基因工程

900573 通过电激作用对类肠膜明串珠菌的质粒转化及其在分子克隆中的用途[英]/David. S. …∥ Appl. Environ. Microbiol.-1989,55(6)-1483～1489[译自DBA,1989,8(15),89-08707] 报道了利用电激对类肠膜明串珠菌(Leuconostoc paramesenteroides)的转化。对决定转化率的几个因子作了最优化处     

基因诱变、重组、克隆

923552甲醇利用型嗜甲基菌属耐热菌株的高效电激转化[英]/Haider,M.Z.…/Acta Biotechn01.一1991,21(4)一295~301[译自DBA,1902,11 (7),92一03606〕 采用pUC19、pBR322、pCMi、pUC/CAT以及由pSAS片段与pUC19的重组质粒(P USM4、pUSFio、pUSMZo)作为载体。分别用感受态、原生质体和电激三种转化法转化万eth好。夕瓜-105属菌株KISRI一5112(NCIB 12138)、KISRI一512(NCIB 12137和KISRI一6.1(NCIBiZi36)。在25产F、3 kV、1 .5一5 kV/cm电激条件下成功地转化了质粒(P UCM20的转化率达180万转化子/拼9 DNA),并稳定…     

组织与原生质体培养

950616从电激原生质体再生转基因大豆植株[英]/Dhir,S.K.…/P1ant Physi01.一1992,99(1).一81～88E译自DBA,1992,11(14),92—08040] 质粒DNA携带CaMV35S启动子调控的新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)基因,该基阈与冠瘿碱生物合成的非选择标记相连。从上述质粒电激处理后的原生质体衍生愈伤,并再生出转基因大豆植株。从电激后培养的第15天开始,用卡那霉素(50pg/m1)选择。6周内,从1百万个电激原生质体中选出370～460个抗性集落,绝对转化频率为O.00037～O.00046。其中80％以上的集落具有NPT’Ⅱ活性,这些集落的90％产生冠瘿碱。连接的标记基…     

电激诱导DNA摄取的快速评估

英国诺丁汉大学科学家N.W.Blackhall、M.R.Davey及其同事利用流式细胞分类术评估了在荧光素异硫氰酸盐-接合葡聚糖(FITC-葡聚糖)存在下电激水稻原生质体后的瞬时基因表达,并与在携带cat基因的质粒存在下电激水稻原生质体后的瞬时基因表达结果进行了比较。结果发现,FITC-葡聚糖摄取与cat     

生物固氮

960285 形成无效根瘤的苜蓿根瘤菌耐热激突变[英]/Suman,A.…∥J.Plant Biochem. Biotechnol.-1995,4(1).-5～9[译自DBA,1995,14(9),95-05285] 通过转座子Tn5诱变,从苜蓿根瘤菌Rmd201中分离出6种耐热激突变(Rmd201::Tn5)。在TY琼脂表面以小块的形式将供、受体对数期液体     

植物遗传工程

924173电激导人番茄原生质体的黄瓜花叶病毒的复制足迹分析[英〕/Smith,C.R.…/Anal.Bioehem一1092,200(2)一310~314〔译自DBA,1902,11(8),92一04507〕 将黄瓜花叶病毒(CMV)株系WT RNA(带有相应的随体CARNAS)电激导入番茄活原生质体中。以不同的时间间隔,从样品中提取总核酸并通过半一变性PAGE进行分析。用序列专一性杂交探针检测病毒和随体RNA。产生的PAGE谱型或自动放射自显影显示,各时间收集的提取物中都含有一定比例的病毒和随体RNA,属于专性CMV/CARNAS种组合的“复制足迹谱型”(REP)。电激后6小时便可检测到基因组…     

生物防治

961436 利用电激或基因枪共转化绿僵菌产生稳定的GUS转化体[英]/St.Leger, R.J. …//FEMS Microbiol.Lett.     

