羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖(Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS)诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western blot法测定Caspase-3酶原的变化; RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果显示:SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC_(50)分别为375,355,178和60mg/L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征:细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5-300mg/L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带;而500mg/L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

药物诱导乳腺癌细胞凋亡作用机理的研究

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,乳腺癌的诊断、治疗及预后与其细胞凋亡密切相关。本文对国内外有关药物诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制如药物对细胞周期、线粒体膜电位、细胞内钙离子浓度及caspase家族的影响等内容进行概述,试图为抗乳腺癌新药物的研发找到新的途径。     

人同源盒基因NKX3.1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP 中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,将NKX3.1 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1（+）中; 将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3.1 cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3.1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3.1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确. pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3.1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA 48 h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNA ladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 NKX3.1, 转染PC3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用     

VK_3诱导悬浮培养的胡萝卜细胞凋亡

VK_3是一种醌类物质,在体内通过氧化还原产生超氧化自由基。我们的实验发现,VK_3对悬浮培养的胡萝卜细胞及原生质体有致死作用。这种作用是浓度依赖性的。100—800μmol/L的VK_3能引起10%—33%的细胞死亡。当VK_3浓度达到1mmol/L时,死亡率达到100%。DNA电泳分析发现,600和800μmol/L的VK_3处理过的细胞和原生质体产生大小为180bp整数倍的梯状条带。而在更高或更低浓度的处理中则没有观察到这种条带。用TUNEL方法检测,在400—800μmol/L浓度的处理中观察到细胞核DNA的断裂。而在更高或更低浓度的处理中则没有观察到这种断裂。由此我们推测,适当浓度的VK_3能诱导胡萝卜细胞及原生质体凋亡。     

细胞色素C在apoptin诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的研究肿瘤特异性凋亡基因（apoptin）在诱导Hela细胞凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela细胞;采用MTT法检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western blotting检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果 MTT法证明ap-optin基因瞬间转染的Hela细胞凋亡率明显高于其他各组（P〈0.01）;caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论 Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导Hela细胞凋亡。     

蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡

采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化。结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡。本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能。     

蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡

采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化.结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡.本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能.     

维生素C诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡及其分子机制的研究

为了研究维生素C对人宫颈癌Caski细胞体外抑制、诱导凋亡的作用及其分子机制,使用不同剂量维生素C处理人宫颈癌Caski细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测Cas-ki细胞周期变化;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和E6的表达以及Caspase 3的激活;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变.分析发现,维生素C可显著抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,呈现明显的时间和剂量依赖性;将细胞阻滞于S期;诱导细胞凋亡,下调Bcl-2和E6、上调Bax蛋白表达,促进Caspase3活化,降低线粒体膜电位.表明维生素C在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

Toll样受体在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对Toll样受体（TLRs）表达的影响及其与诱导结肠癌细胞凋亡之间的关系。方法用AnnexinV检测在双歧杆菌LTA处理前后结肠癌Lovo细胞凋亡的变化;流式细胞术检测Lovo细胞表面TLRs的表达,并用相应的TLRs封闭抗体作用后,AnnexinV检测经双歧杆菌LTA诱导的Lovo细胞凋亡的变化。结果经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞发生了明显的凋亡,并有一定的时间和剂量依赖关系;结肠癌Lovo细胞有TLR受体的基础表达,经双歧杆菌LTA处理后,TLR2和TLR4在Lovo细胞上的表达增加,其中尤以TLR2增加更为明显;用相应的TLRs抗体封闭作用后,双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡的能力下降。结论双歧杆菌LTA能诱导肿瘤细胞凋亡,并且TLRs特别是TLR2在LTA诱导肿瘤细胞凋亡中可能发挥着主要作用,TLR4可能仅起着协同作用。     

能诱导MGC-803细胞凋亡的新免疫毒IgY-ricinA(英文)

