水稻叶片蛋白质快速双向电泳分析的新方法

介绍了利用PhastSystem全自动快速电泳仪进行水稻叶片蛋白质双向电泳的方法。此方法具有快速(电泳全过程仅需3.5h),操作简单和成本低廉的特点,同时具有良好的重复性和高分辨率。     

半干式蛋白质电泳印迹的影响因素及条件优化

采用蛋白质分子量标准物和纯化的重组蛋白质进行半干式蛋白质印迹,探讨半干式电泳印迹的多种因素对印迹效果的影响。结果表明:在不同电转移条件下,均存在不同程度的蛋白质透膜转移现象,当电流强度恒定时,电转移时间过长和上样量过大是造成实验中透膜转移而丢失的主要原因,可根据待测蛋白质的分子量和表达丰度确定恰当的电转移时间和上样量。     

一种家用收集和保存尿液蛋白质的方法

尿液是研究疾病早期标志物的重要来源.大规模收集尿液样本,建立尿液生物样本库具有长远的科学意义.本实验室曾提出用膜来吸附尿液蛋白质并干燥真空保存的方法.该方法具有经济便捷、占用存储空间小、样本可室温保存等特点,但其所需设备以及操作,仅适应于实验室.为方便全国各地的患者在家自行收集、保存尿液,并将样本室温运输,在此提出一种滤器联合注射器的简易装置.注射器提供压力,使尿液依次通过滤器内两层膜.第一层聚偏二氟乙烯膜隔离尿液中的细胞及碎片,第二层硝酸纤维素膜吸附尿液中蛋白质.结果显示,聚偏二氟乙烯膜有效地去除了尿液中细胞及碎片,具有很好的技术重复性.样本可室温保存1 0天,使样本远距离运输更加经济方便.     

蛋壳内膜用于渗透实验的改进

针对人教版高二生物学教材必修1第4章第1节"物质跨膜运输的实例"中,问题探讨栏目中的"渗透装置演示实验"存在装置难获得、演示效果不明显的问题作出改进。将手动剥离的蛋壳内膜作为该渗透实验的主要装置,清晰、简便地演示什么是半透膜,什么是渗透作用,并用该装置演示淀粉-碘、蛋白质-双缩脲试剂对物质进、出内膜的实验,对于帮助学生深入理解"质膜是选择透过性膜"这一概念起到了十分重要的作用。     

渗透作用装置的改进

<正>渗透作用是必修1《分子与细胞》第4章"细胞的物质输入和输出"第1节"物质跨膜运输"一节教学内容的难点,做好该演示实验是突破难点的重要教学手段。由于半透膜不容易取材、液面高度上升现象很难被全班学生观察到,本研究将装置进行改进(如图),使其在教学中得以真正使用。1选用肠衣作为半透膜本装置选用肠衣作为半透膜,肠衣价格便宜、容易购买且弹性大不易破损。剪取5 cm左右的一     

介绍一种新的半干式免疫转渍法

蛋白质免疫转渍法(Western blotting)是近十年发展起来的一种生化新技术。其原理是用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离待分析的蛋白质样品,然后用转渍装置把蛋白质转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上。再利用免疫检测法检出要分析的蛋白质区带。过去报道的大多是利用液相夹心式电转渍仪完成转渍的,这     

固体载体支承的双层膜系统

固态载体支承的双层膜的各种制备过程都简便易行,较脂质体等系统有重复性好、其物化性质可严格控制等优越性,并可将膜蛋白质分子镶嵌其中,是研究生物膜的良好模型．由于其研究方法日益成熟,固态载体支承的双层膜系统越来越成为研究生物膜与膜蛋白的有利工具之一．对固态载体支承的双层膜的制备技术和研究方法进行了系统的综述,并列举了一些在膜生物物理化学领域的应用．     

探究发生渗透作用的基本条件

阐述了用鸡蛋膜做透析袋探究发生渗透作用的基本条件,只有当半透膜两侧的溶液具有浓度差时,水才能透过鸡蛋膜,从浓度低的一侧扩散到浓度高的一侧。水、无机盐、维生素、碘分子、葡萄糖等小分子物质能透过鸡蛋膜,淀粉、蛋白质、脂肪等大分子物质不能透过鸡蛋膜。发生渗透作用的2个基本条件:一是半透膜,二是半透膜两侧的溶液具有浓度差。     

基于 AOPAN 纳米纤维膜的粘杆菌素发酵液后处理研究

使用静电纺丝再经胺肟化改性制备AOPAN纳米纤维膜,并基于AOPAN纳米纤维膜构建膜分离装置,用于粘杆菌素发酵液的后处理。研究中,对不同厚度的纳米纤维膜的渗透通量及分离性能进行比较,最终确定双层叠合的纳米纤维膜为分离膜,最适操作压力为0.14 MPa。在此条件下,分离膜的渗透通量为2.61 L/m2．min,蛋白质的截留率达到90％,色素等其他杂质也得到有效去除。     

