甲状腺肿瘤细胞中p16基因的表达和突变

目的:研究抑癌基因p16在甲状腺肿瘤中的表达及突变.方法:采用免疫组织化学法检测60例甲状腺肿瘤细胞中p16蛋白的表达;采用聚合酶链式反应检测甲状腺肿瘤细胞中p16基因的缺失及外显子15'CpG岛异常甲基化.结果:60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达为46.7%(28/60);30例腺瘤中p16蛋白阳性表达分别为60.0%(18/30);30例腺癌中则为33.3%(10/30).60例甲状腺肿瘤中p16基因缺失为13.3%(8/60),30例腺癌中p16基因缺失为26.7%(8/30);30例腺瘤中无缺失(0/30),组间比较差异有显著性(P＜0.05).60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15'CpG岛异常甲基化为15.0%(9/60);30例腺癌中为30.0%(9/30);30例腺瘤中无外显子15'CpG岛异常甲基化(0/30),组间比较差异有显著性(P＜0.001).结论:抑癌基因p16参与了甲状腺肿瘤的发生发展,p16基因的缺失和外显子15'CpG岛异常甲基化在甲状腺恶性肿瘤中起一定的作用,并可能是甲状腺肿瘤中p16基因失活的主要机制.     

p16INK4a/p19Arf与年龄相关性胰岛β细胞功能

2型糖尿病是一种与年龄密切相关的疾病,随着年龄增加,胰岛β细胞增殖能力和分泌能力下降,糖尿病患病率明显增加,但其机制尚不清楚. 最近研究发现,细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)抑制剂p16INK4a是引起胰岛β细胞年龄相关性老化的重要调控因子.研究表明,通过p16INK4a介导的胰岛老化机制可能有如下两个：p38MAPK(mitogen-activated protein kinase)途径和PDGFR(platelet-derived growth factor receptor) 途径,两者均引起p16ink4a及p19ARF表达增加,而损害胰岛细胞增殖.本文综述年龄相关性胰岛β细胞功能下降的潜在机制,从而为改善胰岛β细胞功能提供新的分子靶点.     

p16蛋白在子宫内膜癌中表达的研究

为探讨P16基因在子宫内膜癌发生及发展过程中所起的作用,采用免疫组化SP法对38例子宫内膜癌(腺癌33例,腺棘皮癌4例,浆液性乳头状腺癌1例)及19例正常组织进行了p16蛋白的免疫组化检测,结果p16蛋白在正常组织中表达率为56.8%,在腺癌中的表达率为21.7%,在腺棘皮和浆液性乳头腺癌中的表达率为25.1%,与正常组差异显著,同时,p16蛋白在Ⅰ-Ⅱ期子宫内膜中的表达率为26.4%。而在Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜癌中的表达率为11.7% ,二者差异显著,说明p16蛋白在子宫内膜癌的发生及进展过程中起重要作用。 Abstract:To understand the role of P16 gene in the progression of carcinoma of endometrium,the expression of P16 gene was detected in 38 carcinoma of endometrium specimens and 19 controls by immunhistochemical SP method.The p16 protein positive rates of carcinoma of endometrium and control had significant difference (P<0.05),and the expression of p16 protein was also significant different between I～II grades and III～IV grades of adenocarcinoma of endometrium.So the p16 protein was closely associated with the generation and development of the carcinoma of endometrium.     

p16表达异常与肿瘤关系的研究进展

作为一种抑癌基因,p16能通过阻遏细胞周期而抑制细胞增殖,p16基因失活亦是肿瘤发生发展与侵袭转移的重要因素。导致p16失活的原因主要包括基因缺失或突变,以及基因启动子甲基化所致的表观遗传性表达抑制。但在部分肿瘤组织中,p16表达显著性上调,这可能是致癌因素激活p16基因表达的结果。本文简要综述近年来p16基因表达与肿瘤相关性的研究进展。     

喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究

研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA,采用聚合酶链反应技术,分别对30例喉癌进行p15基因第2外显子(p15E2)和p16基因第2外显子(p16E2)进行纯合缺失研究;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为13．3％(4／30),p16E2纯合缺失率为16．7％(5／30),p15E2、p16E2共同缺失率为6．7％(2／30)。在30例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为30％(9／30),扩增2～8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱,在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。     

