鸡痘的诊断与防治技术研究

鸡痘是危害养鸡业发展的一种传染病,不分日龄大小均可发病,肉鸡和蛋鸡均可感染,发病期1-2周,雏鸡死亡率较高,可达5%～30%不等[1],近年来发病率和死亡率有上升趋势,并且免疫失败的病例时有发生[2].为了建立接种疫苗后抗体监测手段和研究感染鸡痘病毒后抗体产生规律,我们建立了间接ELISA检测鸡痘病毒抗体的方法,进一步做了中和试验和用阳性血清治疗鸡痘的试验,报告如下.     

抗RA33 抗体与幼年特发性关节炎的诊断意义

目的:通过检测幼年特发性关节炎(JIA)患者血清中的抗RA33抗体,了解抗RA33抗体与幼年特发性关节炎的临床诊断价值。方法:采用酶联免疫固相分析检测81例JIA患儿(女19名,男62名,平均年龄8.6岁,平均病程1.4年)血清中抗RA33抗体、RF,同时以55例儿童系统性红斑狼疮(SLE)等其他关节性疾病或病毒感染患者和49例健康儿童作为对照组。阴阳性结果判断均采用试剂盒推荐的临界值。结果:81例JIA患儿中抗RA33抗体阳性率为11.11%(9/81),RF阳性率为12.35%(10/81),特异性均为91.35%;JIA组与正常对照组抗RA33抗体阳性率比较有统计学意义(P<0.05),与其他关节性疾病对照组比较差异无显著性(P>0.05)。JIA组中抗RA33抗体的检出与RF无相关性(P>0.05);在JIA各亚型中抗RA33抗体主要存在于全身型和多关节型,各占33.3%和25.0%,RF则只出现于多关节型,占62.5%。两者比较有显著性差异(P<0.05)。81例JIA患儿中共有18例关节出现影像学改变,其中4例抗RA33抗体阳性(22.2%),与未发生影像学改变的JIA患儿比较无显著性差异(P>0.05)。结论:抗RA33抗体尚不能作为JIA早期诊断的新的可靠性指标,抗RA33抗体主要见于全身型和多关节型,对JIA的分型有指导意义。     

抗RA33抗体与幼年特发性关节炎的诊断意义

目的：通过检测幼年特发性关节炎（JIA）患者血清中的抗RA33抗体,了解抗RA33抗体与幼年特发性关节炎的临床诊断价值。方法：采用酶联免疫固相分析检测81例JIA患儿（女19名,男62名,平均年龄8.6岁,平均病程1.4年）血清中抗RA33抗体、RF,同时以55例儿童系统性红斑狼疮（SLE）等其他关节性疾病或病毒感染患者和49例健康儿童作为对照组。阴阳性结果判断均采用试剂盒推荐的临界值。结果：81例JIA患儿中抗RA33抗体阳性率为11.11%（9/81）,RF阳性率为12.35%（10/81）,特异性均为91.35%;JIA组与正常对照组抗RA33抗体阳性率比较有统计学意义（P〈0.05）,与其他关节性疾病对照组比较差异无显著性（P〉0.05）。JIA组中抗RA33抗体的检出与RF无相关性（P〉0.05）;在JIA各亚型中抗RA33抗体主要存在于全身型和多关节型,各占33.3%和25.0%,RF则只出现于多关节型,占62.5%。两者比较有显著性差异（P〈0.05）。81例JIA患儿中共有18例关节出现影像学改变,其中4例抗RA33抗体阳性（22.2%）,与未发生影像学改变的JIA患儿比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：抗RA33抗体尚不能作为JIA早期诊断的新的可靠性指标,抗RA33抗体主要见于全身型和多关节型,对JIA的分型有指导意义。     

幽门螺旋菌感染血清学诊断

运用建立起来的酶联免疫吸附试验对80名胃镜确诊胃炎及消化性溃疡患者的血清中抗幽门螺旋菌(Helicobacter pylori)IgG、IgA IgM进行了检测。结果表明,抗H.pylori IgG、IgA都可作为H.pylori感染的指标,但前者敏感性较好(92.0%),后者特异性较高(94.4%);抗H.pyloriIgM升高和降低与H.pylori感染无明显关系。抗H.pylori IgG、IgA水平与H.py     

