放线菌素D和环己亚胺对伊贝母胚性愈伤组织中胚性细胞团和球形胚发生及大分

伊贝母（F,pallidiflora Schrenk)胚性愈伤组织接种于NAA1．0mg/L 6=BA2.0mg/L的MS培养基上,在培养10天前可产生大量单细胞到多细胞胚性细胞团,培养10至15天,逐渐形成大量球形胚,利用这样一个实验体系,在培养0,1,2,3和4天后加入放线菌素D（AMD,20ug/ml)和环己亚胺（CHM,20ug/ml),继续培养至第6天,分析大分子代谢动态和观察胚性细胞团的形成情况;培养6和10天后加入同样浓度的AMD和CHM,继续培养至第15天,分析大分子代谢动态及观察球形胚形成情况,结果表明：（1）培养0,1,2,3和4天加入AMD的分别抑制胚性细胞团的100％,63％和45％,加入CHM的抑制100％,85％和75％,培养6和10天后加入CHM抑制球形胚的100％和75％;（2）DNA,RNA和蛋白质在胚性细胞团和球形胚形成时出现两个峰值,其中RNA变化剧烈,最早出现峰值,AMD和CHM分别抑制RNA和蛋白质的合成;（3）过氧化物酶同工酶带对胚性细胞团和球形胚形成过程中顺序表达。AMD和CHM分别在转录和转泽水平上对其进行规律性抑制,根据以上结果,本文对伊贝母体细胞胚胎发生的机制进行了初步讨论。     

丁香杂交胚的组织培养

植物名称:丁香属植物(Syringa)。材料类别:①授粉40～50天的丁香(Syringameyeri×S.microphylla)杂交胚;②授粉60～110天的丁香。(Syringa persica×S.VuZgarls"Albaplena”)杂交胚。培养条件:基本培养基为MS培养基,蔗糖浓度3％,pH=5.8,培养温度25±2℃,光照强度1000～2500lx,每日光照14小时。杂交组合①取授粉后40～50天的杂交幼胚进行培养。杂交组合②取授粉后60～110天的杂交胚培养,从授粉后60天开始,每周取胚培养1次。当授粉90天后,每隔1天取胚培养1次,直到110天     

布鲁氏菌变态反应原的研究III．无外源蛋白菌素的试制和检测

用无外源蛋白的液体合成培养基制备布氏菌素,猪种和羊种布氏菌均能生长,但牛种菌不长。液体培养基中糖含量以1．0％—2.5％为好;间歇搅拌培养优于静_卜培养,其菌液浓度比静止培养高2一11倍;培养时间14天与25天的结果相近;猪种菌较羊种菌易于繁殖;对致敏豚鼠的皮肤试验,与现用的成品菌素相近或稍次,能引起明显的变态反应。     

人胚大脑神经细胞在无血清培养液中的生长特性

本文介绍无血清培养的人胚大脑细胞在体外存活10—14天,最长可达21天;含血清培养48小时后再置于无血清液中者,存活2—4周左右。神经细胞在分化成熟时所具有的形态学特性与体内相似。神经特异性烯醇酶(NSE)免疫组织化学法,证实培养3天的神经细胞开始成熟,成熟率逐日增加,最高达86％以上。10％血清组,培养日龄较长,可达月余,形态特征与无血清组相似,但非神经细胞数较高。[~3H]-GABA特异性摄取功能随培养日龄增多而增高。无血清培养法能产生较多的神经细胞,可作激素、微量元素、生长因子等对神经细胞分化发育影响的研究,是一种较好的单因子分析系统。     

愈伤组织继代接种量、继代周期和年龄对软紫草原生质体脱壁的影响

本文的实验结果表明：软紫草愈伤组织脱壁所需的适宜酶浓度为：０．１％果胶酶十０．２５％纤维素酶;酶解处理的适宜时间与愈伤组织年龄有关：愈伤组织的适宜年龄随其继代周期、愈伤组织继代接种量而有变化。当接种量,１克／瓶,转代后７天进行原生质体分离：接种量３克／瓶,酶解材料则以培养５天愈伤组织为宜。继代周期１３天和１５天的比１５天和１５天的,适宜脱壁的愈伤组织当代培养天数要提前１天。     

米曲霉Aspergilus oryzae发酵生产曲酸的研究

分离到Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｏｒｙｚａｅ１３个菌株,其曲酸产量变化幅度１６６—４８６ｍｇ／ｍｌ,从中选出４个高产菌株。在１％酵母提取物和１５％蔗糖培养液中３０℃发酵培养,８—１０天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为１５％。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在ＹＥＳ培养液中培养１０天的菌体重新悬浮于含１５％蔗糖的ＹＥＳ培养液或０２Ｍ磷酸缓冲液（ｐＨ６５）中８—１０天曲酸产量仍可达到４５ｍｇ／ｍｌ以上。低温条件下制备的培养８—１０天的Ａｏｒｙｚａｅ菌体匀浆反应系统仅有痕量曲酸形成。     

