绿脓杆菌定值,定位,定性检测技术研究

为建立组织内细菌的定植、定位及定性检测方法,实验专用对绿脓杆菌定性、定量培养的DPA培养基,解决了同时定性、定量培养的难题,实验结果表明,同一标本有多个同种细菌生长可判定细菌定植。方法简单、可靠、重复性好。     

扁桃体感染的细菌学定性与定量分析

扁桃体感染的细菌学定性与定量分析中国医科大学第二临床学院检验科沈阳１１０００３刘勇,孙继梅耳鼻喉科粱红军大连科达药业有限公司王红为了解扁桃体感染的细菌种类及各种细菌的数量,对３９例扁桃体感染病人进行扁桃体表面的细菌学定性及间质的细菌学定量培养分析。１...     

烫伤创面绿脓杆菌定植动态的实验研究

本文从细菌以多细胞生理活动观点出发,以认识定植稳定过程为目的。进行了实验大白鼠烫伤创面绿脓杆菌定植与抗定植动态观察。通过用铁浸染色法对细菌群体结构定量化研究,用糖包被负染法对群体结构内部结构观察,对粘附在组织表面细菌数量的测定,反映结构与粘附力的关系。进一步结合电镜观察及细菌生长状态的分析,证明了烫伤创面上绿脓杆菌群体结构的形成是细菌分裂繁殖所致。通过群体结构,糖包被,粘附力及生长状态的动态观察,表现出与定植的稳定程度呈平行关系,显示其重要性。联系抗定植力研究,表明定植与抗定植的一致性。最后分析了定植三个主要条件,和稳定性定植的三要素。     

水稻种子内生细菌多样性及其分泌植物生长素能力的测定

[目的]探讨水稻种子内生细菌的多样性并测定其分泌IAA能力.[方法]采用传统的可培养方法分离水稻种子内生细菌,并通过16S Rrna基因序列分析初步确定分离菌株的系统发育地位,利用比色法进一步对不同种类菌株产植物生长素(IAA)能力进行定性、定量检测.[结果]共分离纯化获得66株内生细菌菌株,分属于5个类群的15个属26个种.以26株细菌为代表对其进行分泌生长素(IAA)能力的定性及定量测定,共发现19株细菌可分泌生长素或其类似物,其中Z10、Z17、Z14和Z20 4株内生细菌具较强的分泌植物生长素能力.[讨论]分离得到的内生细菌表现了水稻种子内生细菌的多样性,其中某些细菌对植物有一定的促生功能.     

对虾白斑综合征病毒基因组快速定性定量方法的建立

对于对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)全基因组样品,使用限制性内切酶酶切以及荧光绝对定量的方法进行分析,建立了WSSV全基因组快速定性定量的方法。定性实验通过对GenBank中WSSV基因组序列深度分析,选择确定合适的限制性内切酶BamHI对基因组进行酶切,通过比对实际酶切结果和软件模拟酶切结果,以定性待测样品。定量实验使用荧光定量试剂盒,通过建立标准曲线的方法对未知浓度的WSSV基因组样品进行绝对定量。实验结果表明,结合使用酶切分析和荧光定量的方法可以准确、快速、方便、经济地对WSSV基因组样品进行定性定量分析,为进一步深入研究WSSV基因组奠定坚实基础。     

双歧杆菌QJ405、乳杆菌QJ405在试管内对肠道致病菌抑杀效果的初步报告

目的 观察双歧杆菌ＱＪ４０５和乳杆菌ＱＪ４０５在试管内对肠道致病的抑菌和杀菌效果。方法 抑菌实验：实验组,双歧杆菌ＱＪ４０５和乳杆菌ＱＪ４０５分别与各致病菌共同培养;对照组,实验组中的细菌各自单独培养。然后观察一定间隔时间（每２ｈ或４ｈ）细菌的数量变化,并绘制生长曲线。杀菌实验：将２种菌的培养上清液定量滴在已均匀涂布定量致病菌的平板表面,然后观察滴过上清液的区域内是否有细菌生长。结果：４种肠道致病菌和２株标准菌株（ＡＴＣＣ２５２９２２,ＡＴＣＣ２５９２３）的生长明显受到抑制。乳杆菌ＱＪ４０５的代谢产物有杀菌作用。结论 双歧杆菌ＱＪ４０５和乳杆菌ＱＪ４０５具有益生菌的性质。     

