加味苇茎汤及其成分芹菜素对肺腺癌A549细胞增殖、周期与凋亡的影响

探讨加味苇茎汤含药血清及成分芹菜素对肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,选用肺癌A549细胞体外培养,在不同浓度含药血清及芹菜素作用下,用MTT法检测细胞生长抑制率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、hoechst33342染色检测细胞凋亡形态。结果显示,加味苇茎汤含药血清及芹菜素对A549的生长抑制率:24 h分别为31%、34%,48 h分别为45%、53%;流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经加味苇茎汤含药血清处理后主要阻滞在G2期,而芹菜素能明显引起细胞凋亡。荧光显微镜下观察到较典型的细胞凋亡形态甚至细胞脱落,视野内细胞核数明显减少。该研究结果显示,加味苇茎汤含药血清及芹菜素能明显抑制A549细胞的增殖,引起细胞周期阻滞、诱导其凋亡。     

壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的检测壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制效果及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,并利用荧光Hoechst33258染色法检测细胞凋亡状况。最后通过免疫细胞化学方法研究壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响。结果壳寡糖能够抑制SMMC-7721细胞增殖,并且促进SMMC-7721细胞的凋亡,并且壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Caspase-3的表达和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,此作用可能是通过促进Caspase-3的表达和抑制Bcl-2的表达来实现的。     

自噬在熊果酸诱导前列腺癌PC3细胞凋亡中的作用机制研究

为了探讨自噬在熊果酸抑制前列腺癌PC3细胞凋亡中的作用机制,PC3细胞培养至对数生长期后,以无糖、无氨基酸培养液代替原培养液培养细胞,并用不同浓度的熊果酸进行干预。72 h后收集细胞,采用透射电镜和免疫荧光技术观察PC3细胞自噬情况;Western Blot检测ATG5和Beclin-1蛋白表达;Elisa法测定Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9含量;流式细胞技术检测PC3细胞凋亡情况。结果表明,PC3细胞饥饿72 h后,细胞自噬明显增强。与对照组比较,熊果酸作用后的细胞自噬程度明显减弱;ATG5和Beclin-1蛋白表达显著减少(P0.05);Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9含量显著增加(P0.05);PC3细胞凋亡率极显著升高(P0.01)。实验初步揭示,熊果酸可通过抑制饥饿状态的前列腺癌PC3细胞自噬,并进一步通过促进凋亡因子的分泌诱导其凋亡。     

罗汉果醇抗肿瘤活性及其作用机制研究

罗汉果醇是罗汉果皂苷的苷元,有研究报道罗汉果皂苷V具有防癌抑癌作用。该研究采用噻唑蓝实验( MTT法)检测罗汉果醇对不同肿瘤细胞增殖的抑制情况,以及不同浓度的罗汉果醇对CNE1细胞的增殖抑制率;应用细胞克隆形成实验进一步验证罗汉果醇对CNE1细胞增殖的抑制作用;采用Annexin V/PI 双染法检测罗汉果醇对CNE1细胞凋亡的影响;以实时定量PCR技术检测罗汉果醇对CNE1细胞中Caspase-3、Sur-vivin、Bax和Bcl-2基因的mRNA 表达水平的影响。结果表明：罗汉果醇能显著抑制DU145、HepG2、A549、CNE1、CNE2细胞的增殖,其中对CNE1细胞增殖的抑制作用最为显著,并呈剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50为(81.48±4.73)μmol·L-1;通过对CNE1细胞进一步的克隆形成实验,也验证了这一点;Annexin V/PI 双染法可见随着浓度的增加,凋亡比例增加;实时定量PCR技术检测显示罗汉果醇处理后,促凋亡基因Caspase-3、Bax的表达增加,抗凋亡基因Survivin、Bcl-2的表达减少。因此,罗汉果醇可能是通过促进Caspase-3、Bax等促凋亡基因和抑制Survivin、Bcl-2等抗凋亡基因的表达,来诱导肿瘤细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤活性。     

