响应面法优化低温豆粕大豆分离蛋白提取工艺

采用响应面分析法(RSM)对低温豆粕大豆分离蛋白(soybean protein isolated,SPI)的碱提工艺进行优化。在单因素实验的基础上,选取了影响SPI提取率的4个关键因素(pH、温度、时间和液料比)进行四因素五水平的中心组合旋转实验设计(CCRD)。通过RSM建立了响应值(SPI提取率)与各影响因素之间的回归方程,并获得了SPI的最优提取条件:pH 8.5,提取温度55℃,提取时间42.8 min,料水比1∶9.7(g/mL),此条件下SPI提取率预测值为37.12%,与实验值(36.69%)的误差为1.16%。将一次碱提后残渣进行二次碱提,二次提取率为10.16%。2次碱提上清液等电点沉淀的蛋白沉淀率分别为84.03%和85.84%。     

固定化胰蛋白酶亲和层析法制备低STI残存大豆分离蛋白质

聚苯乙烯阴离子交换树脂(GM201)经预处理除去杂质后先与戊二醛(2—6％)反应,再与胰蛋白酶(5000u/mg,8—10mg/mL,pH 8.0)反应即制得固定化胰蛋白酶。此法得到的固定化胰蛋白酶具有良好的热稳定性,贮藏稳定性和操作稳定性,可用于工业化目的。脱脂豆粉经萃取(PH9.0)后,稀释4倍,在pH5.0下沉淀分离出大豆球蛋白,然后用酸性水(pH5.0)洗涤两次,并进行碱溶与酸沉淀两次,即可将大豆分离蛋白质的STI残留降低到1.85％,比活性降到1u/mg以下。最后再用固定化胰蛋白酶亲和层析,就可以除去大豆分离蛋白质中残留的STI。     

DNA重组技术(Ⅰ) 小量快速提取质粒DNA方法

质粒DNA的提取是最基础的DNA重组技术。国内外已经发展了许多方法用于批量提取质粒DNA。这些方法都可以获得满意的效果。这里介绍两种小量快速提取质粒DNA的方法,可用于重组子筛选及酶切分析。 (一)碱裂解法 1.将过夜培养的菌液1.5ml转移到小离心管内,15.000r/min离心30sec,弃去上清,将离心管倒置尽量除去培养液。 2.将沉淀的菌体再悬于100ml冰冷的溶液A中(50mM葡萄糖,25mM Tris pH8.0,10mM EDTA),不必要加入溶菌酶。 3.向A液中加入新配制的溶液B200μl(0.2N NaOH,1％SDS),迅速倒置几次,混合两溶液,放在冰浴上3—5分钟。 4.再加入150μl溶液C(5M醋酸钠60ml,冰醋酸11.5ml,蒸馏水28.5ml)混均后冰浴3～5分钟。     

大豆初生根凯氏带对铜离子的通透性

采用在根内生成有色铜沉淀的方法研究大豆(Glycine max)初生根凯氏带对铜离子的通透性。用真空泵抽取浓度为200 μmol·L^–1 的CuSO₄溶液进入根中, 然后在重力作用下从根基部灌注400 μmol·L^–1的K₄[Fe(CN)₆]溶液, 两种物质在根内相遇即可产生棕色的Cu₂[Fe(CN)₆]沉淀, 根据沉淀的位置来确定铜离子所经过的途径。结果表明: Cu²⁺可以穿过内皮层凯氏带, 在木质部导管壁以及凯氏带至木质部之间的细胞壁处产生棕色沉淀, 侧根发生的部位也产生了大量的沉淀; 当抽取K₄[Fe(CN)₆]溶液后再灌注CuSO₄溶液, 发现Cu²⁺仍然可以穿过凯氏带, 并在凯氏带外侧以及外皮层细胞的细胞壁处产生棕色沉淀。研究结果证明凯氏带并不是一个可以完全阻止离子进出的完美屏障。     