研究证明：许多化学药物的治疗都是以诱导细胞凋亡的方式杀伤癌细胞的。有关细胞凋亡的研究已成为肿瘤生物学研究中的一个新焦点。ＩｇＹｒｉｃｉｎＡ为本实验室新研制的一种免疫毒。与其它种类的免疫毒一样,它能够特异性地杀伤靶细胞。推测：免疫毒ＩｇＹｒｉｃｉｎＡ也是以诱导细胞凋亡的方式杀死癌细胞的。我们已经研究了免疫毒对靶细胞的杀伤能力和效果,本文则着重对细胞的杀伤机理进行探讨。本实验以胃癌细胞ＭＧＣ８０３为靶细胞,ＨｅＬａ细胞为非特异识别细胞,二倍体２ＢＳ细胞为正常对照细胞,进行ＩｇＹｒｉｃｉｎＡ处理,观察其诱导细胞凋亡的可能性。同时进行ＩｇＹ和ｒｉｃｉｎ处理,以期探明引起细胞凋亡的有效成分。ＯｌｙｍｐｕｓＢＸ荧光显微镜下观察到（Ｆｉｇ２,５＆６）：在细胞培养液中加入ＩｇＹｒｉｃｉｎＡ后,ＭＧＣ８０３细胞表现出典型的凋亡形态变化,即染色质浓缩、细胞皱缩并放出凋亡小体。细胞凋亡时ＤＮＡ被降解成寡核体长度的片段,在琼脂凝胶电泳上形成ＤＮＡ梯带,成为药物处理后确定细胞凋亡过程中细胞降解的一种生化指标。Ｆｉｇ３表明,用ＩｇＹｒｉｃｉｎＡ处理ＭＧＣ８０３细胞２４小时、用ｒｉｃｉｎ处理ＭＧＣ８０３和ＨｅＬａ     

柴胡提取物诱导人类白血病细胞HL-60的细胞凋亡及其机理研究

柴胡提取物诱导人类白血病细胞HL-60的细胞凋亡从而抑制其细胞生长.为了研究该过程的作用机理,我们研究了丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs),包括胞外信号调节激酶(ERK1/2),c-jun氨基末端蛋白激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),在该过程中的磷酸化特征与动态变化.结果表明,柴胡提取物显著的增加了p38丝裂原活化蛋白激酶和胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化作用,其增加值在测试范围内与测试剂量和作用时间成正相关,但在柴胡提取物诱导人类白血病细胞HL-60的细胞凋亡过程中,没有发现对氨基末端蛋白激酶(JNK)表现出磷酸化活性.柴胡提取物诱导白血病HL-60的细胞凋亡部分归结于对p38丝裂原活化蛋白激酶的上调节作用,这种上调节作用能够受到p38 MAPK特异性的抑制剂SB203580的部分逆转,而MEK的抑制剂U0126则对柴胡提取物诱导HL-60细胞凋亡过程中的胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化具有显著的协同效应.这是首次报道柴胡提取物在诱导人白血病细胞HL-60细胞凋亡过程中参与p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化,同时柴胡提取物作为胞外信号调节激酶(ERK1/2)抑制剂的协同作用物具有相应的药物学功能.     

阿霉素联合顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡实验研究

目的:研究化疗药物阿霉素(ADM)联合顺铂(DDP)对宫颈癌CaSki细胞株的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的相互作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度阿霉素、顺铂单独和联合应用对宫颈癌CaSki细胞的增殖抑制作用;同时RT-PCR法在mRNA水平上检测Bcl-2和TNF-α基因表达量的变化。结果:两种药物单独应用均可抑制CaSki细胞的增殖,联合用药(<12μg/mL)时具有协同抑制作用并与各药物单一应用比较具有显著性差异(P<0.05);阿霉素、顺铂作用CaSki细胞后能上调TNF-α基因和下调Bcl-2基因的表达。结论:宫颈癌CaSki细胞在化疗药物阿霉素和顺铂两药联合作用下通过诱导TNF-α和Bcl-2 mRNA表达量的变化发挥协同抑制作用,同时TNF-α的高表达增强了化疗药物阿霉素和顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的敏感性,其机制主要与凋亡诱导效应有关。     