姜黄挥发油对人皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖、迁移和侵袭作用及其促凋亡机制研究

研究姜黄挥发油(TVO)对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞体外增殖、迁移与侵袭的影响,初步探讨其凋亡作用机制。运用MTT法检测不同浓度TVO在不同时间段(24、48、72h)对SCL-1细胞体外增殖的影响;细胞划痕和细胞侵袭实验检测TVO对皮肤鳞癌SCL-1细胞体外迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术分析及显微镜观察确定TVO诱导SCL-1细胞的诱导凋亡率;Western blot检测TVO对皮肤鳞癌SCL-1细胞Survivin及Caspase-3蛋白表达的影响。TVO对SCL-1细胞的体外增殖、迁移和侵袭具有抑制作用(P0.05),且呈时间-剂量依赖性;流式细胞仪分析及显微镜观察表明TVO可诱导SCL-1细胞凋亡(P0.05),且与其浓度呈正相关;Western blot检测结果表明TVO能显著上调凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(P0.05)、下调Survivin蛋白的表达(P0.05)。TVO能够显著抑制人皮肤鳞癌SCL-1细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力,且诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节凋亡相关蛋白survivin、caspase-3蛋白的表达。     

夏枯草对食管癌细胞Survivin和Caspase-3表达的影响及机制研究

目的：观察夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞Survivin和Caspase-3基因表达影响,研究夏枯草抗食管癌作用及其机制。方法：IC50浓度夏枯草提取物作用于食管癌Eca-109细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR、Western Blotting法检测Survivin和Caspase-3基因及蛋白表达,Annexin-V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。结果：食管癌Eca-109细胞出现增殖抑制, Survivin表达减少,Caspase-3表达增加,细胞凋亡率增高。结论：夏枯草可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,抑制Survivin表达,促进Caspase-3表达,促进细胞凋亡。     

Anisomycin诱导小鼠艾氏腹水癌细胞凋亡

目的:探讨Anisomycin诱导EAC细胞凋亡的机制。方法:利用MTT法观察Anisomycin对EAC细胞增殖的影响;应用AnnexinV-FITC和PI双染色检测Anisomycin作用下EAC细胞凋亡的变化;琼脂糖凝胶电泳检测Anisomycin作用下EAC细胞的DNA断裂片断;采用RT-PCR检测Anisomycin作用下Caspase-3 mRNA的转录水平;Western Blot分析Anisomycin处理的EAC细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:Anisomycin对EAC细胞增殖的抑制率随浓度的升高而增高,EAC细胞的凋亡水平也上升,随着Anisomycin浓度升高EAC细胞DNA断裂的寡核苷酸片段亦越趋明显,Caspase-3的mRNA和蛋白水平也上调,并明显高于阿霉素组结论:结果表明,Anisomycin能够抑制EAC细胞的增殖,在体外可能通过激活Caspase-3凋亡信号而诱导EAC细胞的凋亡。     

去乙酰化酶抑制剂TSA介导Ku70乙酰化对结肠癌HT29细胞凋亡和自噬的影响

目的:探讨不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对结肠癌HT29细胞的增殖、凋亡和自噬影响及其机制研究。方法:取对数生长期人结肠癌HT29细胞,采用MTT法检测不同浓度TSA处理对其细胞活力影响,并根据IC50值确定适宜给药浓度;采用流式细胞术检测不同浓度TSA处理后结肠癌HT29细胞的凋亡情况;Western blot验证空白对照组与TSA给药处理组中凋亡标志蛋白Ku70、acetrl-Ku70、Caspase3、Bax、Bcl-2和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达。结果:MTT法实验结果表明TSA对结肠癌HT29细胞具有时间和浓度依赖性抑制作用,根据IC50=1.12μM,本研究中TSA的给药浓度为0.5μM和1μM;流式细胞凋亡检测结果表明TSA能够显著促进结肠癌HT29细胞凋亡,且其促凋亡作用存在浓度依赖性;此外,Western blot检测结果证实,与空白对照组相比,TSA给药处理可显著上调上述细胞中acetrl-Ku70以及促凋亡蛋白Caspase3、Bax和自噬标志蛋白LC3和Beclin1的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)的体外抗结肠癌细胞的增殖、促进细胞凋亡和自噬作用与其上调Ku70蛋白乙酰化密切相关,有望成为临床潜在抗癌靶点。     

