基于高通量测序的不同年龄恒河猴肠道菌群结构差异分析

目的观察不同年龄恒河猴肠道菌群结构和丰度的变化。方法 50只恒河猴,分为成年(5～10岁)、老年(10岁以上)2组,其中成年组33只,老年组17只。采集动物的新鲜直肠粪便,提取DNA后使用Illumina高通量测序平台对样本中细菌16S rDNA-V3区进行测序,定量分析肠道菌群的结构和丰度。结果老年组和成年组获得的优化序列数差异无显著性(P> 0.05)。α-多样性分析,老年组恒河猴肠道菌群的Chao1指数(P=0.0174)、Simpson指数(P=0.0258)、ACE指数(P=0.0121)与成年组比较降低,Shannon指数与成年组比较升高(P=0.0132)。老年组与成年组相比,在门水平,拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度升高(P=0.0013),厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋体门(Spirochaetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、粘胶球形菌门(Lentisphaerae)相对丰度降低(P=0.0283,P=0.0002,P=0.0482,P=0.0242)。在科水平,Prevotellaceae相对丰度升高(P=0.0001),Ruminococcaceae、Clostridiales、Spirochaetaceae、Christensenellaceae相对丰度降低(P=0.0039,P=0.0080,P=0.0002,P=0.0021)。在属水平,老年组unidentified_Prevotellaceae相对丰度升高(P=0.0001),乳杆菌属(Lactobacillus)、八迭球菌(Sarcina)、unidentified_Spirochaetaceae相对丰度降低(P=0.0114,P=0.0227,P=0.0028)。β-多样性分析,老年组肠道菌群与成年组分布在不同区域,差异有显著性(P=0.003)。LEfSe分析,在成年组,链球菌属(Streptococcus)、布赫纳氏菌属(buchnera)、乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标记物。结论恒河猴肠道菌群的结构随年龄增长而改变。丰度降低,多样性增高。     

双歧杆菌试管内生物拮抗作用研究

目的 本实验从正常青少年体内分离出1株双歧杆菌,通过试管内研究双歧杆菌对大肠埃希菌和粪肠球菌的生物拮抗作用.为双歧杆菌临床应用及食品开发提供一定的基础理论依据和广阔的市场前景.方法 本项研究以从佳木斯大学健康学生体内分离出1株双歧杆菌为试材,将大肠埃希菌、粪肠球菌接种于PYG液体培养基中,37℃厌氧培养48 h,将菌液浓度利用分光光度计法调到2麦氏.将大肠埃希菌对照组分为10支,分离的双歧杆菌+大肠埃希菌组10支,分离的双歧杆菌对照组10支,分离的双歧杆菌+粪肠球菌组10支,粪肠球菌对照组10支,将以上50个试管全部置于厌氧培养箱内37℃培养48 h,将培养好的大肠埃希菌和粪肠球菌进行梯度稀释,然后用微量移液器吸取标本于每个培养基上滴3滴,每滴滴上由高稀释度向低稀释度,液体量为10 μL的菌液.晾干滴种好的培养基于适宜条件进行培养并选出适合菌落生长的稀释度,计算同一稀释度平均菌落数(x).结果 双歧杆菌12 h时对大肠埃希菌生长无显著性,在24h时检测不到大肠埃希菌的存在.12和24h时粪肠球菌与双歧杆菌混合组与粪肠球菌对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 体外对照实验研究该双歧杆菌对大肠埃希菌和粪肠球菌的生物拮抗作用,此株双歧杆菌只对大肠埃希菌有抑制作用,而对粪肠球菌无抑制作用,机制需要深入研究.     