昆虫中肠围食膜蛋白研究进展

围食膜是大多数昆虫中肠内壁附着的一层起润滑和保护作用的半透性粘膜, 按其形成方式不同分为Ⅰ型围食膜和Ⅱ型围食膜。围食膜主要由几丁质和蛋白质构成, 其中蛋白质对于维持围食膜的致密结构至关重要, 对围食膜蛋白的破坏可能会对昆虫的正常生长发育造成干扰, 甚至会导致低龄幼虫的死亡。本文介绍了围食膜的组成与结构, 阐述了昆虫围食膜蛋白研究的新发现、并依据结构特征对它们进行了分类, 总结了以围食膜蛋白为新靶标的害虫防治的可能途径, 讨论了当前围食膜蛋白研究的不足, 最后展望了今后围食膜蛋白研究的发展方向。     

准好氧填埋场的温度空间变异性

利用半变异函数, 对准好氧填埋装置中温度的空间变异特性进行了研究,并对装置内部温度进行了Kriging（克里格法）插值,得到纵剖面的等温线图.对不同理论模型进行优化拟合结果表明,剖面上温度半变异函数用线性有基台值模型拟合, 效果最好.得到的理论模型参数为：变程3.5 m,基台值83.6.利用克里格法进行最优内插估值得到的温度等温线表明,高温区域一般位于填埋体中段4～16 m的3 m以上部分,低温区域一般位于填埋体两端及中段1 m以下部分.可在高温区加大通风散热效果, 以降低过高的温度; 在低温区改善好氧环境, 增大氧气含量, 从而提高温度.对剖面上温度进行加权平均后,得到的准好氧填埋堆体的温度为59.8 ℃.这一温度可作为准好氧填埋结构基本形成的参考值.     

谷氨酸脱氢酶缺失对单核细胞增生李斯特菌生物被膜、毒力及胞外蛋白表达的影响

目的:探究谷氨酸脱氢酶缺失对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)生物被膜、毒力及胞外蛋白表达的影响。方法:利用微孔板法,检测谷氨酸脱氢酶缺失对Lm生物被膜形成能力的影响;比较野生株、谷氨酸脱氢酶缺失株EGDeΔgdh A及回复菌株EGDeΔgdh A+p ERL3-gdh A的溶血活性和对棉铃虫幼虫的半数致死量,检测谷氨酸脱氢酶缺失对Lm毒力的影响;利用i TRAQ技术对Lm野生株EGDe与谷氨酸脱氢酶缺失株EGDeΔgdh A的胞外蛋白进行分离与鉴定,并对差异表达蛋白质进行生物信息学分析。结果:与野生株相比,缺失株形成的生物被膜量显著降低(P≤0.01),溶血活性下降,对棉铃虫幼虫的半数致死量上升了1.6倍;蛋白质组学结果显示,缺失谷氨酸脱氢酶后差异性表达的胞外蛋白有62个,其中47个蛋白质表达量下调,15个蛋白质表达量上调。进一步将这些差异表达蛋白质同COG数据库进行比对及功能聚类分析,结果显示,这些蛋白质的功能分别属于碳水化合物转运与代谢、核苷酸转运和代谢、能量合成与转运相关、转录及细胞膜细胞壁相关蛋白等16个功能类别;其中碳氮代谢及能量转运相关蛋白数量最多,为24个,占所鉴定出的差异蛋白质总量的38.71%。表明谷氨酸脱氢酶是单核细胞增生李斯特菌中碳氮代谢和能量转运中的关键酶。同时,发现有3个与细菌黏附及生物被膜形成相关的蛋白质表达量下降。以上结果较好地解释了EGDeΔgdh A在基础培养基中生长缓慢和生物量显著性下降,以及生物被膜形成能力降低的现象。结论:谷氨酸脱氢酶在单核细胞增生李斯特菌生物被膜、毒力及胞外蛋白表达方面有重要作用。     

电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响

探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响.采用抗凋亡抑制蛋白-Survivin的抗体,对细胞裂解液进行蛋白质印迹.与常规操作方法不同之处是：在电转移的凝胶“三明治”中,重叠放置两张硝酸纤维素膜.电转移后,对两张膜同时进行免疫印迹.在特定的转移条件下,两张膜的免疫印迹都出现了Survivin蛋白的特异印迹带,证实了电转移中存在着蛋白质的透膜现象.转移时间、电流强度和蛋白质的分子质量,都是影响蛋白质透膜的相关因素.电转移中蛋白质的透膜,可以产生“印迹复制失真”的效应,从而最终影响蛋白质印迹定性和定量的结果.所得实验结果和结论,揭示了蛋白质印迹技术方法学中一个需要加以充分关注的问题,对于科学掌握和应用该技术具有积极作用.     