慢性阻塞性肺病稳定期的下呼吸道细菌定植研究

目的 研究慢性阻塞性肺病(COPD)患者是否存在下呼吸道细菌定植,其对气道炎症的影响以及与急性加重之间的关系。方法 人选诊断明确的COPD稳定期患者,对其痰液及支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细菌学定量、定性分析,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)对痰液白细胞介素6(IL-6)、IL-8,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平检测。结果 46例中、重度COPD患者中,在稳定期和急性加重期,痰标本菌落计数＞10~6 CFU／ml分别为32．6％(15／46)和45．65％(21／46),BALF菌落计数＞10~3 CFU／ml则分别为44．4％(4／9)和54．5％(6／11),其中流感嗜血杆菌占首位,急性加重期菌落数显著高于稳定期,存在细菌定植的患者痰液中IL-6及TNFα的浓度显著高于无细菌定植的患者,细菌定植和IL-8呈显著正相关(P＜0．05)。结论 部分COPD稳定期患者存在细菌定植,细菌定植的患者可能通过菌落数量的增加和促使气道炎症反应而导致急性加重频繁。     

社区老年人上呼吸道定植菌调查及药敏分析

调查社区老年人上呼吸道的定植菌情况,能够了解引起社区老年人呼吸道感染的危险因素,分析主要定植菌的药敏结果,指导社区老年人呼吸道感染的经验治疗。取社区老年人咽喉部拭子进行细菌分离培养及鉴定,调查呼吸道定植菌情况,并对主要定植菌进行药敏试验,细菌鉴定应用法国生物梅里埃公司的细菌鉴定仪VITEK2和API系统,药敏试验采用K-B纸片琼脂扩散法,结果统计应用WHONET5.4软件。对706例社区老年人上呼吸道标本进行分离培养,有274份标本生长了致病菌或条件致病菌,其中248份标本有一种细菌生长,26份标本生长2种细菌,总体阳性率为38.8%。共分离9种细菌,居首位的细菌是肺炎克雷伯菌151株,占21.4%,其次为副流感嗜血杆菌74株,占10.5%,第3位的是β-溶血链球菌31株,占4.4%。75株肺炎克雷伯菌的药敏结果显示全部为敏感株,从药敏表型分析具有较高的同源性。老年人群上呼吸道定植菌以革兰阴性杆菌尤其以肺炎克雷伯杆菌为主,并对常用抗菌药物有高度敏感性,一旦发生定植菌感染应选择合适的抗菌药物并给予恰当的治疗方案,防止细菌产生耐药性。     

早晚牙菌斑变异链球菌定植差异的定量PCR检测

目的 采用实时荧光定量PCR检测白天和晚上所形成牙菌斑生物膜中变异链球菌的数量,比较早晚牙菌斑中变异链球菌定植的差异.方法 收集30名健康成人全口口腔洁治后白天和晚上形成的龈上菌斑,提取细菌基因组DNA.合成变异链球菌特异性引物,纯化PCR产物获得目的基因连接于pTA-TA载体,克隆于大肠埃希菌DH5 α感受态细胞.选取阳性克隆测序后纯化质粒DNA,获得质粒标准品.将样本和梯度稀释的质粒标准品进行SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测,确定标准曲线,定量样本中变异链球菌DNA的拷贝数.结果 早晚牙菌斑细菌基因组DNA样本的扩增曲线均在标准品的扩增曲线范围内.晚上所形成牙菌斑中定植的变异链球菌数量(对数值7.67 ±0.77)高于白天定植的变异链球菌数量(对数值7.25±0.62)(P =0.007).结论 牙菌斑的微生物定植存在日夜节奏变化,晚上所形成牙菌斑中变异链球菌数量多于白天.     

技术新趋势:微生物菌落计数和形态分析自动化

1 新趋势的背景 在常规的微生物学实验中常常需要对样品中的微生物进行定量或者浓度计算,众多微生物定量方法中最常用的就是对培养后的皮氏培养皿上所生长菌落进行总数统计的方法.其中菌落计数环节最耗费人力和影响准确性,已经成为利用平板菌落总数统计进行样本中细菌定量的速度瓶颈.     

细菌生长自限、节律及宏大运动的研究

采用波动培养及显微培养技术实验研究细菌生长自限、节律及宏大运动的关系。分析了奇异变形杆菌生长节律性及自限产生的环境条件,自限细菌的形态特征及群体细菌宏大运动现象。结果表明细菌生长自限是群体细菌生长节律性及宏大运动的基础。     

