新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因分型

目的了解我院新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及基因型特点。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证方法,对分离自广东省妇儿医院新生儿科病房的50株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测。应用PCR法分别扩增产酶菌的TEM、SHV和CTX-M基因,并进行DNA测序及分型。结果50株细菌中,检出ESBLs阳性菌22株,检出率为44%,其中大肠埃希菌5株,肺炎克雷伯菌17株。5株大肠埃希菌中,3株同时检出CTX-M-14和TEM-1,1株检出CTX-M-14,1株3种基因均未检出。17株肺炎克雷伯菌中7株同时检出CTX-M-14型和SHV-12,9株只检出SHV-12,1株只检出CTX-M-14。结论SHV-12型ESBLs是新生儿科病房最常见的ESBLs,其次为CTX-M-14。     

血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因分型

目的 了解深圳市人民医院致血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及基因型特点.方法 收集来自临床血液培养标本中的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌115株,采用ESBLs表型确证试验检测菌株的ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株TEM、SHV和CTX-M基因,并对阳性扩增产物进行DNA测序分型.结果 115株菌中共检出ESBLs阳性38株,检出率为33.0％;其中大肠埃希菌阳性25株,肺炎克雷伯菌阳性13株.25株产酶肠埃希菌中18株检出CTX-M-14基因,3株检出CTX-M-9基因.13株产酶肺炎克雷伯菌均检出SHV型基因,其中SHV-12阳性10株,SHV-2阳性2株,SHV-59阳性1株;该13株产酶菌中10株同时被检出含CTX-M-14或CTX-M-13基因.结论 该院致血流感染大肠埃希菌产ES-BLs以CTX-M-14为最主要基因型,肺炎克雷伯产ESBLs最常见为SHV-12和CTX-M-14型.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型

目的 了解深圳市人民医院临床泌尿系感染标本中产ESBLs大肠埃希菌的基因型特点.方法 收集近几年深圳市人民医院临床尿液标本中非重复的产ESBLs大肠埃希菌43株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,阳性株进行DNA测序分型.结果 43株产ESBLs大肠埃希菌中40株CTX-M基因阳性,分别为CTX-M-14型36株,CTX-M-9型2株,CTX-M-15型2株,其中17株CTX-M-14型菌株检出TEM-1基因;所有菌株均未检出SHV基因.结论 本地区致泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌中,CTX-M-14型为主.     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株的基因分型及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型特点及耐药性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的表型确证试验筛选出该院呼吸道分离株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共78株。应用PCR及DNA测序法分析产酶株的TEM、SHV及CTX-M3种β-内酰胺酶基因,用琼脂稀释法测定细菌最低抑菌浓度(MIC)。结果 37株产ESBLs大肠埃希菌中,28株(75.7%)检出CTX-M-14基因,4株(10.8%)检出CTX-M-9基因,其他型较少见。41株肺炎克雷伯菌中,25株(61.0%)检出SHV-12基因,4株(9.8%)检出SHV-11基因,其他SHV型较少。20株(48.8%)检出CTX-M-14基因,5株(12.2%)检出CTX-M-3基因,其他型较少。产ESBL菌株均对亚胺培南敏感,对氨苄西林/舒巴坦的耐药率最高(90%),对其他抗生素有不同程度耐药。结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌以CTX-M-14型为主,产酶肺炎克雷伯菌以SHV-12和CTX-M-14型为最常见。     

社区和医院获得性尿道致病性大肠埃希菌耐药性分析

目的了解浙江省社区和医院获得性尿道致病性大肠埃希菌的耐药现状及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株基因型,为临床合理用药提供科学依据。方法对2014年1月至2014年12月浙江省社区和医院获得性尿道致病性大肠埃希菌耐药情况进行分析,并随机各抽取20株菌株进行CTX-M基因型检测。结果社区和医院获得性大肠埃希菌共收集到93株和992株,产ESBLs菌株的阳性率分别为47.7%和68.5%,差异有统计学意义(P0.05);社区获得性菌株CTX-M基因检出率为30.0%(6/20),其中又以CTX-M-9为主(4/6)。医院获得性菌株CTX-M基因检出率50.0%(10/20),其中CTX-M-9占7/10。医院获得性菌株对头孢呋辛、头孢唑啉、头孢曲松、环丙沙星、左旋氧氟沙星、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑、呋喃妥因和阿米卡星的敏感率明显低于社区获得性菌株(P0.05)。结论浙江省医院获得性尿道致病性大肠埃希菌对部分抗菌药物的耐药率明显高于社区获得性菌株,ESBLs基因以CTX-M-9为主。     