不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的: 以人胃癌MCG-803细胞为实验材料,探讨不同浓度桦木酸(BA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,为其临床应用提供依据。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分成 4 组,每组设置 3 个复孔,对照组为未加入桦木酸的 MGC-803 细胞,3 组实验组分别加入终浓度为10、20、30 μg/ml桦木酸处理细胞48 h后,通过激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态变化;检测桦木酸对细胞Caspase-3和Caspase-9活性的影响;利用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9和Cytochrome C(Cyt c)mRNA及蛋白水平的表达变化。结果: 与对照组比较, 各处理组Caspase-3和Caspase-9活性显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-9和Cyt c mRNA及蛋白表达均显著上调(P＜0.01)。结论: 在终浓度为10 ~30 μg/ml浓度范围内,桦木酸通过调节Caspase-3、Caspase-9和Cyt c的表达诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。     

甲基莲心碱促进骨肉瘤143B细胞凋亡的相关研究

目的:研究不同浓度甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞增值迁移的影响及其诱导凋亡的相关机制。方法:不同浓度甲基莲心碱处理骨肉瘤143B之后,CCK-8法检测甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞的增值抑制作用;细胞划痕实验检测不同浓度甲基莲心碱对骨肉瘤143B细胞迁移的影响;流式细胞术检测甲基莲心碱对癌细胞的凋亡率和周期分布;Western Blot检测甲基莲心碱对癌细胞相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:CCK-8显示甲基莲心碱能抑制骨肉瘤143B细胞的增值且以浓度和时间依赖的方式(P0.05);给药组(20, 40, 60μmol·L~(-1))24 h细胞迁移率分别为(62.35±4.15)%,(40.74±4.80)%,(25.10±5.52)%,较对照组(75.89±5.24)%明显降低(P0.05);流式细胞术结果显示甲基莲心碱能使骨肉瘤143B细胞周期阻滞于G0/G1期,且呈剂量依赖性诱导癌细胞凋亡(P0.05);Western Blot证明甲基莲心碱可促进癌细胞中促凋亡蛋白Bax的表达,而降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达(P0.05)。结论:甲基莲心碱可能通过激活线粒体凋亡相关蛋白的表达,发挥抗骨肉瘤143B的作用。     

Anisomycin诱导小鼠艾氏腹水癌细胞凋亡

目的：探讨Anisomycin诱导EAC细胞凋亡的机制。方法：利用MTT法观察Anisomycin对EAC细胞增殖的影响;应用An．nexinV—FITC和PI双染色检测Anisomycin作用下EAC细胞凋亡的变化;琼脂糖凝胶电泳检测Anisomycin作用下EAC细胞的DNA断裂片断;采用RT—PCR检测Anisomycin作用下Caspase-3mRNA的转录水平;WesternBlot分析Anisomycin处理的EAC细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果：Anisomycin对EAC细胞增殖的抑制率随浓度的升高而增高,EAC细胞的凋亡水平也上升,随着Anisomycin浓度升高EAC细胞DNA断裂的寡核苷酸片段亦越趋明显,Caspase-3的mRNA和蛋白水平也上调,并明显高于阿霉素组。结论：结果表明,Anisomycin能够抑制EAC细胞的增殖,在体外可能通过激活Caspase-3凋亡信号而诱导EAC细胞的凋亡。     

活细胞中丝裂霉素诱导肺腺癌细胞凋亡机理的分析

为了分析丝裂霉素(mitomycin C,MMC)引起的肺腺癌细胞(ASTC-a-1)凋亡,实验通过CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对ASTC-a-1活性的影响,选择10μgS/mL的MMC处理ASTC-a-1.利用Hochest 33258染色观察MMC引起的ASTC-a-1凋亡,发现MMC可引起细胞缩小,核浓缩.为了进一步研究MMC引起凋亡的途径,通过脂质体转染pSCAT3质粒,利用光漂白技术和光谱技术观察Caspase-3是否活化;通过转染Bax和DsRed质粒观察Bax在凋亡过程中的位置变化及与线粒体的关系.结果显示:MMC可以诱导ASTC-a-1细胞内Caspase-3活化,并使Bax向线粒体转移聚集.在活细胞中证实Caspase-3和Bax参与了MMC引起的ASTC-a-1凋亡.     