胃黏膜定植乳酸杆菌对幽门螺杆菌感染的影响

目的探讨胃黏膜定植乳酸杆菌对幽门螺杆菌感染及胃黏膜菌群数量的影响。方法收集130例慢性胃炎患者胃窦黏膜组织,病理学检测幽门螺杆菌,提取胃黏膜基因组DNA,采用荧光定量PCR法检测乳酸杆菌和总细菌数。结果幽门螺杆菌阳性组和阴性组的乳酸杆菌检出率和乳酸杆菌数(Log)差异均无统计学意义(P0.05);乳酸杆菌阳性者和阴性者之间胃黏膜总细菌数(Log)差异无统计学意义(P0.05);乳酸杆菌细菌数(Log)与胃黏膜总细菌数(Log)无显著相关性(P0.05);不同炎症程度胃炎患者乳酸杆菌检出率差异无统计学意义(P0.05);肠化组和未肠化组乳酸杆菌检出率差异无统计学意义(P0.05);但是重度胃炎组幽门螺杆菌感染率和总细菌数量均显著高于轻度(P0.05)和中度胃炎组(P0.05)。结论胃黏膜定植乳酸杆菌对幽门螺杆菌的感染无影响,其存在与否及细菌数量对胃黏膜总细菌数亦无明显影响,并与胃炎炎症程度及肠化无关。乳酸杆菌不能通过抑制幽门螺杆菌定植、调节胃黏膜菌群而减轻炎症反应。     

幽门螺杆菌感染Beagle犬动物模型的建立

建立幽门螺杆菌感染Beagle犬动物模型 ,为进行临床治疗及预防Hp感染研究提供实验基础。对Beagle犬进行一定程序的预处理后 ,口服灌喂Hp液体培养悬液。在以后不同时间段通过胃镜观察、组织培养、酶试验、粪便全菌ELISA检测、14 C 尿素呼气试验、PCR以及抗体检测等方法对Hp感染Beagle犬情况进行检测 ,观察细菌所引起的病理改变及定植时间。Beagle犬感染Hp数月后胃镜观察动物大体标本仍有病理改变 ;组织培养、酶实验、全菌检测及其它检测试验均阳性。Hp可以长时间定植于犬胃粘膜上并引起相应的病理改变 ,Beagle犬可以作为Hp感染动物模…     

海水亚硝酸氧化细菌初始富集过程中硝酸盐的定性检测

本文对海水亚硝酸氧化细菌初始富集过程中硝酸盐的定性检测方法及其适用范围进行了研究。结果表明, 在NaNO2起始浓度为100mg/L的亚硝酸氧化细菌初始富集培养系统中,1mL培养液中残余的NaNO2,可先用 1．0mol/L盐酸溶液20μL和50g/L氨基磺酸铵溶液10-20μL将其去除,然后再用二苯胺试剂对培养液中经亚硝酸 氯化细菌转化来的NaNO3进行定性检测,可检测出的NaNO3浓度下限在20mg/L左右。在NaNO2起始浓度不同的 富集培养系统中,去除NaNO2所需盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液的量可根据其起始浓度按比例相应增减,但NaNO2的 起始浓度不宜超过200mg/L。该方法亦适用于淡水亚硝酸氧化细菌初始富集培养过程中硝酸盐的定性检测。       

滇池沉积物中厌氧氨氧化细菌分布的时空差异

正厌氧氨氧化作用(Anaerobic Ammonia Oxidation,Anammox)是细菌在厌氧条件下,以NO_2~-为电子受体,以铵离子为电子供体的氧化还原反应[1]。厌氧氨氧化细菌的生长极为缓慢,只能在高菌体浓度时才显示其氨氧化活性,且对氧的存在十分敏感,所以传统的微生物纯化、分离和培养的方法并不适用于厌氧氨氧化细菌。由于微生物可培养技术的局限性,因此实时荧光定量PCR技术成为定量描述难培养微生物分布和丰度的有力手段[2]。宋亚娜等[3]。利用荧光定量PCR方法对土壤中厌氧氨氧化细菌进行了检测,但对于高原湖泊底泥中厌氧氨氧化细     

微生物学实验模块“蛋白酶产生菌的筛选、培养和选育”的教改研究与实践

围绕"蛋白酶产生菌的筛选、培养和选育"主线,设计了一个由5个相互关联、前后衔接、形成一体的实验组成的综合性研究型实验模块,并进行教学实践。它们是:培养基的配制、分装与灭菌;产蛋白酶细菌的分离与纯化;产蛋白酶细菌的培养发酵与条件优化;产蛋白酶细菌的鉴定;产蛋白酶细菌的紫外诱变育种。     