大豆根茬木霉腐解产物的鉴定及其化感作用的研究

采用不同极性溶剂环己烷、乙酸乙酯、正丁醇连续提取及XAD 4树脂提取大豆根茬木霉腐解产物 ,并对各提取组分进行了化感作用研究 ,对化感作用明显的组分用GC MS进行了化学成分分析 .结果表明 ,大豆根茬木酶腐解产物的 2周、4周环己烷、乙酸乙酯、XAD 4树脂提取组分能显著抑制初期大豆种子萌发 (2 1h) ,随大豆种子萌发时间的延长 ,抑制作用减弱 .2周、4周根茬各提取组分对大豆种子萌发中的胚根生长 ,所表现出的化感抑制作用规律是 :0 .5 0、1.0 0gDW·ml-1乙酸乙酯、XAD 4树脂提取组分与 0 .10、0 .2 5 gDW·ml-1乙酸乙酯、XAD 4树脂组分及环己烷提取组分胚根长的RI值 (化感作用效应指数 )差异达显著或极显著水平 .乙酸乙酯、正丁醇、XAD 4树脂提取组分中的有机化合物种类有 :有机酸、酚、醛、酮、苯、胺、腈、酯等 ,其中大多为化感物质 .     

水提取法分离大豆异黄酮苷和苷元

本文建立了一种仅用水作为溶剂分离大豆异黄酮苷和苷元的方法。采用水加热提取的方法分离大豆异黄酮苷和苷元,分别对所用溶剂,提取温度,提取时间和物料比进行优化。实验上清液干燥后的固形物中大豆异黄酮苷含量为32．24％,苷元含量仅为3．05％,沉淀中大豆异黄酮苷元含量为72．03％,苷含量仅为4．28％。该方法经济,简单,绿色无毒,适合工业生产。     

淫羊藿总黄酮的碱提工艺研究

以淫羊藿苷和总黄酮的含量为指标,考察了提取溶剂及用量、提取时间、次数以及浓缩比例和酸用量对淫羊藿黄酮类成分提取的影响,确定了淫羊藿总黄酮碱提酸沉的最佳提取条件为:用10倍量的0.1%NaOH溶液加热煮沸2次,每次1 h,滤液浓缩至料液比1∶4后用盐酸调节pH为2,沉淀放置36 h后,真空过滤或离心分离干燥即得高含量提取物。该提取工艺提取率高,稳定性好,操作简便,适合工业化生产。     

响应面法优化火龙果茎甾醇的提取及纯化工艺研究

以火龙果茎为原料,研究火龙果茎甾醇的提取及精制工艺.利用响应面分析法对火龙果茎甾醇超声提取工艺进行优化.结果表明:超声波辅助提取火龙果茎甾醇的最佳工艺条件为提取时间57 min、超声功率143 W、液料比12∶1 (mL/g)、温度53℃,甾醇得率为2.693％‰.通过正交试验确定火龙果茎甾醇精制的最佳条件为:液料比为4∶1(mL/mg),结晶初始温度为55℃,养品时间为18h,此条件下火龙果茎甾醇的纯度达到87.6％.     

从蛇足石杉中超声提取石杉碱甲和石杉碱乙

用正交试验确立了超声提取蛇足石杉生物碱的最佳条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、超声时间、超声功率等因素的影响。结果表明,在室温下超声提取的最优条件为：酸浓度O．8％(v／v),液固比例20：1,超声功率600W,超声15min。三次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是9r7．3％和93．5％,相对标准偏差分别为1．31％和1．40％(n=3)。与传统的回流提取工艺相比,过程时间从2h缩短为15min,回收率提高了10％以上。     

大豆卵磷脂的提纯研究

本研究采用简便有效的方法来提纯大豆卵磷脂,产品纯度达到了90％以上。(1)用无机盐沉淀法提取卵磷脂,产品纯度达到82％,并除去主要杂质;(2)用柱层析法精制卵磷脂,纯度91％;(3)纯度鉴定用HPLC法。     