姜黄素诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的机制研究

目的：胰腺癌恶性程度高、进展快、预后差,姜黄素对于抑制恶性肿瘤的发生和进程具有广泛的生物学效应。但姜黄素能否诱导人胰腺癌细胞凋亡,其具体作用机制如何？目前仍无报道。本研究拟观察姜黄素对人胰腺癌PANC．1细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导PANC．1细胞凋亡的机制。方法：不同浓度姜黄素处理人胰腺癌PANC-1细胞,流式细胞仪检测PANC-1细胞凋亡率,并分析Caspase-9和Caspase-3活性的变化,同时通过RT—PCR和Westemblot分析PANC-1细胞中P53表达的变化。结果：PANC-1细胞经不同浓度的姜黄素处理后,可以显著诱导细胞凋亡,并呈现一定的剂量依赖性,提示姜黄素具有一定抗肿瘤活性。姜黄素能够同时增加Caspase-9和Caspase-3的活性,并呈现一定的剂量依赖性,提示姜黄素可能通过Caspase-9和Caspase-3途径来诱导PANC．1细胞凋亡的发生。RT—PCR和westernblot结果显示,姜黄素可以显著增加PANC-1细胞中P53蛋白表达水平。结论：姜黄素可以显著诱导PANC-1细胞凋亡的发生,提高Caspase-9和Caspase-3的活性,同时增加的P53表达,并呈现一定的剂量依赖性,提示姜黄素诱导PANC-1细胞凋亡的过程可能与增加细胞中Caspase-9,Caspase-3以及P53的表达有关。本研究探讨了姜黄素诱导PANC-1细胞凋亡的分子机制,为姜黄素的进一步应用提供了新的思路和理论支持,在人胰腺癌的临床治疗中具有一定的潜在应用价值。     

蟾毒灵对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响

目的：探讨蟾毒灵对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖抑制和凋亡的影响,为卵巢癌临床治疗提供依据和分子基础。方法：不同浓度蟾毒灵处理卵巢癌SKOV-3细胞后,MTT法检测细胞增殖抑制作用,细胞免疫化学染色法检测细胞的凋亡,Western Blot法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白以及计算Bax／Bcl-2的比值。结果：蟾毒灵能够抑制SKOV-3细胞的增殖,且成时间和剂量依赖性,免疫荧光显示蟾毒灵对SKOV-3细胞具有凋亡作用,Western Blot检测发现蟾毒灵能够促进Caspase-3蛋白的活化,提高Bax／Bcl-2的比值。结论：蟾毒灵在体外能够抑制卵巢癌SKOV-3细胞的增殖和促进卵巢癌SKOV-3细胞的凋亡。     

四逆散对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制*

目的: 探讨含四逆散药液血清对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法: 将人肝癌HepG2细胞分为5组,每组3个复孔。实验组细胞用五氟尿嘧啶(5-FU)或不同浓度的含四逆散药液血清处理48 h后,用倒置显微镜观察含四逆散药液血清处理后人肝癌HepG2细胞形态的变化;MTT法检测含四逆散药液血清对HepG2细胞生长的抑制作用;荧光染色和流式细胞术分别分析含四逆散药液血清对HepG2细胞凋亡的影响。Rho123染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果: 与对照组比较,含四逆散药液血清处理人肝癌HepG2细胞后,细胞数量显著减少(P＜0.01),形态发生改变,呈现典型的凋亡细胞形态;G1期细胞数明显增加,而G2 期细胞数量显著减少(P＜0.05);Bax、Caspase-3、-9和Cyt-c的表达显著升高,而Bcl-2的表达显著降低(P＜0.05);随着含四逆散药液血清浓度增大,HepG2细胞线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)。结论: 四逆散可以抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

香菇Latcripin-8蛋白诱导HepG-2细胞凋亡的 机制研究

目的探讨香菇Latcripin-8蛋白对HepG-2肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法运用倒置显微镜、透射电镜、吉姆萨染色法和流式细胞仪法对细胞凋亡进行检测。采用Western blot法检测JAK3、STAT3和P53等凋亡相关蛋白的表达水平。采用Caspase-8活性检测盒检测Caspase-8活性。结果 HepG-2细胞经Latcripin-8蛋白作用后,倒置显微镜、透射电镜和吉姆萨染色等检测显示在形态学上Latcripin-8蛋白结构域抑制HepG-2细胞生长,并伴有凋亡小体产生。流式细胞仪检测显示该蛋白诱导HepG-2细胞凋亡。Western blot法检测结果显示JAK3和STAT3等蛋白的表达水平随药物浓度的增加而下降,而P53随药物浓度增加其表达量上升;凋亡相关因子Caspase-8的活性与对照组相比也均有不同程度的提高。结论香菇Latcripin-8蛋白结构域可能是通过JAK-STAT信号通路来诱导HepG-2肝癌细胞凋亡。     