水牛皮肤成纤维细胞的分离与体外培养

探讨水牛成纤维细胞的分离与传代培养方法。组织块培养法培养的成纤维细胞原代生长较慢,需12天左右方可汇合形成单层,而酶消化法培养的成纤维细胞原代生长相对生长快,仅需8天便可汇合形成单层。两种方法传代细胞的生长速度相似,仅需4-5天就可汇合形成单层。通过体细胞的核型分析发现,成纤维细胞在传代培养过程中的核型变化不大,66．67％～81．67％的细胞具有正常的二倍体核型,各代之间无显著差异。结果表明,水牛成纤维细胞均能稳定地进行传代培养。     

天然心房肽的氨基酸分析及对心肌细胞存活期影响的初步观察

通过体外培养大鼠心肌细胞实验观察到，低小牛血清（５％）Ｅａｇｌｅ液内培养心肌细胞的存活期为６～１０天；在加入２００μｇ天然心房肽的低血清Ｅａｇｌｅ液中心肌细胞存活期延长到１５～２０天，差异显著（Ｐ＜０．０１）；而正常Ｅａｇｌｅ液（含小牛血清１５％）中心肌细胞存活期可超过２０天。因此，认为天然心肌房肽对心肌细胞有一定滋养作用。     

水稻游离花粉培养的高频率再生植株

用二个水稻栽培品种（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａＬＳｕｂ．ｊａｐｏｎｉｃａ．）中花１１号和盐粳的花粉处于单核靠边期的共药,经低温处理１０－２０天,在无糖培养基中预培养２－４天后游离花粉进行培养。培养基为ＫＭ８Ｐ,附加１ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,１００ｍｇ／Ｌ脯氨酸,５００ｍｇ／Ｌ水解酷蛋白,９％蔗糖。培养５天,花粉进行一次分裂,１０天后分裂频率为２１．３％,２１天可见小愈伤组织形成。随即将直径为０．５－１．     

中华大蟾蜍(Bufo bufo gagarizans)血淋巴细胞的体外培养及其转化

本文报道了中华大蟾蜍血淋巴细胞的培养及其在植物血球凝集素(PHA)的刺激下所引起的转化,并初步查明了转化的淋巴细胞的S期、G_2期所占时间。用氚标记放射自显影手段测定了细胞的转化率。用姐妹染色单体区分着色的方法决定细胞的分裂次数。实验结果表明,在新鲜血液中有0.1—0.2％的白细胞具有合成DNA的能力。培养3天后,淋巴细胞转化率为14.8％,第5天达48％。培养的第6天有6—10％为第2次分裂。在秋水仙素处理3小时的情况下,有丝分裂指数为7％,延长处理时间至10—15小时,则平均达10％。最高有丝分裂指数为29％。转化淋巴细胞的S期为16小时,G_2期为3小时。     

灵芝深层培养的研究

由于灵芝临床试验和药理实验方面取得可喜的进展,研究灵芝的深层培养以扩大药源是十分必要的。初步研究 Ganoderma sp．在深层培养下的形态、生长过程及培养条件证明,适宜的深层培养基为：花生饼粉2％、蔗糖2％、(NH4)2SO4．0.25％、KH2PO4 0.15％、MgSO47H2O 0.07％、CaCO,0.2％,pH自然。在温度30℃下培养6—7天,pH降至3．8—4．1,残糖约0．13％,这时可以终止发酵。     

培养的小鼠心室肌细胞动作电位的波型分析

本实验自新生昆明小鼠心室分离心肌细胞,用80％MEM+20％小牛血清培养四天,成功地制备了保持在体心室肌细胞电生理特性,并能自发发放快反应动作电位的培养心肌细胞模型;并根据V_(max)的区别,把培养的小鼠心肌细胞动作电位分为快反应,中间过渡型与慢反应三种类型。     

基因型和培养条件对大麦花药培养的影响

不同基因型大麦(Hordeum vulgare)的花粉愈伤组织诱导率不同。带大麦黄花叶病抗性基因的品种、品系或F_1杂种的诱导率(8.83—14.21％)高于不带抗性基因的材料(1.04～6.25％)。MS基本培养基舔加2,4-D,1 mg/l,Kt0.1 mg/l,BA0.2 mg/l,生物素0.1 mg,其诱导率(平均11.0995)高于MS添加2,4-D3 mg/l和Kt0.1 mg/l的诱导率(6.33％)及MS添加2,4-D 1 mg/l和Kt0.1 mg/l的诱导率(8.21％)。接种后先15℃暗培养5天,再转入25℃暗培养,其产生愈伤组织的高峰期推迟2—4天,但诱导率却从对照的5.84％提高到11.59％;25℃暗培养与25℃光-暗交替培养,诱导率无显著差异。     