电激和普鲁卡因增强DNA导入哺乳动物活体效率

目的:探究电激和普鲁卡因对DNA导入哺乳动物活体效率的影响.方法:向小鼠的股四头肌注射20 μg β- gal质粒,分别采用以下方法:直接注射;先注射100 μL0.25％的普鲁卡因,24h后注射质粒;注射质粒后进行经过前期优化后的电激程序进行加强(500 V,4个脉冲).注射后的第2d、1w和2w后进行x- gal染色检测.结果:三种导入方法均可将外源质粒导入肌肉组织中并进行表达.电激和普鲁卡因可以显著增强肌肉对外源基因的吸收和表达,尤其是优化后的电激程序,其可以使肌肉长期稳定高效的表达外源导入基因.结论:普鲁卡因是常用的增强DNA导入效率的促进剂,而合适的电激可以更为显著地增强DNA导入效率,均是基因治疗中提高基因导入效率的良好候选方案.     

植物原生质体的廉价电激装置

能够直接将遗传物质导入原生质体的商品化电激装置,工作原理是由电子产生指数衰变或矩形电脉冲.这种电激装置相当昂贵. 在Danisco AIS,M.Joersbo和J.Brunstedt研究了利用壁孔使植物原生质体电激过程中电流改变(AC)的可行性.他们用220V输电线提供AC脉冲.用AC脉冲将氯霉素乙酰     

水稻幼胚电激转化及转基因植株再生

幼胚的遗传转化对研究植物胚胎发育相关基因的表达与调控具有重要意义, 也为植物遗传改良提供新的技术.本研究借助一种自制的特殊装置,采用电激法将GFP基因转入2-3天水稻幼胚,得到瞬时表达, 4-6天水稻幼胚经电激后再生了植株,并在愈伤组织阶段及R0植株中检测到GFP荧光的转基因植株,从而建立了水稻幼胚的遗传转化实验系统.在电容为500 μF、电压为300 V/cm,浓度为100 μg/mL的条件下,幼胚GFP的电激转化频率可达35%. 在pH 5.8的电激缓冲液中,最高转化频率可达40%.在三种不同的启动子实验中,以Ubi启动子的转化频率最高.     

植物遗传工程

951765通i生徽弹蠢击悬浮细胞培井物和电漱原生质俸稳定转化除草拊抗性甘蔗】皇【伤[英]/Chowdhury,M.K.U.…,Plant Cell Rep.一1992,11(10).一494～498[译自DBA,1992,1l(23),92-13089~ 用高速微弹轰击悬浮细胞培养物或电激原生质体船稳定地转化甘蔗(疗口cc.j14r口m o,,icimale)杂交种CP72—121.O。用外被质粒pBARGUS的金粒轰击8日龄培养物。质粒含玉米醇脱氢酶基因启动子调控的声一葡糖苷酸酶报道基因,还含有CaMV355启动子调控的编码除草剂抗性的bar选择标记基因。转化成功率为每四次轰击后过滤获得一个除草削抗性集落。用电激抉…     

基因工程

940001乳酸克奋维酵母的电激转化〔英〕/San chez,M.…了Appl.Environ.Mierobiol‘一1993,59(7).一2057~2092〔译自DBA,1993,22(16),93-09071」 分析了与通过电激有效转化乳酸克鲁维酵母MDZ八有关的物理和生物学参数。利用最适电压并使小杯中的悬浮细胞体积恒定时,转化率随细胞数和质粒浓度的增加而提高。用二硫苏糖醇预处理上述酵母细胞能提高转化率。但是,最重要的参数是脉冲时间。1毫秒的改变可使转化率下降70~80%以上。在优化条件下,获得10“~107个转化体/协g质粒DNA。在一定条件下,质粒的大小也影响电激效果。在任何情况下,未获…     

烟草脱外壁花粉的电激基因转移

以 β-葡糖苷酸酶 GUS 基因作为报告基因 ,通过瞬间表达的检测 ,比较了烟草 Nicotianatabacum L . 脱外壁花粉、未萌发与萌发花粉的电激导入效果 ,探讨了不同电激条件及启动子对外源基因瞬间表达的影响 .结果表明 :当脉冲时间常数为 13 ms时 ,导致脱外壁花粉和萌发花粉生活力下降约50 %的电场强度分别为 750 V/ cm和 12 50 V/ cm,在此条件下电激 ,二者的导入效果最好 .脱外壁花粉的GUS基因表达水平约为萌发花粉的 5倍、花粉粒的 30倍 .玉米花粉特异启动子 Zm13- 2 60 能启动 GUS基因在脱外壁花粉和萌发花粉中高效表达 ,而 Ca MV 35S的启动活性很低     