低剂量顺铂通过p38MAPK介导的DNMT1下调降低p21与p16启动子甲基化上调p21与p16表达

低剂量顺铂可通过诱导p21与p16表达而诱导肿瘤细胞早衰,但其机制不明。本研究探讨了低剂量顺铂诱导的HeLa细胞衰老过程中p21与p16的上调机制。低剂量顺铂（4 μmol/L）处理HeLa细胞后,DNA甲基转移酶DNMT1蛋白水平降低;p21与p16启动子甲基化水平降低,二者mRNA及蛋白质水平升高;顺铂对DNMT1蛋白水平的降低作用与其激活p38MAPK有关,用SB203580抑制p38MAPK可部分逆转顺铂对DNMT1蛋白水平以及p21与p16启动子甲基化的降低作用,从而部分逆转顺铂对p21与p16表达的诱导;抑制p38MAPK 也可部分逆转低剂量顺铂诱导的HeLa细胞早衰。上述结果表明,低剂量顺铂可通过p38MAPK信号通路下调p21与p16启动子甲基化水平,进而上调二者的表达。这些结果为解析低剂量顺铂诱导肿瘤细胞早衰的信号转导机制提供了实验依据。     

p16基因甲基化状态与散发性大肠癌的相关性研究

为探讨p1 6基因甲基化状态与散发性大肠癌发生发展的关系 ,用甲基化特异性的聚合酶链反应 (methylati omspecificPCR ,MSP)结合测序检测散发性大肠癌及相应癌旁组织p1 6基因甲基化状态。研究发现p1 6基因在散发性大肠癌中甲基化率为 2 8 9% (1 3 4 5 ) ,有 8例癌及癌旁组织都发生了甲基化 ;有淋巴结及远处转移的甲基化率为5 0 % (8 1 6 ) ,高于无转移的甲基化率 2 0 8(5 2 4 ) (P <0 0 5 )。p1 6基因高甲基化是散发性大肠癌中常见的分子改变之一 ,大肠癌中p1 6基因高甲基化可能发生在癌变早期并与大肠癌的恶性进展有相关性     

nm23-H_1基因在乳腺癌的表达及其与p16基因表达的相关性研究

用ＬＳＡＢ免疫组织化学技术,检测了ｎｍ２３－Ｈ１基因在乳腺癌的表达情况。在１４３例乳腺癌中,７６．２％呈阳性表达。ｎｍ２３－Ｈ１基因表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分类、分级,雌、孕激素受体状态以及ｐ１６基因表达无明显相关（Ｐ＞０．０５）;但淋巴结转移组阳性率６４．１％（４１／６４）显著低于无转移组８３．９％（５２／６２）（Ｐ＜０．０５）,ｎｍ２３－Ｈ１阳性表达组的死亡率３５．７％（１０／２８）,也明显低于阴性组５５．６％（５／９）,提示检测ｎｍ２３－Ｈ１蛋白可能成为乳腺癌患者的一种新的预后指标。ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ１６基因表达无明显相关性,提示二者可能通过两种不同的机制和途径影响癌转移和预后,联合检测此二种蛋白对判断乳腺癌患者的癌转移和预后更有临床意义。     

可逆的组蛋白乙酰化调控p16的表达

p16^INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用,研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16^INK4a启动子活性,而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16^INK4a启动子活性的增加,HDAC3/4能够降低p16^INK4a mRNA和蛋白质的水平．染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明转染p300表达质粒能够逆转由HDAC3/4介导的p16^INK4a启动子组蛋白的低乙酰化状态．此外,免疫荧光实验结果表明HDAC4的核质穿梭起着重要的作用．免疫印迹和染色质免疫沉淀实验证明HDAC的抑制剂丁酸钠盐(NaBu)能通过诱导组蛋白的高乙酰化而促进p16^INK4a的表达．基于这些实验结果,推测出可逆的组蛋白乙酰化参与p16^INK4a基因转录调控的模型．     