药用中性蛋白酶的研究

枯草杆菌(Baceillus subtilis) AS 1.398中性蛋白酶的粗酶(5万u／g),用自来水(1：10)抽提12小时,在这抽提液中加入20％(v／v)CaCl2溶液(在100ml水中加60g无水CaCl2)：再加25％固体硫酸铵使酶沉淀,过滤后得酶饼,用0．005MpH7．2磷酸缓冲液溶解,经Sephadex G-25柱脱盐,冷冻干燥得片状粉末,含酶活60一100万u/g,纯度提高4倍,本制剂具有较强的抗炎消肿及溶解纤维蛋白的作用。     

芦笋保鲜研究

选择当天采收的新鲜芦笋(Asparagus officinalis var.altilis)品种玛丽华盛顿500W,进行以下几种处理:(1)0.1％山梨酸溶液;(2)0.1％山梨酸+0.1％异维生素C;(3)4％CaCl_2溶液;(4)对照(自来冰处理)。各处理均浸泡3分钟后沥干,装入聚乙烯塑料袋中,每袋0.5kg,重复3次,于4～6℃冷库内贮藏。测定的结果表明:     

碎米荠及富硒产品中无机硒提取方法的建立

采用不同浓度的HCl、NaOH、KH_2PO_4、NaHCO_3、KCl、流动相及超纯水作浸提液提取富硒产品中的无机硒后,用高效液相色谱-原子荧光光谱(HPLC-AFS)联用仪测定Se(IV)和Se(VI),并对浸提时间、浸提温度、振荡频率、液料比等条件进行系统研究,建立了富硒植物碎米荠及富硒产品中无机硒的提取方法:无机硒的最佳提取剂为0.1mol/L KH_2PO_4溶液,提取方法为:称取样品0.10g于离心管中,加入0.1mol/L KH_2PO_4溶液至3mL,于70℃、1 500r/min条件下振荡提取30min,以3 000r/min转速离心10min,0.45μm滤膜过滤后上机测定,样品加标回收率为86.14%~117.60%,Se(IV)和Se(VI)均能定性定量检测,为富硒产品中无机硒测定方法标准的制定奠定了基础。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,成二醛为交联剂将木瓜蛋白酶固定化。5％戊二醛在4-6℃下处理载体5h,加酶液(3.5mg/mL蛋白,pH7.2)固定12h,活力回收达32％,作用于酪蛋白的半衰期为36天,其表观K_m(酪蛋白)值为0.075％(W/V),溶液酶的K_m值为0.086％;最适pH7.0～7.5,溶液酶为7.0～8.5。固定化酶在pH8.5以下,溶液酶在9.0以下活力稳定。固定化酶在45℃以下,溶液酶在75℃以下稳定。用6mol/L脲洗脱固定化酶4次(5.5h)活力仍有54.5％。用固定化酶处理啤酒浊度比对照下降了1.5-3.7倍,蛋白质含量下降了44％,冷藏(4℃)120天无冷混浊现象发生并保持了啤酒原有风味和理化性状。     

产脂肪酶嗜碱细菌的筛选及酶学性质研究

目的:筛选产脂肪酶嗜碱细菌,并研究其酶学性质.方法:以豆油为唯一碳源的固体平板筛选产酶菌株,16S rDNA同源性分析确定微生物菌属,单因素实验优化产酶条件、研究酶学性质.结果:筛选出1株产脂肪酶的嗜碱菌株,鉴定为假单胞菌(Pseudomonas),命名为Pseudomonas sp.C-36.菌株产酶的最佳培养条件为:甘油2%(V/V).蛋白胨0.7%(W/V),酵母提取物0.5%(W/V),K2HPO4 0.2%(W/V),MsS04·7H2O 0.05%(W/V),NaCl 0.3%(W/V),Triton X-100 0.01%(W/V),pH 9.5,转速180r/min,37℃下培养24h,产酶量为2.782 IU/ml.该酶的最适温度和pH分别为40℃和9.0,50℃时酶活半衰期为2h.Ca2+等金属离子对该酶酶活具有促进作用,而Zn2+对酶活的抑制作用明显.有机溶剂的耐受性实验表明,该酶在疏水性有机溶剂中稳定性良好.结论:筛选得到1株嗜碱的脂肪酶产生菌C-36,并鉴定为Pseudomonas.     