水稻幼胚电激转化及转基因植株再生

幼胚的遗传转化对研究植物胚胎发育相关基因的表达与调控具有重要意义 ,也为植物遗传改良提供新的技术。本研究借助一种自制的特殊装置 ,采用电激法将GFP基因转入 2 - 3天水稻幼胚 ,得到瞬时表达 ,4- 6天水稻幼胚经电激后再生了植株 ,并在愈伤组织阶段及R0植株中检测到GFP荧光的转基因植株 ,从而建立了水稻幼胚的遗传转化实验系统。在电容为 5 0 0 μF、电压为 30 0V/cm ,浓度为 10 0 μg/mL的条件下 ,幼胚GFP的电激转化频率可达 35 %。在pH 5 .8的电激缓冲液中 ,最高转化频率可达 40 %。在三种不同的启动子实验中 ,以Ubi启动子的转化频率最高。     

电激转化GFP基因在小麦合子和早期原胚中的高频表达

用电激法将GFP基因成功转入分离的小麦(Triticum aestivum L.)合子及早期原胚中.在电场强度150 V/cm、电容25 μF、线性DNA浓度200 μg/mL、电激缓冲液pH 7.2的条件下,得到GFP基因在早期原胚中的高频瞬间表达(46.7%).与开花后5 d胚胎的最适电场强度相比,合子和早期原胚因较幼嫩而最适电场强度较低.电激后的一些早期原胚可以在KM8p培养基中培养并继续分裂,分裂后的细胞中也能观察到GFP基因的表达.此外,电激后的合子及2细胞、4细胞和8细胞原胚中没有看到基因表达的嵌合现象.     

农业上的应用 体外培养和遗传育种

861608 电控制植物组织培养物的生长[英]/Rathore,K.s.…∥Bio/Technology.-1985,3(3).-259～263[译自CBA,1985,(6),2038]当在组织和培养基之间通过十分微弱的     

集胞藻PCC6803 priA基因的突变体

目前对蓝藻的高温耐受性研究主要集中在热激蛋白和光系统II放氧蛋白复合体的外周蛋白基因,如放氧蛋白复合体的3个外周蛋白基因psbO、psbU和psbV[1-4],热激蛋白基因htpG[5]和hsp17[6],而对于是否存在其他耐受高温所需基因尚未进行系统的筛选.     

[18F]标记表皮生长因子受体抑制剂显像剂全自动合成方法

目的:[18F]标记表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)正电子显像剂在指导肿瘤分子靶向治疗中具有非常重要的作用.本文目的是找到一种全自动、适合日常使用的[18F]标记EGFR-TKI正电子显像剂的全自动合成方法.方法:采用一步法合成[18F]EGFR-TKI PET显像剂.首先合成4-[18F]氟苯胺基,然后合成4-[18F]氟苯胺基-6,7-二甲氧基喹唑啉.结果:整个合成过程大约60分钟,产率25％-35％(未校正),放化纯度＞95％.结论:本文建立了一种适合临床日常应用的[18F]EGFR-TKI PET显像剂的全自动合成方法.该方法对于进一步开发新型[18F]标记的表皮生长因子受体抑制剂PET显像具有重要价值.     

用基因枪将抗性基因导入落花生

7月中,美国W.R.Grace 公司的子公司、美国Agracetus 公司宣布使用该公司开发的基因枪“Accell”向落花生导入基因获得成功。因此,该公司用落花生、玉米、大豆、棉花、小麦、扁豆6种农作物确立了向生殖细胞导入基因培养新品种的技术。该公司产品开发部长James Timmins 说:“Agracetus 公司寻求开发落花生制品的合作伙伴,正在     

环形电极介导的小麦基因转化

用环形电极电激法有效地将外源DNA导入完整的小麦幼胚组织中。电激的物理参数采用770V／cm场强、800μF电容、100μg／mL质粒DNA(含有bar和GUS双标记基因),幼胚被电激3次。经PCR和Southern杂交分析表明,外源基因已稳定整合到小麦基因组中,转化频率为7．5％,高于相同处理条件下基因枪法的转化频率(4．2％)。