彝族健康青年正常肠菌群值的调查

用正常肠菌群检查法,对四川省凉山彝族自治州32例16～25岁彝族健康青年的9类主要正常肠菌群进行调查,各类菌群数均值(Log10~n/克大便)按从多到少的顺位分别是:真杆菌9.47±0.93、乳杆菌8.96±0.6,拟杆菌8.76±1.83、肠杆菌科8.75±0.74、双歧杆菌8.24±0.64、肠球菌8.11±0.83、消化球菌7.84±0.93、葡萄球菌4.2±3.69、酵母菌1.29±1.97。另以9例与彝族青年生活条件相似的汉族青年作对照,结果表明生活条件相似的彝、汉族青年的正常肠菌群值之间无显著性差异。     

粪便中肠球菌SYBR GreenI荧光定量PCR检测方法的建立

目的利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法,建立肠球菌实时荧光PCR检测方法,并初步应用于粪便中肠球菌的检测。方法根据GenBank发表的肠球菌23S rRNA基因序列的保守区域设计合成特异性的引物;利用构建的质粒标准品绘制两种标准曲线,构建基因拷贝数、细菌数为分析指标的定量分析模型并初步应用于粪便标本的检测分析。结果所建立的SYBR GreenI荧光定量PCR方法检测灵敏度可达7个拷贝数/reaction。粪便样本根据实时荧光定量PCR方法所得的理论数值与培养菌值之间差异无显著性(P>0.05)。非炎性腹泻标本中菌数与健康成人标本中菌数差异无显著性(P>0.05)。灵敏度曲线所得的数值大于菌数标准曲线,可能由于DNA提取过程中存在部分的损失。检测粪便标本结果显示SYBR GreenI荧光定量PCR方法较平板计数法敏感、快捷、简便。结论本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的肠球菌定量检测方法。     

炎症性肠病患者的肠道菌群分布与血清TNF-α与IL-6水平的相关性

目的:探讨炎症性肠病患者的肠道菌群分布与血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-6(IL-6)水平的相关性。方法:选择我院收治的172例炎症性肠病患者作为观察组,同期选择在我院经询问病史及体格检查无消化道疾病的172例患者作为对照组,检测两组肠道菌群的分布与血清TNF-α与IL-6水平,并分析炎症性肠病患者肠道菌群分布与血清TNF-α与IL-6水平的相关性。结果:观察组的肠球菌、粪肠球菌和大肠埃希杆菌含量明显高于对照组,而双歧杆菌含量明显低于对照组(P0.05)。观察组的血清TNF-α与IL-6值分别为0.98±0.54 ng/m L和0.98±0.38 pg/m L,都明显高于对照组的0.61±0.37 ng/m L和0.55±0.34 pg/m L(P0.05)。观察组的双歧杆菌含量与TNF-α与IL-6呈现明显负相关性(P0.05),而肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希杆菌含量与TNF-α与IL-6都呈现明显正相关性(P0.05)。结论:炎症性肠病患者存在益生菌含量减少、有害菌含量增加的现象,这可能与患者血清促炎因子过量表达有关,二者的共同作用可促进炎症性肠病的发生及进展。     

西甲硅油联合枯草杆菌肠球菌对肠易激综合征的疗效观察

目的:探讨西甲硅油乳剂联合枯草杆菌肠球菌二联活菌肠溶胶囊(美常安)在肠易激综合征(IBS)治疗中的临床效果。方法:将2014年1月至2015年10月收治的180例IBS患者随机分为西甲硅油乳剂联合枯草杆菌肠球菌二联活菌治疗组92例和单药枯草杆菌肠球菌二联活菌治疗对照组88例,治疗4周后随访观察两组患者的治疗总有效率、不同胃肠症状的治疗有效率,以及不同型IBS患者的胃肠症状评分。结果:IBS治疗组的治疗总有效率为88.0%,明显高于对照组70.5%(P0.05)。治疗4周后腹胀和排便次数改善的有效率分别为94.6%和78.3%明显高于对照组的77.3%和60.2%(P0.05),但两组在腹痛和排便性状改善方面比较无明显差异(P0.05)。对两组不同胃肠症状评分结果:显示同组同型IBS治疗4周后胃肠症状评分均明显低于治疗前(P0.05)治疗有效。但两组同型IBS患者的治疗后胃肠症状评分比较时,仅在便秘型IBS患者差异明显(P0.05)。结论:西甲硅油乳剂联合枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊对肠易激综合征(IBS)患者治疗有效,对缓解腹胀和改善排便次数上治疗效果尤为明显,对IBS便秘型患者的胃肠症状恢复疗效最佳。     