胃肠激素及其多肽的制备(续)

<正> 神经降压素(Neurotensin) 1.提取: 采集刚宰杀的牛小肠,水洗后迅速冷藏。取50Kg冻小肠,绞碎,加501丙酮—1 N HCl(100/3,V/V),研磨,然后再加3倍量以上丙酮,搅拌成混悬液,过滤,滤液加200l石油醚,将石油醚/丙酮弃去,同法再进行一次,丙酮/水层约80l,室温下减压浓缩至35l。     

大豆异黄酮微波干法辅助提取及其机理研究

考察大豆异黄酮的微波光波组合无溶剂提取方法,发现微波光波提取干法仅用9.4%的N,N-二甲基甲酰胺DMF作为能量传递介质,功率800 W(微波55%与光波45%)加热6 min后,乙醇萃取得总黄酮.大豆苷元的提取率为0.14%,与相应的常规提取法接近,该法有操作简单快速,成本低,环境污染小等优点.利用高倍荧光显微镜FM...     

茶多酚提取优化工艺研究

本文研究了可食用茶多酚的提取优化工艺。萃取剂为乙醇,料液比1：15,浸提过程伴随300W超声波震荡,就乙醇的浓度、提取温度、提取时间和提取次数等因素利用正交设计筛选了茶多酚的最佳提取工艺条件,并对浸提液最佳离子沉淀方法作了比较。结果表明,茶多酚提取的最佳工艺条件为：65％的乙醇溶液作浸提剂,当浸提温度为50℃,浸提时间30min,两次超声波辐射浸提后茶多酚从粗茶叶中的提取率为20．1％。沉淀剂AlCl3和ZnSO4质量比为1：2对茶多酚的沉淀效果最佳,pH=6．0。     

大豆茎尖离体培养再生植株

1　植物名称　大豆 (Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ)品种中黄 4号、早熟 1 8和中品 661。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　生芽培养基 :( 1 )ＭＳ 6 ＢＡ 3ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 )。不定芽伸长培养基 :( 2 ) 1 /2ＭＳ 6 ＢＡ 0 .1 ;( 3)ＭＳ ＧＡ30 .5。生根培养基 :( 4 ) 1 /2ＭＳ ＮＡＡ 0 .1。以上培养基均含蔗糖 3%、琼脂0 .8% ,ｐＨ 5 .8;培养室温度 ( 2 6± 2 )℃ ;光照时间每天 1 6ｈ ,光照度 1 60 0～ 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　靶组织区的制备　取大豆种子 ,以 70 %酒精处理 1ｍｉｎ ,1 %次氯酸钠消毒 1 5ｍｉｎ后 ,用无…     

大豆初生根凯氏带对铜离子的通透性

采用在根内生成有色铜沉淀的方法研究大豆（Glycine max）初生根凯氏带对铜离子的通透性。用真空泵抽取浓度为200μmol·L^–1的CuSO4溶液进入根中,然后在重力作用下从根基部灌注400μmol·L^–1的K4[Fe（CN）6]溶液,两种物质在根内相遇即可产生棕色的Cu2[Fe（CN）6]沉淀,根据沉淀的位置来确定铜离子所经过的途径。结果表明：Cu^2＋可以穿过内皮层凯氏带,在木质部导管壁以及凯氏带至木质部之间的细胞壁处产生棕色沉淀,侧根发生的部位也产生了大量的沉淀;当抽取K4[Fe（CN）6]溶液后再灌注CuSO4溶液,发现Cu^2＋仍然可以穿过凯氏带,并在凯氏带外侧以及外皮层细胞的细胞壁处产生棕色沉淀。研究结果证明凯氏带并不是一个可以完全阻止离子进出的完美屏障。