三种细菌鞭毛染色法的比较

三种细菌鞭毛染色法的比较济宁医学院２７２１１３刘昌平,陈恩华鞭毛是某些细菌的一种特殊结构,必须通过特殊的染色法,将纤细的鞭毛增粗染色后,才能在一般光学显微镜下观察到,但由于影响因素较多,直接鞭毛染色往往难获成功,为了获得一种实验教学较为满意的染色法,...     

嗜肺军团菌效应蛋白之间的调控机制

嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种革兰氏阴性致病菌,它可以引起人类军团病。嗜肺军团菌的Dot/Icm分泌系统在其致病过程中至关重要,其向宿主细胞内转运约330种效应蛋白,通过修饰细胞调节因子、抑制细胞凋亡等一系列措施操纵宿主细胞的多种生命活动,以完成自身的增殖与侵染。为避免对宿主生理造成不必要的破坏,嗜肺军团菌已进化出复杂而精细的调控机制来平衡嗜肺军团菌毒力与宿主细胞的稳态,以确保嗜肺军团菌在宿主细胞内的生存。军团菌效应蛋白的功能及分子机制的研究近几年取得突破性进展,嗜肺军团菌效应蛋白之间的作用机理也成为我们进一步研究的热点。该文主要对嗜肺军团菌的致病机制及其效应蛋白间的调控机制进行了综述,为进一步了解嗜肺军团菌致病机制提供了一定的参考。     

PCR-酶切技术快速鉴定军团菌

[目的]建立一种新型的军团菌鉴定方法,并探讨该法在鉴定环境水源和临床标本军团菌菌株中的应用价值.[方法]根据军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物,以分离培养得到的可疑军团菌菌株作为模板,采用PCR法对模板扩增,并用限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,建立一种嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌的鉴定方法.对16株嗜肺军团菌、22株非嗜肺军团菌及12株其他细菌标准菌株进行检测,验证该方法的可靠性,最后用该法检测广州地区分离的169株可疑军团菌菌株并进行基因测序.[结果]该PCR方法检测嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌所有标准菌株均为阳性,非军团菌检测结果均为阴性;进一步的Hinf Ⅰ酶切分析可准确的区分嗜肺军团菌标准菌株;广州地区分离的169株可疑军团菌菌株经该法检测发现160株为军团菌,其中79株为嗜肺军团菌,与基因测序检测结果一致.[结论]PCR-酶切技术可快速、特异地检测军团菌及嗜肺军团菌,适用于环境水源和临床标本可疑军团菌菌株的检测.     

细菌鞭毛负染法

研制了一种细菌新的鞭毛染色法——鞭毛负染法:染液平铺在标本上,然后倾斜玻片,由染液上缘慢慢而连续地滴加冲洗液,使玻片上形成一层具有憎水性金色金属光泽薄膜。镜下观察背景呈鲜艳的红紫色,菌体呈深紫红色,菌周及鞭毛无色,对比非常清晰。该法方法简便,取材容易,重复性极好,显示鞭毛的细菌种类多,标本能够保存。     

嗜肺军团菌分子检测最新进展

嗜肺军团菌是军团病最主要的致病原,在人工水体或空调冷却系统中多有存在,是影响公众健康的一大隐患。能否准确高效地检测嗜肺军团菌,对军团病的防控具有重要意义。分子生物学技术多具有快速、简便、特异、灵敏等优点,近年越来越多地应用于嗜肺军团菌的检测。本文简要综述了嗜肺军团菌分子检测的最新进展,介绍了PCR及其衍生技术、核酸等温扩增技术、基因分型、探针杂交及其相关技术,以及新一代测序在嗜肺军团菌分子检测中的应用,并简单讨论了嗜肺军团菌检测存在的问题,对嗜肺军团菌分子检测的前景进行了展望。     

嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的：建立针对嗜肺军团菌Mip基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法,并进行自来水和空调冷却水模拟标本的检测评价。方法：根据嗜肺军团菌Mip基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立嗜肺军团菌的实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法,对方法进行灵敏度及特异性评价,并对自来水和空调冷却水模拟标本中的嗜肺军团菌进行检测。结果：建立的方法对嗜肺军团菌的检测具有高度特异性,与3种非嗜肺军团菌和6种其他呼吸道病原均没有交叉反应;基因组DNA的检测灵敏度为1.6pg／μL,模拟自来水和空调冷却水标本的检测灵敏度为10CFU／mL。结论：建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适于嗜肺军团菌的日常监测和暴发疫情的应急诊断。     

一种改良鞭毛染色法

鞭毛染色是一项常用而又难达到预期效果的技术。欲使染出鞭毛结构清晰、形态完整、本底干净需反复摸索染色条件。现有的鞭毛染色方法,有些烦琐且结果不稳定。我们所用的改良鞭毛染色法,方法简便易行,染色效果亦较好。现将具体的染色方法及染色结果报告如下：     