267株肠球菌分布及耐药性分析

目的 了解肠球菌的分布特征和耐药特点,指导临床合理用药.方法 采用美国Dade Behring Mi-croscan Walkaway40全自动细菌鉴定及药敏测试仪对267株肠球菌进行鉴定和药敏测试,用全国医院感染监测网软件和P检验进行分析.结果 267株肠球菌以屎肠球菌和粪肠球菌为主,分别占60.7%和31.5%,以尿液和脓液中分离出最多,其次为血液和胆汁,依次是56.6%、14.2%、10.9%、9.7%,占总标本的91.4%.肠球菌不同种间的耐药性差异存在显著性.屎肠球菌的耐药率相对较高,除对万古霉素的耐药率3.7%最低,四环素37.7%外,对其它抗菌药物的耐药率均超过了50%.粪肠球菌的耐药率虽比屎肠球菌低,但对红霉素、四环素、氨基糖苷类的耐药性仍高,在60%以上.屎肠球菌和粪肠球菌对高浓度庆大霉素和链霉素的耐药率均在55%以上.共检出耐万古霉素株11株,对万古霉素的耐药率为4.1%.结论 肠球菌可引起多种部位感染,呈多重和高耐药性,耐万古霉 素的菌株出现,增加了感染控制难度,应引起临床重视.     

波形蛋白在不同年龄大鼠脊髓后角表达

目的:检测波形蛋白(Vimentin)在不同年龄大鼠脊髓后角的表达,探讨Vimentin在大鼠脊髓成熟和衰老过程中的表达变化.方法:对新生(7天龄)、成年(2月龄)、老年(24月龄)大鼠脊髓进行Vimentin和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标染色,并进行荧光强度的定量分析.结果:新生组Vimentin阳性产物荧光强度(59.73±9.92)较强,成年组Vimentin阳性产物荧光强度(43.26±7.99)较新生组弱,老年组Vimentin阳性产物荧光强度(40.65±6.84)较成年组弱,两组间差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:脊髓后角新生组、成年组、老年组Vimentin的表达随着年龄的增长而降低.     

蜂桶寨自然保护区中华姬鼠和社鼠肥满度的研究

我们于2008年4~11月对四川蜂桶寨自然保护区内中华姬鼠(Apodemus draco)和社鼠(Niviventer confucianus)肥满度在各年龄组及不同季节中的变化进行了研究,并初步分析了影响因素。结果显示：中华姬鼠肥满度在各年龄组中的性别差异不明显;在各年龄组间的差异显著,其变化趋势为老年组＞成年组＞亚成年组＞幼年组,亚成年组及老年组肥满度在各季节间无显著差异,而成年组则差异明显。社鼠肥满度在各年龄组间无显著性差异,亚成年组肥满度在各季节间差异显著,同时成年组及老年组肥满度在季节间无显著差异;二物种,亚成年组、成年组及老年组肥满度与海拔无明显的线性关系。分析认为,繁殖期能量的消耗的增加可能导致中华姬鼠肥满度在繁殖期下降,而社鼠成年及老年个体面对食物资源、能量需求等方面的季节变化,能够通过相应的调节,维持肥满度的稳定。     

粪肠球菌生物被膜形成早期相关基因的表达研究

目的:以粪肠球菌为研究对象,探讨粪肠球菌基因srtA(转肽酶A编码基因)、esp(肠球菌表面蛋白)与粪肠球菌生物被膜形成早期的相关性。方法:用逆转录PCR与实时荧光定量PCR方法对生物被膜和浮游菌组细菌srtA、esp两种与生物被膜形成早期相关的基因其表达进行检测,并进行统计学分析。结果:srtA、esp基因与粪肠球生物被膜菌早期形成密切相关。生物被膜菌组srtA、esp表达量分别是浮游菌组的7.9与13.5倍。结论:srtA、esp基因与粪肠球生物被膜菌形成早期密切相关,可能是生物被膜早期形成的上调因子。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.