鼻咽癌CT 表现与p53 、p16 蛋白异常表达关系的研究

目的：研究p53、p16蛋白表达与鼻咽癌Cr表现的关系。方法：经病理证实鼻咽癌50例,全部病例做鼻咽轴位平扫,部分病例同时做冠状扫描。应用免疫组化SABC法检测所有病例中的p53、p16蛋白的表达。结果：鼻咽癌及鼻咽粘膜慢性炎症中p53蛋白表达率分别为60％和10％,p16蛋白表达率分别为32％和85％,p53、p16表达在两者间的差异有极显著意义（P〈0．005）。p53蛋白表达与鼻咽癌分化程度及Cr表现为副鼻窦受累,颅底骨质破坏相关（P〈0．05）。p16蛋白表达与鼻咽癌预后及Cr表现为颈部淋巴结转移相关（P〈0．05）。p53与p16有相关性（P〈0．005）。结论：p53、p16在鼻咽发生、发展中起重要作用,p53蛋白表达与鼻咽癌分化程度、浸润深度、颅底侵犯有一定相关性,p16蛋白表达与鼻咽癌颈部淋巴结转移和预后有一定相关性,p53,p16可作为评价鼻咽癌CT表现恶性度及预后的指标。     

人类癌组织中端粒酶活性与p16基因表达的相关性

端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的RNA酶,依其自身序列逆转录合成端粒序列并添加到染色体末端,以保证细胞分裂的稳定性。近年来的研究已证实端粒酶的激活是许多恶性肿瘤发生的先决条件。p16基因作为一种重要的抑癌基因,其编码产物P16蛋白可通过p16-cyclinD/CDK-pRB途径调控细胞周期。在多种肿瘤中均出现p16基因表达异常,其表达缺失与人类肿瘤的发生发展关系密切。就端粒酶活性与p16基因表达在人类癌组织中的相关性及其可能作用机制进行总结分析。     

宫颈癌p16基因甲基化及表达的研究

为了探讨p16基因甲基化及异常表达在宫颈癌中的意义,分别采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测不同病理类型和临床分期的60例宫颈癌组织中p16基因启动子区域5´CpG岛甲基化状态;采用PCR方法检测p16基因外显子1（E1)和外显子2(E2)纯合缺失情况;采用免疫组化的方法分析p16蛋白的表达缺失和减弱情况。结果显示正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化,且无E1和E2缺失和p16蛋白表达异常。60例宫颈癌标本的甲基化率为21.67%（13/60）;p16 基因缺失率为15.00%（9/60）;p16蛋白表达下降或无表达为51.67%（31/60）。可见p16基因蛋白的阳性表达率随着临床分期升高呈明显下降趋势。结果提示p16基因失活在宫颈癌中多见且与病理分级密切相关。p16 基因甲基化在宫颈癌发生中起着一定作用。Abstract： To detect hypermethylation and aberrant expression of the p16 gene in cervical carcinoma (CC), methylation-specific PCR (MSP) was used to determine the methylation status of 5´CpG islands of the p16 gene, loss or decrease of p16 expression was analyzed by immunohistochemistry (IHC), and homozygous deletion of exon 1 (E1) and/or exon 2 (E2) was determined by PCR. in 60 cases of CC at different pathological grades and clinical stages. The results showed absence of methylation and presence of normal expression of the p16 gene in the control and adjacent tissues of CC. Hypermethylation, loss or decrease of expression and deletion of the p16 gene were detected in 21.67%(13/60), 51.67%(31/60) and 15.00%(9/60) of the tumor tissues, respectively. The rate of p16 expression markedly reduced with the increase of clinical stages. Our data suggested that inactivation of the p16 gene was a frequent event and positively correlated with pathological grades in CC, and that methylation of the p16 gene was an important event in carcinogenesis of CC.     

p16基因的原核表达及抗P16抗血清的制备

采用基因重租技术,将野生型p16 cDNA通过中间载体pVL1392最后载入表达载体pGEX-5T,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌,蛋白质印迹证实42×10~3的融合蛋白GST-P16的表达。表达了GST-P16的重组菌经加热破菌后行SDS-PAGE,将GST-P16蛋白条带切下后经反复冻融于皮内多点注射免疫家兔。所收获的兔血清经蛋白质印迹法检测到抗P16抗体滴度为1:625。结果表明通过pGEX-5T融合蛋白表达系统能方便地提供制备抗P16抗血清的免疫原,该免疫原未经纯化并未影响抗P16抗血清的产生。     