抗肺炎支原体卵黄抗体的制备及其免疫特性

目的制备抗肺炎支原体卵黄抗体,并研究其免疫特异性。方法以超声粉碎法制备肺炎支原体抗原;以ELISA法测定卵黄抗体的效价及免疫特异性;以水稀释法联合疏水层析的方法分离纯化卵黄抗体;应用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度;改良Lowry法测定蛋白含量。结果低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答,高剂量组免疫效价高于低剂量组。高剂量组于初免疫后约50d抗体效价达高峰,持续约2个月;而低剂量组在初免疫后约60d抗体效价达高峰,持续约1个月。之后效价逐渐下降,在免疫约120d,高剂量组由13log2下降到10log2;而低剂量组则由11log2下降到7log2。以水稀释法联合疏水层析法制备了电泳纯抗肺炎支原体IgY,分子量约178KD,平均每1ml卵黄液可获得较纯抗体6.4mg。制备的IgY与肺炎支原体具有较高特异性,与解脲支原体和人型支原体无明显交叉反应,与生殖支原体有轻度的交叉反应。结论本研究初步制备了抗肺炎支原体卵黄抗体,为肺炎支原体的防治与检测提供新的途径。     

抗柞蚕核型多角体病毒病免疫卵黄抗体制备和防治效果研究

柞蚕脓病是柞蚕Antheraea pernyi养殖面临的主要病害之一。卵黄球蛋白作为来源丰富的多克隆抗体,提供了一种经济、安全、高效的动物疾病防治手段。本研究使用柞蚕脓病病原柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)免疫产蛋母鸡,制备抗Ap NPV免疫卵黄抗体(Ig Y),并测定了Ig Y对柞蚕的安全性;随后饲喂试验确定了Ig Y的最佳稀释倍数;探索添食Ig Y对柞蚕脓病的预防和治疗效果。结果显示:(1)免疫抗原后6～8周收集的Ig Y具有最高效价,达到1∶210;(2)安全性试验未发现不良影响,且Ig Y最佳稀释倍数为64倍;(3)同时饲喂Ig Y和病毒处理的叶片时,柞蚕脓病发病率显著降低,对柞蚕脓病抑制效果最佳;先饲喂病毒叶后给予Ig Y叶也有一定的效果。研究结果表明,抗Ap NPV Ig Y对柞蚕脓病具有防治作用,为柞蚕脓病的防治探索了一条新途径。     

严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒抗体的检测及其临床意义

To investigate the k inetics of antibody to SARS coronavirus in SARS patients and its clinical implication,ELISA was used to dete ct antibody to SARS coronavirus(SA RS CoV),RT-PCR was used to detect the SARS CoV RNA and,besides,the C D+4 and CD+8 T cells in peripheral blood of SARS patients and healthy controls were assayed by flowcytom etryThe results showed that SARS CoV IgM were first detected from da y 7 to day 47 after SARS onset,wit h average at day 193±101SARS Co V IgG were first detected from day 4 to day 47 after SARS onset,with average at day 207±101,and the p roduction of SARS CoV IgG was corr elated with CD+4 T cell number(P<005),but had no relationship with SARS CoV RNAMost SARS patients pr oduced SARS CoV antibody,IgM produ ced almost at the same time wit h IgGSARS CoV IgG is a protective antibody against SARS CoV and the titer of IgG may be used as an ind ex indicating the specific immunit y production in SARS patients     

鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性

目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。方法 拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体IgY。采用间接ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。结果 ELISA显示免疫后12天开始出现特异性抗体,且抗体滴度逐渐升高,约在免疫后60天左右,最高可达1：100000,此最高滴度可维持30天,以后滴度逐渐降低,至免疫后100～110天,滴度仍可维持在最高滴度的一半(1：50000)。此抗体在10～65℃温度范围内活性保持稳定;在pH为4～12范围内,抗体活性稳定;此抗体经胰蛋白酶处理1h内,活性下降不明显,但1h以后活性迅速下降。结论从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体IgY,是可行的,稳定的。     

麻疹疑似病例血清学与病原学检测结果比较

目的 分析麻疹疑似病例血清学和病原学的检测结果,比较两种检测方法,为麻疹的早期诊断提供实验室支持。方法 同时采集2017‒2018年北京市海淀区麻疹疑似病例的血清和咽拭子标本,用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清中的麻疹IgM抗体,用荧光定量PCR（Real-time PCR）方法检测咽拭子标本中的麻疹病毒核酸。结果 血清IgM抗体检测阳性率为11.54%,Real-time PCR法检测阳性率为44.23%,其检测阳性率显著高于血清检测阳性率,差异有统计学意义（2=13.82,P0.05）。血清学检测敏感性为25.00%,病原学检测敏感性为95.83%,两种检测方法的阳性符合率为21.74%,阴性符合率为96.55%,总符合率为63.46%。ELISA和Real-time PCR法对有免疫史的病例检测阳性率分别为18.75%和37.50%,两种检测方法的阳性率差异无统计学意义（2=1.39,P>0.05）;对无免疫史或免疫史不详病例检测的阳性率分别为8.30%和47.20%,两种检测方法的阳性率差异有统计学意义（2=13.57,P<0.01）。结论 Real-time PCR方法检测的阳性率和灵敏度均高于血清学检测方法,可以在日常检测工作中作为常规方法推广,无论采用哪种检测方法,应在出疹3 d内采集样本。     