生料可以制平菇栽培种

栽培食用菌大都用熟料培养菌种,这不但成本高且费时费事。我们大胆地改熟料为生料制平菇菌种并初获成功,现介绍如下: 培养基的配制晒棉籽壳1.5天,第二天下午以1∶1.5的清水浸透,撒上0.2—0.5％的高锰酸钾溶液消毒,加0.5％蔗糖、0.2％磷酸二氢钾、0.05％硫酸镁溶液,混合拌匀。含水量65％(手捏欲滴而不下),pH值7—9为宜。     

天花粉对钩端螺旋体生长的促进作用

为了提高钩端螺旋体(以下简称钩体)的检出率,我们从多种中药中筛选出对钩体有促进生长作用的天花粉。实验结果如下: 各型钩体在添加0.1％天花粉柯索夫培养基的生长情况:将添加0.1％天花粉的柯索夫培养基与常规使用的柯索夫培养基各1ml,接种1/1000稀释度钩体培养物0.1ml,混匀,置28℃温箱培养。从第3天到第7天,每天用3mm直径接种环挑取培养物一环,置载玻片上,用暗视野     

产氨短杆菌B1-15-15分段合成法制造5’-肌苷酸及其它核苷酸类物质

产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)B_1-15-15,为野生型,需生物素,对Mn++不敏感菌株,它具有“分段合成”核苷酸的能力,将外源核酸碱基转变为相应的核苷酸类物质。在30℃摇床培养3天后,加入0.3—0.5％的次黄嘌呤继续培养2天,可产生5'-IMP12一16克／升。发酵的适宜条件为：培养基分别灭菌前的pH,糖镁液为5．7(自然pH),磷氮液为7.0;发酵过程中补加尿素控制pH6.7—7.0,尿素总量0.7％左右;玉米浆用量3—4％;Mn++ 50一100微克／升。在30℃培养2天,补加0．4％尿素和0．4%次黄嘌呤,提高温度至37℃培养,可缩短发酵周期至2.5天,5'-IMP产量为9．54克／升。     

花椰菜幼苗下胚轴诱导再生植株

植物名称:花椰菜(Brassica oleracea varbotrytis)80天结球栽培品种。材料类别:无菌苗下胚轴。无菌苗培养:种子经70％酒精浸泡30秒钟后,转移到0.1％昇汞溶液灭菌20分钟,再用无菌水冲洗三次,接种于MS培养基上。培养温度为25—28℃;光强为散射光,约100 lux;每天照光12小时。培养8—10天时幼苗高约3—4厘米,子叶绿色,于无菌条件下先切除胚根、子叶和茎生长点。再把下胚轴切成约1厘米左右长的切段作为外植体进行诱导培养。     

幽门螺杆菌分离培养的研究

采用细菌培养法及快速尿素酶法分别检测了１６９例消化道疾病患者幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉ－ｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,ＨＰ）感染情况。标本经２０％葡萄糖运送培养基运送后,分别涂布于选择性培养基和本室改良的选择性培养基,３７℃微氧环境（５％Ｏ２,１０％ＣＯ２,８５％Ｎ２）培养８天。标本同时采用快速尿毒酶法进行检测。结果表明,细菌培养法与尿素酶法检测阳性率接近,分别为４６％和５５％;细菌培养第６天与第８天其阳性检出率相同;选择性培养基与本室改良选择性培养基对幽门螺杆菌的检出率差别明显,分别为３４％（１７／４９）和５１％（６１／１２０）,同时其杂菌生长率分别为５４％（２９／４９）和２５％（３０／１２０）。     

用Vero细胞制备马抗狂犬病血清抗原

以Vero细胞为基质制备马抗狂犬病血清用抗原,以期建立有效、经济、简便的抗原制备方法。用含10％马血清营养液对Vero细胞作适应性培养,接种狂犬病毒,以含1％～3％马血清营养液作维持液培养病毒,于第5,8天收获病毒液,经灭活、浓缩、离心等制成抗原。第5,8天收获病毒滴度可稳定在7．010gLD50／mL以上,灭活抗原具良好的抗原性,用NIH法测定效价达6．0IU／mL以上,可用作抗原生产抗狂犬病血清。     

红内期诺氏疟原虫体外培养的研究

本文报道连续进行诺氏疟原虫(Plasmodium knowlesi)体外培养183天的试验。 试验比较了改良Harvard培养液,RPMI 1640培养液和199培养液,我们认为用199培养液为基础培养液,再加入几种生长因素和15％小牛血清,可获得良好结果。该原虫用Trager燃烛法在100毫升三角瓶内装5—6毫升于37℃培养。至少有5批培养均连续进行一个月以上,第一批培养已达l 83天,稀释倍数为5．4×1082。至于另4批,我们认为既已能超过一个月,就可以无限期地连续进行培养,故未继续。培养至6I、120、127和15l天时,取培养物静脉注射健康猴,每 次剂量为十万个已感染疟原虫的细胞,所有动物均显虫血症。除一只猴外均死于感染,存活的猴所注射的是培养1 z0天的样品。当虫血症达11％时,感染逐渐减少,形成低度带血。随后证实,培养127天和151天的疟原虫仍未失去感染性。试验还证明,低温保存的感染血液和新鲜血液同样可用于培养。