CD3单抗诱导小鼠胸腺细胞凋亡的流式细胞仪检测

采用不同浓度抗小鼠ＣＤ３ 复合物单抗刺激幼龄小鼠胸腺细胞,培养后分别在不同时间用流式细胞仪检测胸腺细胞的凋亡情况。结果表明,在ＣＤ３ 单抗诱导幼龄小鼠胸腺细胞４ 小时后,流式细胞仪即可测出凋亡细胞特有的ＡＰ峰。本项研究提示,用ＣＤ３ 单抗刺激未成熟胸腺细胞可以通过内源性的凋亡途径引起细胞死亡。未成熟Ｔ 细胞通过ＴＣＲ－ＣＤ３ 复合物与自身抗原接合激活上述过程可能与克隆清除的形成机制及自我耐受有关。     

高温诱导HeLa细胞凋亡的相关机理的研究

目的研究不同高温作用后HeLa细胞bcl-2、bax和p53表达的变化.方法人子宫颈癌细胞系(HeLa细胞)分为37℃、40℃、43℃三个温度组,每组经1h相应的温度处理后,以免疫组织化学的方法检测bcl-2、bax和p53的表达并经图象分析仪检测反应产物的光密度并进行统计分析.结果 40℃、43℃组的Bcl-2的平均光密度明显低于37℃组,而43℃组Bax的平均光密度明显高于37℃组和40℃组,P53随着温度的升高平均光密度也随之升高.形态学观察:43℃组均见明显的细胞凋亡.结论温和性高温使HeLa细胞周期受阻,P53表达上调诱导bax基因表达、抑制bcl-2基因的表达,从而导致细胞凋亡.     

三氧化二砷诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bcl-2保护作用的机制研究

探讨三氧化二砷 (As₂ O₃)对人宫颈癌HeLa细胞的生物学效应和Bcl -2的高表达对这一效应的影响 .通过MTT ,克隆形成实验 ,形态观察 ,流式细胞仪 ,DNA凝胶电泳 ,细胞凋亡原位检测 (TUNEL) ,RT PCR ,Northernblot,Westernblot等方法发现As₂ O₃明显降低HeLa细胞存活率 ,并诱导其凋亡和细胞周期G2 /M期阻滞 ,分析显示As2 O3可能主要通过抑制c -myc基因和病毒致瘤基因的表达来诱导HeLa细胞凋亡 .Bcl -2的高表达也可能正是通过降低As₂ O₃对G2 /M期阻滞 ,逆转As₂ O₃对c -myc基因的降调节 ,减轻As₂ O₃对病毒致瘤基因的表达抑制作用 ,来部分阻止这种凋亡的发生 .我们还发现As₂ O₃能引起Bc1-2高表达HeLa细胞G2 /M期的弱阻滞 ,降调Bcl -2的表达以及略微抑制病毒致瘤基因的表达 ,这可能是As₂ O₃仍能诱导Bcl -2高表达HeLa细胞凋亡的原因 .     

共轭亚油酸诱导人结肠癌细胞Caco-2凋亡的作用

共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA）有着多种异构体以及多种生理活性,如抗癌、减肥、抗动脉粥样硬化等。本研究主要对c9,t11-CLA和t9,t11-CLA两种异构体的混合物诱导人结肠癌细胞Caco-2凋亡的作用及可能机制进行了探讨。采用MTT方法、透射电镜观察、流式细胞术检测和RT—PCR方法,研究了CLA混合物抑制Caco-2细胞增殖,诱导Caco-2细胞凋亡的作用及可能机制。实验结果证明,c9,t11-CLA和t9,t11-CLA混合物能抑制Caco-2细胞的增殖,并可诱导Caco-2的凋亡。随着所用的CLA混合物浓度的增加以及作用时间的延长,细胞凋亡率增加。通过RT—PCR分析,Caco-2细胞中的caspase 3的mRNA的表达随着CLA混合物浓度的增加而上调。这两种CLA的混合物可抑制Caco-2细胞的增殖,诱导Caco-2的凋亡,而caspase 3的表达上调可能与细胞凋亡密切相关。     