斑点ELISA法检测幽门螺旋菌感染的研究

用幽门螺旋菌(HP)的超声粉碎物为抗原,建立了斑点ELISA法检测人血清中抗HP—IgG方法。该法敏感性为94.4％,特异性为87.5％,阳性预测值为97.1％,阴性预测值为77.8％。对271例儿童抗HP抗体调查,发现HP感染与儿童性别无关(P>0.05)。1月以内新生儿抗体检出率59.4％,1～12月婴儿抗体检出率最低(29.1％),1岁后开始逐渐上升,2岁后即可达到50％以上,接近成年人水平。结果表明,我国HP感染年龄早,感染率高。     

传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因在重组禽痘病毒中共表达

在重组禽痘病毒中表达多个禽类病原的主要免疫原基因是构建多价基因工程疫苗的前提,但相关研究很少。在表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因重组禽痘病毒的转移载体的基础上,构建了含有ILTV gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组禽痘病毒转移载体pSY-gB-F,采用脂质体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维(CEF)细胞后,通过蓝斑试验筛选出重组禽痘病毒(rFPv-gB-F),并进行了6轮蚀斑纯化。Western-blot试验和间接免疫荧光试验证明ILTV gB基因和NBVF基因在rFPV-gB-F感染的CEF细胞中获得表达。为传染性喉气管炎、新城疫与鸡痘活载体多价疫苗的研制奠定基础。     

鸡痘病毒表达载体的构建Ⅰ、鸡痘病毒282E_4株基因组PstⅠ、HindⅢ酶切片段的克隆及酶切分析

本文介绍了鸡痘病毒２８２Ｅ４株基团组ＰｓｔⅠ片段、ＨｉｎｄⅢ片段的克隆和鉴定,以及部分克隆的限制性内切酶分析。鸡痘病毒基因组经酶切、克隆分别得到３４９个、２７７个白色菌落,经质粒电泳、菌落杂交筛选分别得到２８６、２３４个重组菌落,再经酶切、斑卢、杂交鉴定,证明了所克隆的确为鸡痘病毒的ＰｓｔⅠ、ＨｉｎｄⅢ片段。最后经单、双酶切分析,得到了５个ｐＦＰ、５个ｐＦＨ克隆的物理图谱。     

鸡痘病毒复制非必需区的选择对重组鸡痘病毒免疫效力的影响

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区的两个侧翼区FPV1和FPV2 ,利用此假定复制非必需区构建FPV表达载体pP12LS及表达ZJ1株新城疫病毒(NDV)F基因的转移载体pP12LSF。pP12LSF与2 82E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒rFPV_FSC。重组FPV在CEF上连续传2 0代仍具有良好的遗传稳定性。对重组FPV进行免疫效力试验,在SPF鸡上,重组病毒rFPV_FSC和与之仅有复制非必需区差异的rFPV_FSB均能抵抗NDV强毒的攻击,提供10 0 %的保护。但在有母源抗体的商品鸡上,rFPV_FSC与rFPV_FSB的免疫效力却有显著差异,保护率分别为10 0 %和6 1 5 4 % ,rFPV_FSC的免疫效力与NDV常规油苗相当。试验结果表明,母源抗体对重组FPV的免疫效力有一定的影响,而选择合适的FPV复制非必需区是克服母源抗体并提高重组FPV免疫效力的有效策略之一     

Metal Cofactors in the Structure and Activity of the Fowlpox Resolvase

Poxvirus DNA replication generates linear concatemers containing many copies of the viral genome with inverted repeat sequences at the junctions between monomers. The inverted repeats refold to generate Holliday junctions, which are cleaved by the virus-encoded resolvase enzyme to form unit-length genomes. Here we report studies of the influence of metal cofactors on the activity and structure of the resolvase of fowlpox virus, which provides a tractable model for in vitro studies. Small-molecule inhibitors of related enzymes bind simultaneously to metal cofactors and nearby surface amino acid residues, so understanding enzyme-cofactor interactions is important for the design of antiviral agents. Analysis of inferred active-site residues (D7, E60, K102, D132, and D135) by mutagenesis and metal rescue experiments specified residues that contribute to binding metal ions and that multiple binding sites are probably involved. Differential electrophoretic analysis was used to map the conformation of the DNA junction when bound by resolvase. For the wild-type complex in the presence of EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) or Ca²⁺, migration was consistent with the DNA arms arranged in near-tetrahedral geometry. However, the D7N active-site mutant resolvase held the arms in a more planar arrangement in EDTA, Ca²⁺, or Mg²⁺ conditions, implicating metal-dependent contacts at the active site in the larger architecture of the complex. These data show how divalent metals dictate the conformation of FPV resolvase-DNA complexes and subsequent DNA cleavage.     