产ESBLs大肠埃希菌的AmpC基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌合并产AmpC酶的状况及基因型特点.方法 从近几年深圳市人民医院产ESBLs大肠埃希菌临床菌株中,筛选出对头孢西丁耐药菌株51株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,同时应用多重PCR检测菌株的AmpC酶基因,序列测定PCR阳性产物以确定其基因亚型.结果 51株菌中有49株至少检出一种ESBLs或AmpC基因.单ESBLs基因阳性菌株37株(72.5％),单AmpC基因阳性4株(7.8％),合并ESBLs和AmpC基因阳性的8株(15.6％).共有41株(80.4％)含CTX-M-14基因,4株含CTX-M-15,其他基因型ESBLs较少.2株检出两种ESBLs基因;一株同时检三种ESBLs基因.检出AmpC基因的菌株12株,其中10株为DHA-1型,2株为CMY-2型;其中6株DHA-1型及2株CMY-2型菌同时检出CTX-M-14基因.结论 该院头孢西丁耐药产ESBLs大肠埃希菌中大多数为单产ESBLs菌,主要为CTX-M-14型;少数同时产生ESBLs和AmpC酶,AmpC酶以DHA-1型为最常见.     

肝移植术后感染大肠埃希菌的DNA多态性与耐药性分析

应用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术分析肝移植术后大肠埃希菌感染株DNA的多态性,并对其进行分型,研究肝移植术后大肠埃希菌感染的流行状况,并探讨大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与基因型之间的关系。应用1条含10个碱基的随机引物对20株大肠埃希菌的DNA进行随机扩增,ESBLs试验使用双纸片协同法。20株大肠埃希菌经RAPD分为11个基因型,ESBLs检测12株大肠埃希菌阳性,ESBLs阳性大肠埃希菌在700 bp有共同条带。肝移植术后感染以内源性感染为主,肠道细菌移位可能是大肠埃希菌感染的一个主要因素,ESBLs阳性检出率高,ESBLs阳性与基因型之间具有相关性。     

2921株大肠埃希菌的临床分布与耐药分析

目的了解近五年来本院分离的大肠埃希菌(ECO)的临床分布和耐药性变化,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考。方法采用VITEK-32全自动微生物分析系统,对2009-2013年分离的大肠埃希菌进行菌株鉴定和药物敏感试验,用WHONET 5.4软件进行耐药统计分析。结果 2009-2013年本院共分离出2 921株ECO,2009-2012年大肠埃希菌主要分离自尿液,平均占29.4%,2013年大肠埃希菌主要分离自血液,占27.6%;2011-2013年产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌平均检出率为70.1%,高于2009-2010年的平均检出率64.1%(P0.05);主要来源于普外科和ICU,分别占22.1%、18.4%;非产ESBLs大肠埃希菌对头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南的耐药率高于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05),对本研究其他药物的耐药率,非产ESBLs大肠埃希菌低于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05);产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均90%,非产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率70%。结论大肠埃希菌是临床常见致病菌,本市产ESBLs大肠埃希菌的分离率非常高,耐药问题十分严重,应加强合理使用抗菌药物管理,定期监测,控制耐药菌的产生,预防医院感染暴发流行。     

重症监护病房产ESBLs菌的基因分型

目的了解深圳市人民医院重症监护病房分离菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及其基因型分布情况。方法收集来自重症监护病房大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离株48株,采用CLSI推荐的表型确证方法筛选出ESBLs株,并利用PCR及DNA测序法分析产酶菌株的ESBL基因型。结果（1）48分离株菌中共检出产ESBLs菌24株,阳性率为50.0%。（2）产酶菌中93.8%（15/16）的大肠埃希菌和87.5%（7/8）的肺炎克雷伯菌分别检出CTX-M基因;其中72.7%（16/22）为CTX-M-14。6株肺炎克雷伯菌检出SHV基因,其中3株为SHV-11型,另3株为SHV-12型,6株含SHV基因的肺炎克雷伯菌中5株合并CTX-M基因。而所有大肠埃希菌株均未检出SHV基因。所有产酶菌中,分别有10株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌检出TEM-1基因,其中1株大肠埃希菌只检出TEM-1基因,未检出SHV型或CTX-M型基因。结论重症监护病房分离菌ESBLs检出率高,以CTX-M-14为主要基因型。     

