织、尿液、胆汁和粪便,对各样本的放射性进行测定并拟合时间-放射性关系曲线。代谢动力学拟合曲线符合一室模型,其中生物半衰期T1/2为55.9min,K值为0.0124min-1。125I标记的精氨酸酯酶在体内各组织广泛分布,但有血脑屏障存在,肝、肾和尿液中的放射性比其它组织要高很多,主要通过肝脏降解,肾脏排泄。     

蒙药乌力吉-18对大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体表达的影响

目的:探讨蒙药乌力吉-18对大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体的影响。方法:选取40只健康雌性未孕SD大鼠,随机分为空白组、对照组、乌力吉-18高、低2个剂量组,每组10只。空白组灌胃等体积蒸馏水,对照组灌胃逍遥丸,高、低剂量组分别灌胃2.0 g·kg^-1·d^-1、1.0 g·kg^-1·d^-1乌力吉-18,连续给药31学艺术d。采用酶联免疫吸附法测定血清促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E₂)及孕酮(PROG)的含量;免疫组化法检测下丘脑组织促性腺激素释放激素(GnRH)、垂体组织促性腺激素释放激素受体(GnRHR)的表达;以蛋白免疫印迹技术检测卵巢组织促卵泡生成素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白表达量。以实时荧光定量PCR检测卵巢组织中FSHR、LHR基因表达量。结果:与空白组比较,乌力吉-18低剂量组可明显升高血清LH含量(P<0.05),上调下丘脑组织GnRH、垂体组织GnRHR表达及卵巢组织FSHR、LHR蛋白表达(P<0.05);乌力吉-18高剂量组可显著升高血清FSH、LH、E₂含量(P<0.05),上调下丘脑组织GnRH表达及卵巢组织FSHR表达量(P<0.05),并可显著升高卵巢组织中FSHR、LHR基因表达量(P<0.05);对照组可明显升高血清E₂含量(P<0.05)。结论:蒙药乌力吉-18可明显升高血清FSH、LH及E₂的含量,促进下丘脑组织GnRH、垂体组织GnRHR及卵巢组织中FSHR、LHR的表达,表明乌力吉-18能够对下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体表达产生影响。