重组鸡痘病毒和DNA疫苗对口蹄疫病毒的豚鼠免疫保护

将构建的携带FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C编码基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及编码FMDVP1-2A基因和猪IL-18基因的重组DNA疫苗pVIRIL18P1,分别以单独和混合的方式给豚鼠进行2次免疫,然后测定FMDV特异性结合抗体、中和抗体和T淋巴细胞增殖反应,并用250ID50的FMDV进行攻击,观察其保护效果。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导豚鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答。其中以vUTAL3CP1两次免疫组的效果最好,其诱导的抗体水平已接近于常规灭活疫苗,而细胞免疫水平则比后者高得多。攻击保护结果表明该组完全保护率可达3/4,而另外两组也具有一定保护效果。上述研究结果为进一步进行大动物免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。     

Comparison of Three ELISA Kits for the Differentiation of Foot-and-mouth Disease Virus-infected from Vaccinated Animals

A study was performed to validate 3 FMDV 3ABC-I-ELISA kits developed in China for the differentiation of FMDV infected and vaccinated animals.Sets of sera from naive and vaccinated cattle as well as from cattle that had been infected were tested for antibodies against nonstructural proteins (NSPs) of FMDV by commercial diagnosis kits,Ceditest(R)FMDV-NS (Ceditest(R) kit),UBI(R) FMDV NONSTRUCTURAL PROTEIN ELISA DIRECTION INSERT (UBI(R) kit) and a FMDV 3ABC-I-ELISA kitdeveloped at the Lanzhou Veterinary Research Institute.The test parameters (sensitivity and specificity) of the three kits were determined,and the result obtained from FMD 3ABC-I-ELISA kit was compared with that obtained from two foreign kits.The results indicated that the coincidence rate between the FMDV 3ABC-I-ELISA and Ceditest(R) kits was 98.05%,and the coincidence rate between the FMDV 3ABC-I-ELISA and UBI(R) kits was 94.4%; the sensitivity of both Ceditest(R) and FMDV 3ABC-I-ELISA kit was 100%.However,the sensitivity of the UBI(R) kit was only 81.8%.With sera from naive or vaccinated non-infected animals,the specificity of all tests exceeded 90%.     

兔出血症细小病毒血清学的研究

应用免疫双扩散和酶联免疫吸附分析(ELISA)对七个不同地区兔出血症病原分离物进行了血清学比较研究。本试验用免疫双扩散和ELISA,证明七个兔出血症病毒分离物之间存在着基本相同的血清学关系,其中A_2R—3和H.E.二株抗原之间存在较大差异.证实我国流行的兔出血症病毒属于一个血清型,但不同地区的分离株可能出现亚型。     

传染性法氏囊病不同代次细胞毒免疫效果的研究

将从山东省东营分离到的1株传染性法氏囊病病毒(IBDV)野毒(暂命名 IBDV SDDY株,经鉴定该株与 IB DV STC株具有较高的同源性)经 SPF 鸡胚传代,然后转为细胞培养,取第 20 代、21 代、25 代毒,以 1 倍剂量(3000TCID50/0.2mL )和5倍剂量不同的免疫剂量,分别在7日龄、14日龄对商品代海蓝褐蛋鸡进行免疫,并于免疫前用 IBD ELISA试剂盒检测 IBDV母源抗体水平,于 35 日龄用传染性法氏囊病病毒超强毒 (very virulent In fectious Bursal Disease Virus, vvIBDV )GX 8/99攻毒,在攻毒前再次检测IBDV的抗体水平,攻毒后观察记录各分组鸡的致病率和死亡率,并计算免疫器官体重指数,观察免疫器官的组织损伤情况。试验结果表明:3 代毒都具有较高免疫原性,但是20代毒仍具有较大的毒性,7 日龄接种会引起法氏囊的萎缩,造成持续的组织损伤;21 代毒、25代毒保护率高,无免疫抑制,是比较理想的疫苗来源;7日龄免疫较14日龄免疫更易造成组织损伤和免疫抑制,14日龄免疫较为合适。     

B Cell Epitopes within VP1 of Type O Foot-and-mouth Disease Virus for Detection of Viral Antibodies

In this study,the coding region of type O FMDV capsid protein VP1 and a series of codon optimized DNA sequences coding for VP1 amino acid residues 141-160(epitope1),tandem repeat 200-213(epitope2(+2)) and the combination of two epitopes(epitope1-2)was genetically cloned into the prokaryotic expression vector pPROExHTb and pGEX4T-1,respectively.VP1 and the fused epitopes GST-E1,GST-E2(+2)and GST-E1-2 were successfully solubly expressed in the cytoplasm of Escherichia coli and Western blot analysis demonstrat...