肿瘤患者医院感染产ESBLS大肠埃希菌调查及基因分析

目的探讨肿瘤患者医院感染产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)大肠埃希菌的临床特点,并分析其基因型特征。方法对2014年3月~2016年10月我院肿瘤患者498株临床标本中分离出的338株产ESBLs大肠埃希菌的临床分布进行分析,并比较产与非产ESBLs菌株对19种抗菌药物的耐药率,同时随机抽取338株中的60株应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增ESBLs基因(TEM、CTX-M和SHV)型别。结果 498株大肠埃希菌中产ESBLs 338株(67.87%),标本类型以尿液标本为多(101株,29.88%),临床科室分布中妇瘤科最多(94株,27.81%)。产与非产ESBLs大肠埃希菌对亚胺培南及美罗培南耐敏感性高(耐药率为零),而产ESBLs大肠埃希菌的耐药率大多数均高于非产ESBLs大肠埃希菌,差异均有统计学意义(P0.05)。PCR扩增后基因测序显示,55株为TEM(91.67%),42株为CTX-M1(70.00%),42株为CTX-M13(70.00%),24株为SHV(40.00%),其中携带2种或2种以上耐药基因的有53株(88.33%)。结论本研究肿瘤患者医院感染产ESBLs大肠埃希菌主要标本以尿液标本为主,重点分布在妇瘤科;基因型以TEM、CTX-M1、CTX-M13型为主,并呈现多重耐药趋势。     

老年危重症患者尿路感染的病原菌分布及大肠埃希菌耐药性分析

目的 探讨老年危重症患者尿路感染的病原菌分布及其耐药特点。方法 选取2014年6月至2016年6月我院收治的老年危重症并发尿路感染患者360例作为研究对象,采集患者清洁中段尿液标本,进行细菌鉴定和药敏试验,筛选大肠埃希菌产ESBLs菌株。结果 共分离出病原菌218株,主要为大肠埃希菌（58.26%）;产ESBLs菌株对头孢呋辛完全耐药,对环丙沙星、头孢曲松、哌拉西林耐药率均在90%以上,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率在10%以下,对亚胺培南完全敏感,非产ESBLs菌株对绝大多数药物的耐药率显著低于产ESBLs菌株（P<0.05）。结论 老年危重症患者尿路感染病原菌以大肠埃希菌为主,产ESBLs是大肠埃希菌耐药的重要原因之一,医务人员应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。     

呼吸道产超广谱β-内酰胺酶分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)呼吸道分离株的主要基因型分布特点.方法用表型确证试验确定临床呼吸道标本中产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌.应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增产ESBLs株的bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因.结果 PCR结果显示bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因的总阳性率分别为40 .7%、45.7%和75.3%,其中大肠埃希菌分别为:64.9%、2.7%和91.9%,肺炎克雷伯菌分别为:20.5%、81.8%和61.4%.67.6%的大肠埃希菌和95.5%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因.结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV.大多数菌株同时携带多个基因.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌感染及耐药性分析

大肠埃希菌是临床最常见的病原菌之一,近年来产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染不断增加,给临床治疗带来了很大的难度。因此,了解其感染与耐药状况,对指导临床合理应用抗生素显得至关重要。笔者对2002年1月～2003年6月临床分离的产ESBLs大肠埃希菌感染情况及耐药性进行了分析,并与不产ESBLs大肠埃希菌进行了比较,现报告如下。     

2010至2011年我院产ESBLs大肠埃希菌的耐药性分析

分析2010年1月至2011年12月牡丹江医学院附属红旗医院临床分离的大肠埃希菌的耐药性变化,为指导临床合理用药提供依据。2010至2011年临床各科室送检的全部标本(包括血、尿、便、痰、分泌物等),采用微生物分析仪进行分离鉴定及药物敏感性分析。2010和2011年产ESBLs大肠埃希菌检出率分别为23.8%5、7.4%,呈上升趋势。产ESBLs大肠埃希菌对大多数抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌(P<0.05)。产ESBLs大肠埃希菌检出率越来越高,耐药率日益严重,给临床抗菌治疗带来很大困难,开展产ESBLs大肠埃希菌耐药性分析,指导临床合理应用抗生素,对控制大肠埃希菌对抗菌药物的耐药性增长有重大意义。     