健康新生儿口腔微生物的早期定植研究

目的：观察母亲阴道细菌对其新生儿口腔微生物定植的影响,确定早期定植于新生儿口腔的细菌种类以及新生儿口腔的优势菌,观察不同喂养方式对新生儿口腔微生物的影响。方法：对刚出生的22名健康新生儿口腔及其母亲分娩前的阴道进行棉拭子取样,新生儿连续一周每天口腔取样,在需氧、兼性厌氧、厌氧条件下培养,检出细菌经形态学及生化鉴定。刚出生婴儿的口腔拭子及其母亲阴道拭子选用成品的CY酵母菌业色检测培养盒检测酵母菌。结果：剖腹生产的刚出生的健康婴儿口腔100％无菌,经产道生产的刚出生的健康婴儿口腔25％有菌;母亲阴道细菌Staphlococcus epidermidis(S.epidermidis),Streptococcus faecalis (S.faecalis),Lactobacilli spp.在经产道生产的刚出生的新生儿口腔中可以检出;45.5%新生儿出生后第二天可检出Streptococcus salivarius (S.salivarius)的定植,S.salivarius和Streptococcus mitis(S.mitis)为出生一周新生儿口腔的优势菌;9.1%的新生儿口腔中可检出厌氧菌Veillinella spp.。母乳喂养和人工喂养的新生儿口腔优势菌差异无显著性（P＞0.05),但人工喂养新生儿口腔中的S.epidermidis检出率和菌量均明显低于母乳喂养组（P＞0.05)。结论：母亲阴道细菌对经产道生产的新生儿口腔微生物的定植有一定影响,出生一周的健康婴儿口腔中的优势菌为S.salivarius和S mitis,Veillonella spp.,是最早定植在新生儿口腔中的厌氧菌,不同喂养方式对优势菌在新生儿口腔的早期定植无明显影响。     

幽门螺杆菌球形体回复原形的实验研究

目的对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）球形体进行体内、外回复原形的比较研究,揭示其潜在的传播途径。方法在布氏肉汤的基础上设计了4种Hp再生培养基,对Hp螺旋体、原生质体及球形体进行体外培养;同时采用30只蒙古沙土鼠（Mongolian gerbil）进行体内感染定植实验,对感染小鼠胃粘膜进行Hp定量培养和组织学检测。结果Hp球形体在4种再生培养基中均未能回复生长;而在感染小鼠的体内却观察到了Hp球形体的回复定植。Hp螺旋体感染组在小鼠胃内的定植密度较高,且胃粘膜下可见大量炎症细胞浸润;而球形体感染组并未见到小鼠胃粘膜组织的明显炎症损伤,且仅有少量回复的螺旋体定植。结论Hp球形体作为一种低水平代谢休眠体,代谢活性及毒力均有所减弱,但仍具有潜在的致病性。本研究支持部分Hp球形体具有活力但体外不能培养成活这一假说,提示＂粪-口＂传播应引起更多的关注。     

ICU气管切开患者下呼吸道定植菌分析及防治对策

目的了解重症监护病房气管切开患者下呼吸道定植菌(lower airway bacterial colonization,LABC)的病原菌分布和耐药谱,为临床诊断LABC提供参考依据,防止定植菌转变为致病菌提供临床防治方法。方法入选2008年10月至2011年6月入住ICU气管切开患者下呼吸道进行支气管肺泡灌洗,并对灌洗液进行细菌定量培养及抗菌药物敏感性测定。结果 180例气管切开患者LABC检出率高达85.2%,培养出定植菌232株,以革兰阴性菌(G-)为主,占78.8%,其中铜绿假单胞菌62株,居首位占26.7%;肺炎克雷伯杆菌36株,居第2占15.5%;其次为鲍曼不动杆菌(占12.1%)、大肠埃希菌(占8.2%)、洋葱伯克霍尔德菌(占4.3%)和嗜麦牙寡养单胞菌(占3.4%)。革兰阳性菌(G+)占14.7%,主要为金黄色葡萄球菌;真菌占6.5%,主要为白色假丝酵母菌属。耐药监测结果显示,革兰阴性菌均出现较强的耐药性。结论加强对气管切开患者LABC的监测与控制,加强肺部综合护理才能防止定植菌转变为致病菌,减少再次感染的发生。     

应用竞争PCR方法检测亚硝化细菌的研究

选用竞争PCR技术建立了亚硝化细菌的快速定量检测方法.实验以实验室分离、鉴定的一株亚硝化细菌提取的DNA为模板,设计特异性引物,制备特异性内标模板,进行竞争PCR实验;同时采用传统的平板计数法和吖啶橙荧光显微镜计数法两种方法进行细菌计数,与竞争PCR结果比较分析,建立了样品细菌数量与内标模板量的线性方程,并将其应用于海水养殖环境中亚硝化细菌的检测中.该方法具有简化检测过程、缩短细菌检测时间、无须昂贵仪器设备等优点,并克服有些环境微生物难以培养的困难,为将来有益菌在应用中实际存活和繁殖情况的监测提供了有力的技术支撑.