p16基因甲基化与表达在子宫内膜癌中的意义

肿瘤抑制基因p16定位于9号染色体短臂2区1带,编码细胞周期调节蛋白p16,p16基因失活将导致细胞增殖失控。研究证实肿瘤抑制基因启动子区域5CpG岛甲基化是导致转录水平上基因失活的重要机制。为了研究p16基因甲基化状态及其表达异常与子宫内膜癌发生的关系,采用甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组化及PCR方法检测62例子宫内膜癌及相应癌旁组织、10例相应年龄正常子宫内膜中p16基因5′cpG岛甲基化状态、p16蛋白表达及p16基因外显子E,和E：表达缺失情况。结果表明癌旁及正常子宫内膜p16基因无甲基化,且无p16蛋白、外显子1和2的表达异常。62例子宫内膜癌中,15例甲基化,占24、2％;33例p16蛋白表达下降或无表达,占54．8％;p16基因外显子1缺失率16．1％(10／62),外显子2缺失率为30．6％(19／62),两者均缺失9．68％(6／62),至少其中1种缺失46、6％(29／62)。提示P16基因失活在子宫内膜癌中多见且与病理分级、临床分期密切相关。D16基因甲基化在子宫内膜癌的发生中起着重要作用。MSP法测定基因甲基化状态准确且简便可行。     

宫颈癌细胞系中HPV病毒感染与P16和E-cadherin表达的相关性分析

目的探讨宫颈癌细胞系中HPV感染状态与P16和E-cadherin表达之间的相关性。方法应用免疫细胞化学染色、免疫荧光、Western-blot以及RT-PCR的方法检测HeLa、SiHa和C33A三个细胞系中P16和E-cadherin的表达情况。结果HPV阳性的两个细胞系HeLa和SiHa中P16的表达呈强阳性而E-cadherin的表达呈弱阳性,HPV阴性的细胞系C33A中P16的表达为弱阳性而E-cadherin呈强阳性表达。结论宫颈癌细胞系中HPV的感染与P16的表达呈正相关而与E-cadherin的表达呈负相关。     

p16和Ki67在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的探讨p16和Ki67在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达,研究它们对NSCLC患者预后的影响及其与临床及病理因素之间的关系。方法收集NSCLC术后标本160例及正常肺组织20例（对照组）,应用免疫组化法检测NSCLC组织和正常肺组织中p16和Ki67的表达。结果在NSCLC组织和正常肺组织中,p16和Ki67的阳性表达率分别为23.8%、82.5%和90%、5%,差异有统计学意义（P〈0.05）。多因素分析：PTNM分期、淋巴结转移、p16及Ki67的表达是影响NSCLC根治术后患者预后的独立因素（P〈0.05）;p16阳性组与阴性组5年生存率分别为55.3%和18.0%,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ki67阳性组与阴性组5年生存率分别为23.5%和42.9%,差异有统计学意义（P〈0.05）,p16和Ki67表达呈负相关（P〈0.05）。结论 p16和Ki67参与了NSCLC的发生发展,p16和Ki67的表达水平与NSCLC的发展及预后有一定的关系。     

口腔鳞癌中c-myc、c-erbB2、p16和p53mRNA的表达及意义

目的探讨口腔鳞癌中癌基因c]myc、c-erbB2和抗癌基因p16、p53四种基因mRNA的表达及其作用.方法用原位杂交和图像分析相结合的方法对30例口腔鳞癌和5例正常口腔粘膜中癌基因c-myc、c-erbB2和抗癌基因p16、p53的mRNA表达进行了定性、定位和定量研究.结果口腔鳞癌中c-myc、c-erbB2、p16和p53四种基因的mRNA表达率依次为83.3%、70%、93.3%和80%;统计分析发现,这四种基因的mRNA表达在不同性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤浸润或转移状况、复发性间均无显著性差异(P＞0.05);c-myc和p16 mRNA表达间具有明显的相关性(P＜0.001).结论c-myc、c-erbB2、p53和p16这四种癌基因或抗癌基因的mRNA表达在口腔鳞癌发生发展中都具有重要作用,c-myc和p16 mRNA表达间具有一定的内在联系.     

p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达

在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC-1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC-1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC-1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757 bp～323 bp之间.缺失PC-1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC-1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC-1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC-1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.     

NDGA上调宫颈癌SiHa细胞p27和p53的表达

<正>去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)是脂氧合酶非特异性抑制剂,近年来发现NDGA及其衍生物具有抗病毒和抗肿瘤作用。我们先前发现NDGA能通过促进组蛋白H3乙酰化上调p21表达的方式将宫颈癌SiHa细胞抑制于G_1期。在此基础上,我们进一步探索了NDGA对其他调节G_1/S期转换关键因素:p27和p53的影响。