穿心莲内酯抑制人结肠癌SW1116细胞增殖及诱导细胞凋亡作用的研究

目的:观察穿心莲内酯对人结肠癌SW1116细胞生长及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨其可能的机制.方法:用不同浓度的穿心莲内酯处理SW1116细胞,MTT检测穿心莲内酯对SW1116细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测bax、Bcl-2的蛋白表达.结果:穿心莲内酯能够剂量依赖型的抑制人结肠癌SW1116细胞的增殖,并诱导凋亡;穿心莲内酯与SW1116细胞作用48小时后Caspase-3酶活性显著增强;同时,穿心莲内酯处理SW1116细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调.结论:穿心莲内酯可抑制人结肠癌SW1116的增殖,诱导其凋亡,机制可能与调节Caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平有关.     

氯胺酮麻醉对乳鼠脑细胞凋亡的影响

目的探讨临床上常用的麻醉剂氯胺酮对乳鼠脑细胞凋亡的影响。方法新生7日龄SD大鼠15只,随机分成3组：氯胺酮低剂量组、高剂量组分别腹腔注射20 mg/kg、80 mg/kg氯胺酮,对照组给予等量的生理盐水。麻醉后24 h,取脑组织作HE染色,用TUNEL法检测脑细胞的凋亡情况,用免疫组织化学法检测Caspase-3的表达水平。结果与对照组比较,氯胺酮低剂量组的凋亡细胞增多但不明显（P〉0.05）,神经元核固缩和Caspase-3阳性细胞数明显增多（P〈0.05）;氯胺酮高剂量组的凋亡细胞数、神经元核固缩及Caspase-3阳性细胞数显著性增加（P〈0.05）。神经元核固缩、凋亡细胞和Caspase-3阳性细胞均以皮层区多见。结论 80 mg/kg氯胺酮可引起乳鼠脑细胞凋亡,以皮层区为主,Caspase-3的激活可能是其作用机制之一;20 mg/kg氯胺酮对乳鼠脑细胞凋亡的影响较轻微,其临床等效剂量为3 mg/kg。氯胺酮小儿麻醉用量不宜过多,避免引起脑细胞的凋亡。     

阿糖胞苷通过抑制HDAC6促进白血病细胞K562凋亡的机制研究

为了探讨阿糖胞苷(Ara-C)通过组蛋白乙酰化酶6(HDAC6)影响人红白血病K562细胞株凋亡作用及可能的机制。采用CCK-8法检测不同浓度的Ara-C作用24h后检测细胞活力;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;RT-PCR检测HDAC1-6基因的表达变化;Western blotting检测HDAC6、p38和p-p38的蛋白表达。CCK-8检测显示不同浓度的Ara-C能抑制K562细胞的活力,并呈浓度依赖性;FCM检测显示Ara-C能增加细胞的凋亡率;Hoechest染色发现Ara-C组细胞呈凋亡形态学改变;RT-PCR检测显示Ara-C能降低HDAC1、HDAC2和HDAC6的表达;FCM和Hoechest染色发现HDAC抑制能增强Ara-C诱导K562细胞凋亡;Western blotting检测发现Ara-C能降低HDAC6,增加磷酸化p38和激活型Caspase-3表达。可见Ara-C能够通过抑制HDAC6激活p38,诱导K562细胞发生凋亡。     

HepaCAM对肾癌786-0细胞Caspase-3活性和表达的影响

探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中不同表达水平对其凋亡及Caspase-3活性和表达的影响。将携带hepaCAM基因的重组质粒瞬时转染786-0细胞,RT-PCR鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;FCM检测细胞凋亡情况;分光光度计结合Western印迹法检测hepaCAM表达与Caspase-3活性及蛋白水平表达的关系。结果显示,上调hepaCAM基因表达能诱导肾癌786-0细胞凋亡,能上调Caspase-3活性及其蛋白水平且与hepaCAM表达水平呈正相关。上述结果表达,hepaCAM可能通过调节Caspase-3凋亡通路诱导肾癌786-0细胞凋亡。