赖夫生鞭毛染色法的改进

赖夫生染色法是细菌鞭毛染色的一种常用方法,最近发现了延长赖失生染剂使用寿命及改进染色效果的方法,并在此基础上进一步论证了乙醇在染色过程中所起的作用。     

辽宁省2006-2016年集中空调冷却水中 嗜肺军团菌毒力岛基因组携带情况

摘要:目的 了解2006?2016年辽宁地区集中空调冷却水中军团菌携带毒力岛基因情况及其致病性。方法 根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物,采用PCR法对2006?2016年辽宁省各大公共场所委托及抽样检测中分离到的军团菌,进行了毒力岛基因组检测,并与血清型进行比较分析,其中嗜肺军团菌15株、非嗜肺军团菌8株。结果 标准菌株ATCC（33152）12个毒力岛基因全阳性;9株LP1型嗜肺军团菌分别检出9~11个毒力岛基因,6株LP2-14型嗜肺军团菌分别检出6~9个毒力岛基因,8株非嗜肺军团菌分别检出2~11个毒力岛基因。结论 辽宁地区军团菌广泛存在公共环境集中空调冷却系统中,以LP1型嗜肺军团菌居多,LP2-14型嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌也普遍存在,而且所测菌株均携带毒力岛基因,是细菌感染性肺炎的重要隐患病源之一。     

副溶血弧菌端鞭毛基因系统的研究现况

副溶血弧菌是一种革兰阴性嗜盐性有鞭毛弧菌,具有两种类型不同的鞭毛系统：端鞭乏和侧鞭毛,以适应不同的环境变化。本文就端鞭毛基因结构及其调控等方面的研究进展作一综述。     

燕麦嗜酸菌鞭毛素的提纯及其活性检测

为阐明燕麦嗜酸菌(Aaa)鞭毛素作为一种病原相关分子模式(PAMP)诱导水稻免疫反应(PTI)的作用机理,采用机械震荡、丙酮沉淀以及离子交换层析进行了蛋白提纯,并用DAB染色法对其诱导水稻产生H2O2的能力进行了测定。结果表明,上述提纯方法的组合使用有效地提纯了分子量约为45 kD的鞭毛素,经浸润接种处理后诱导了水稻叶组织H2O2的产生。因此,Aaa鞭毛素提纯蛋白可用于后续的水稻PTI机理分析。     

公共场所水环境中活嗜肺军团菌的快速检测方法

旨在建立一种基于16S rRNA前体的分子学检测方法用于快速检测活嗜肺军团菌,应用该方法与ISO标准法调查公共场所水环境中嗜肺军团菌的水平及污染现状。此研究方法的理论基础在于营养刺激后可诱导嗜肺军团菌16S rRNA前体的合成,后者可作为检测细胞活性的指标。分别应用预刺激RT-qPCR法和ISO法对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌以及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异性、灵敏度。应用预刺激RT-qPCR法和ISO法检测公共场所水环境中的嗜肺军团菌,比较两者结果的一致性。结果显示,预刺激时间大于3 h时,嗜肺军团菌16S rRNA前体的增长缓慢,最佳预刺激时间设置为3 h。预刺激RT-qPCR法与ISO法均能较好地检出嗜肺军团菌,特异性均为100%,预刺激法的最低检测浓度(Limit of detection,LOD)为102Cell/L,ISO标准法的LOD为104 Cell/L。预刺激法及ISO法的总阳性率分别为43.5%(30/69)和40.6%(28/69),两种方法的检出率差异无明显统计学意义(C2=0.119,P=0.730)。预刺激RT-qPCR法是一种快速有效的检测活嗜肺军团菌的方法,诊断灵敏度及特异性高,是ISO标准法潜在的替代方案。     

改进的鞭毛染色方法

细菌的鞭毛染色较困难。我们从目前已报道的几十种方法中,选出应用较多的Leifson氏法、Blenden氏法、Rhodes氏法和山口氏法进行了比较,认为在银染色法中,Blenden氏法     

一株与同种13个型抗原广泛交叉的嗜肺军团菌

从太原市郊晋阳湖水分离到一株细菌,命名为Jin-1。其形态染色性、营养需要、生长特性、生化反应性、DNA和蛋白质分析结果均符合嗜肺军团菌鉴定要求。该株在IgM介导的两种凝集反应中与嗜肺军团菌14个血清群(型)标准株抗原普遍交叉,在IgG介导的IFA、ELISA、dot-ELISA中则呈现嗜肺军团菌血清群5特异性。鉴定Jin-1为抗原结构较标准株复杂的嗜肺军团菌5型。种、型鉴定结果已为CDC证实。在种内型间抗原交叉范围如此广泛的嗜肺军团菌尚未见于以往文献。因此认为Jin-1的交叉性抗原可能属于胸腺非依赖性抗原。     