综合ICU危重症患者大肠埃希菌致尿路感染菌群特点及耐药性

目的分析综合ICU危重症患者大肠埃希菌致尿路感染病原菌的分布特点和耐药性。方法收集2012-2014年宁波市北仑区第二人民医院128例综合ICU危重症患者大肠埃希菌致尿路感染的清洁中段尿液培养标本,分别进行细菌鉴定、药敏试验及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测。结果 128例患者共分离出大肠埃希菌128株,2012-2014年每年留置尿管患者检出的产ESBLs菌株数均多于非留置尿管患者,但差异无统计学意义(均P0.05)。产ESBLs菌株对头孢唑林、头孢呋辛完全耐药,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和头孢替坦较为敏感,对亚胺培南的敏感性最强。产ESBLs菌株对大部分抗菌药物的耐药性均高于非产ESBLs菌株,部分耐药性的差异具有统计学意义(P0.05)。结论大肠埃希菌产ESBLs菌株对多数抗菌药物存在较高的耐药性,但对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、亚胺培南的耐药性较低,可作为治疗大肠埃希菌致尿路感染优先抗菌药物。     

亚抑菌浓度头孢他啶对大肠埃希菌生物膜形成的影响与其耐药性相关性研究

目的:探讨亚抑菌浓度头孢他啶对大肠埃希菌生物膜形成的影响与细菌耐药性、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生及ESBLs基因分型的相关性,为临床生物膜感染的治疗和抗生素的合理使用提供理论依据。方法:大肠埃希菌最低抑菌浓度(MIC)检测采用琼脂平板倍比稀释法,超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)表型确证实验采用双纸片协同法,大肠埃希菌ESBLs基因检测采用PCR扩增,生物膜形成能力检测采用96孔板结晶紫染色法。结果:50株大肠埃希菌临床株对青霉素类、氟喹诺酮类、头孢哌酮及复方新诺明具有较高的耐药性,而对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高。所有菌株均对碳青霉烯类抗菌药物敏感。31株大肠埃希菌为ESBLs阳性菌株。CTX-M、TEM、OXA、SHV和VEB基因阳性率分别为93.5%、83.9%、19.4%、16.1%和3.2%。亚-MIC头孢他啶对9株(18.0%)大肠埃希菌生物膜形成具有抑制作用。亚-MIC头孢他啶对大肠埃希菌生物膜形成的影响与细菌耐药性和ESBLs均无相关性(P0.05)。结论:亚-MIC头孢他啶对大肠埃希菌生物膜形成的调控作用与细菌耐药性、产ESBLs及ESBLs基因分型均无相关性。     

女性2型糖尿病患者尿路感染病原菌的分布及耐药性监测

目的探讨女性2型糖尿病患者尿路感染病原菌的种类及耐药性,为临床合理用药提供科学依据。方法对2009年1月至2011年1月在绍兴市人民医院住院的女性2型糖尿病患者尿路感染病原菌的分布及耐药性进行回顾性分析。结果分离的112株病原菌,以大肠埃希菌为主,占58.9%,其次为肺炎克雷伯菌和真菌,分别为10.7%和8.9%;其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌株检出率为40.9%,产ESBLs的肺炎克雷伯菌株检出率为8.3%;大肠埃希菌对碳青霉烯类、头霉素类、丁胺卡那和呋喃妥因的耐药率较低,而肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物具有较好的敏感性。结论女性2型糖尿病患者易患尿路感染,病原菌以大肠埃希菌为主,且对多种抗菌药物的耐药率较高,临床应根据药敏结果合理选用抗菌药物。     

内蒙古地区临床危重患者三种常见感染细菌耐药基因的检测及耐药性分析

目的:探讨内蒙古地区临床危重患者常见感染细菌耐药基因的检测及耐药性相关因素,以便临床合理运用抗菌药物,为病原菌感染的预防和控制提供依据。方法:选取2010年1月至2013年1月在我院重症监护室治疗的病例中检测出的215株细菌为研究对象,运用相关的检测手段分析细菌的耐药性和耐药基因情况。结果:经过临床的检测后得出大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌分别为85株、55株和75株,其中产ESBLs大肠埃希菌54株,非产ESBLs大肠埃希菌31株;产ESBLs肺炎克雷伯菌15株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌40株。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南的敏感性最高,且在产与非产ESBLs菌株耐药上比较有差异性(P0.05);产与非产ESBLs菌株耐药基因检测方面比较无明显差异性(P0.05)。结论:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌均存在多重耐药情况,且耐药与喹诺酮耐药机制有一定的相关性。     

CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的序列分析与原核表达

目的对大肠埃希菌所产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌12号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-14,将其克隆入pUCm-T Vector载体后测定该核苷酸序列;再将基因编码区克隆到原核表达载体pET-28α,构建含CTX-M-14基因的重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定表达的酶蛋白后再过Ni-NTA柱纯化。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100％。大肠埃希菌BL21转化pET-28a／CTX-M-14重组质粒后,ESBLs试验为阳性。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,SDS-PAGE电泳显示蛋白分子质量大约为30KD。结论成功表达重组的CTX-M-14型酶,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。