臭椿酮诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其机制研究

为研究臭椿酮(Ailanthone,AIL)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用及作用机制,以人黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用MTT法测定AIL对人黑色素瘤A375细胞生长增殖的抑制作用。用倒置相差显微镜观察AIL对A375细胞形态的影响,用荧光倒置显微镜观察Hoechst33258染色后AIL对A375细胞核的影响,用AnnexinV-FITC/PI双染法检测AIL诱导A375细胞凋亡的作用,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的活性,Westernblot检测p-PI3Kβ(Ser1070),PI3Kβ,p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表达水平的变化,接着用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步验证AIL对PI3K/Akt信号通路及细胞凋亡的影响。实验结果表明,AIL能够明显抑制A375细胞增殖,使A375细胞数目变少、附着力和透光性减弱,AIL能够诱导A375细胞凋亡,使其细胞核染色质发生固缩并呈现高亮,且使A375细胞早期及晚期凋亡率均增加,AIL作用后能够使caspase-3和caspase-9活性增加,AIL能够抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而使PI3K/Akt信号通路失活。较AIL单独作用,AIL和LY294002共同作用后对PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增强且诱导凋亡作用增加,进一步说明AIL通过失活PI3K/Akt信号通路来诱导A375细胞凋亡。     

PrP106-126多肽诱导凋亡细胞中14-3-3β的降解

本研究将PrP106-126多肽和HeLa细胞共孵育4h和8h,采用Hoechst染色分析发现PrP106-126诱导凋亡细胞细胞核出现不同程度的染色质浓集,固缩及碎裂的细胞凋亡征象。Western blotting检测发现PrP106-126诱导细胞中的多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)降解,提示PrP106-126通过caspase3途径引起细胞凋亡现象。PrP106-126诱导的细胞中14-3-3β在不同孵育时间也出现降解,而Real-time PCR检测14-3-3β mRNA未发生变化。本研究证明PrP106-126通过caspase3诱导HeLa细胞凋亡,并可导致抗凋亡蛋白14-3-3β的降解而加速凋亡的形成。     

破壁灵芝孢子粉诱导MCF-7细胞凋亡的机理研究

目的：研究破壁灵芝孢子粉对人乳腺癌细胞系MCF-7的诱导凋亡作用。方法：在体外设定不同浓度的孢子粉处理MCF-7细胞系的实验组,细胞培养24h后,用MTT法测定其细胞活力;碘化丙啶（vI）染色后流式细胞仪检测其凋亡情况;罗丹明123（Rodamine123）标记后于酶标仪530nIn处测定其荧光强度值以检测线粒体膜电位情况。结果：与对照组相比,随孢子粉浓度的上升,MCF-7细胞活力和增殖呈剂量依赖型的下降;流式细胞仪检测PI染色显示,各处理组的MCF-7细胞凋亡率随作用浓度的上升而增强,最高浓度组尤为明显;在高浓度组,罗丹明123荧光强度明显降低。这些结果表明孢子粉能抑制MCF-7细胞的活力扣增殖;诱导其凋亡;罗丹明荧光强度的减少,说明MCF-7线粒体膜电位有倒塌扣去极化的情况发生,提示MCF-7细胞的凋亡与线粒体有关。结论：破壁灵芝孢子粉可明显促进MCF-7细胞的凋亡。     

过表达人p33ING1b促进UV诱导的衰老细胞凋亡

p33 ^ING1b是肿瘤抑制基因ING1的主要表达形式,已有的研究表明,p33^ING1b参与了细胞的生长抑制、凋亡、染色质重塑、DNA损伤修复、肿瘤抑制等.但是,它在细胞衰老过程中的作用目前还不清楚.本研究分析了p33 ^ING1b基因在细胞衰老过程中的表达情况.结果发现,无论在mRNA水平还是在蛋白水平,p33 ^ING1b在衰老细胞中的表达均降低.通过构建和包装含p33^ING1b基因的重组腺病毒,将p33 ^ING1b导入衰老细胞中使其过表达,结果显示,p33^ING1b的过表达明显促进UV诱导的衰老细胞凋亡,提示p33I^NG1b在衰老细胞中的表达下调与衰老细胞抗凋亡有关.