用绿色荧光蛋白研究军团菌与寄主的相互关系*

原生动物作为军团菌的天然寄主,在军团菌的生存、增殖、毒力和抗逆性等方面起着重要的作用。通过多次转化筛选,获得了一种高量表达绿色荧光蛋白基因gfpmut2的自发突变质粒。该质粒在嗜肺军团菌细胞内稳定复制和表达;转化了该质粒的嗜肺军团菌在自然光下即可发出明亮的绿色荧光。以转化菌饲喂嗜热四膜虫BF1株后,在荧光显微镜下能清楚观察到细菌在细胞内的形态变化、增殖和裂解宿主细胞的过程。为研究嗜肺军团菌与原生动物寄主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。     

用绿色荧光蛋白研究军团菌与寄主的相互关系

原生动物作为军团菌的天然寄主,在军团菌的生存、增殖、毒力和抗逆性等方面起着重要的作用。通过多次转化筛选,获得了一种高量表达绿色荧光蛋白基因gfpmut2的自发突变质粒。该质粒在嗜肺军团菌细胞内稳定复制和表达;转化了该质粒的嗜肺军团菌在自然光下即可发出明亮的绿色荧光。以转化菌饲喂嗜热四膜虫BF1株后,在荧光显微镜下能清楚观察到细菌在细胞内的形态变化、增殖和裂解宿主细胞的过程。为研究嗜肺军团菌与原生动物寄主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。     

嗜肺军团菌毒力岛分子分型及其致病性研究进展

嗜肺军团菌是引起社区获得性和医院内感染性肺炎的重要病原体,中央空调冷凝塔水系统是引发军团菌病的重要传染源,在国内外时有暴发流行,病死率较高。嗜肺军团菌的致病性与其毒力岛基因组密切相关。简要概述了嗜肺军团菌毒力岛、分子分型及其致病性。     

嗜肺军团菌效应蛋白质介导的新型泛素化过程

泛素化是真核细胞特有的蛋白质翻译后修饰方式,调节真核细胞内多种重要生理过程,例如蛋白质稳态、细胞周期、免疫反应、DNA修复以及囊泡转运等。鉴于泛素化对于生命活动的重要性,病原菌在与宿主细胞的长期进化过程中衍生出一系列针对宿主泛素化过程的效应蛋白质,调控宿主体内泛素化过程,从而构建有利于病原菌自身生长繁殖的内环境。嗜肺军团菌是一种革兰氏阴性菌,是军团菌肺炎的致病菌,能够引起发热和肺部感染,重型病死率高达15%~30%。Dot/Icm Ⅳ型分泌系统是嗜肺军团菌侵染过程中最主要的毒力系统。在侵染宿主细胞的过程中,嗜肺军团菌利用该分泌系统,分泌超过330种效应蛋白质,协助细菌在宿主胞内生存、增殖和逃逸。多种嗜肺军团菌效应蛋白质通过直接或者间接的方式对宿主泛素化过程进行调控。近年的研究发现,多种效应蛋白质可以介导不同于真核生物经典泛素化的新型泛素化过程。本文介绍了嗜肺军团菌效应蛋白质介导的新型泛素化过程的最新研究进展,为理解泛素化过程在嗜肺军团菌致病过程中的重要作用提供参考依据。     

嗜肺军团菌生物膜形成及其影响因素

嗜肺军团菌在自然环境和人工供水系统中普遍存在,能够在阿米巴原虫和其他原生动物体内繁殖,所引起的军团菌病主要表现为严重的呼吸系统疾病。但在自然环境中,嗜肺军团菌的生存和繁殖受到多菌种生物膜形成和繁殖的影响,一些军团菌病的暴发与生物膜的存在相关。因此,阻止自然环境和人工水系统中生物膜的形成显然已成为降低水污染的有效策略之一。根据近年来的报道分别对影响嗜肺军团菌生物膜形成的生化因子和嗜肺军团菌的毒力因子,以及其他生物物种在嗜肺军团菌生物膜形成过程中所起的不同作用等进行综述。     

嗜肺军团菌核酸疫苗研究进展

嗜肺军团菌通过气溶胶的形式感染人和动物,引起军团菌性肺炎,危害极其严重,但该病目前尚无有效的预防措施。军团菌病疫苗的研究经历了灭活疫苗、减毒活疫苗和蛋白亚单位疫苗不同阶段,但至今尚未能在临床得到应用。核酸疫苗作为一种新型疫苗,能有效诱导机体产生细胞免疫应答,符合兼胞内寄生菌嗜肺军团菌的预防需要,并且还具有诸多其他优点,引起了研究者们的兴趣。对嗜肺军团杆菌核酸疫苗的研究现状进行了简要介绍。