种子的油体蛋白及其基因

本文就组成油体半单位膜的主要蛋白质－油体蛋白的结构、功能以及编码油体蛋白的基因组成和在生长发育过程中基因表达调节等方面的研究进展进行了综述。     

活细胞内亚细胞结构蛋白质组学研究新技术——几种邻近标记策略的应用及比较

真核细胞内多种无膜及有膜细胞器为各种生物学过程的发生提供场所.被膜细胞器通过它们之间的膜接触位点所进行的信息交流和物质交换是维持生命活动所必需的.绘制活细胞中细胞器或膜接触位点等处的蛋白质组图谱,将有助于解析这些部位的生物学功能及作用机制,并为研究细胞器相互作用提供基础.但由于无膜细胞器或膜接触位点很难分离纯化,传统的生化方法难以系统解析其中的蛋白质组.最近报道的几种基于酶类的蛋白质邻近标记技术,则为系统分析上述空间受限的蛋白质组这一难题提供了有效的解决方案.通过将能催化产生活性自由基(最常见的是生物素及其衍生物的自由基)的酶连接到目标蛋白上,可对其邻近的蛋白质组进行共价标记,从而使后者的分离和鉴定成为可能,并可以运用于活细胞中的动态标记.我们在此综述了几种最新的邻近标记策略的原理及应用,并对它们的优势与局限性进行了比较,以期为细胞器互作的蛋白质组学研究提供参考.     

真核细胞内膜泡运输的分子机制

真核细胞内一些蛋白质需靠膜泡进行定向运输,膜泡是在外衣蛋白的作用下形成的,根据外衣蛋白的不同,膜泡分为笼蛋白,COPⅠ和COPⅡ外衣膜泡,这些外衣膜泡分别在细胞内不同供膜（donor membrane)处形成,因为被运输蛋白具有分选信号可与供膜上相应的受体结合,所以能被包裹在特异的膜泡之中,在膜泡形成过程中,外衣蛋白在“芽生”膜泡的细胞质侧组装成笼状外衣,帮助“芽生”膜泡从供膜处脱落,一旦笼状外衣膜泡脱离供膜,笼状外衣蛋白便发生解聚而成为无衣膜泡,无衣膜泡在Rab蛋白的调控下可定向运输蛋白质,而解聚后的外衣蛋白可重新介导新的外衣膜泡形成。     

测定酶活性的电化学方法及其影响因素

作者曾用固定化细胞技术分离了人红细胞膜表面蛋白质。为了能快速、准确、自动连续地测定固定化红细胞膜中乙酰胆碱酯酶(AchE)等各酶的活性,设计组装了一架酶活性电化学测定装置。本文报道试用该装置作测定胆碱酯酶(ChE)纯品的实验结果。早在1962年,Kramer等人就报道了一种半微量测定AchE,ChE,以及各种硫代胆碱酯的电化学方法。以后又将该仪器应用于测定高毒性有机磷化物,葡萄糖氧化酶、黄嘌呤氧化酶,以及过氧化物酶与过氧化氢酶类。并设计了能酶反应连续分析的装置。在此基     

一种易推广的“渗透作用”实验方法

“渗透现象”是人教版高中生物学教材必修1第4章第1节“物质跨膜运输实例”中所设立的演示实验。由于教材介绍的渗透实验装置存在一些缺点：如长颈漏斗口直径大不易找到合适的半透膜,且半透膜扎口处密封难度大;玻璃管内径大,     

线粒体融合机制研究进展

在活细胞内线粒体融合与分裂间的动态平衡影响着线粒体的形态、数量以及在细胞中的分布。由于线粒体融合涉及四层膜,因而需要特殊的融合机制,以保证线粒体融合的正常进行。章着重对线粒体融合过程以及与线粒体融合有关的蛋白质进行了综述,指出：线粒体内膜的融合与外膜的融合由大约800kDa的蛋白复合物（称之为“融合装置”）耦联在一起,与此有关的蛋白质有Fzolp、Ugolp和Mmmlp等。     

猪肠衣（半透膜）干制品的制作方法

猪肠衣（半透膜）干制品的制作方法猪肠衣是高中《生物》渗透作用实验中采用的一种半透膜。坚韧耐用,接近生物膜,实验效果好。为了实验方便,可将猪肠衣制作成干制品保存备用。制作方法是：（１）将新鲜猪小肠用剪子剪成６６ｃｍ左右的节段,在清水中洗净内外表面。（２...