miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡的影响

该文检测了人胃癌血清和胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平,并研究了miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡能力的影响,以探讨miR-181b-5p在胃癌发生和发展中可能的作用。荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测胃癌患者和健康人群血清中miR-181b-5p的水平以及胃癌细胞HGC-27和胃黏膜细胞GES-1中miR-181b-5p的水平,采用脂质体瞬时转染技术将miR-181b-5p抑制剂(inhibitors)以及inhibitors阴性对照分别转入胃癌细胞HGC-27中,用q RTPCR验证转染后miR-181b-5p的水平,CCK-8法检测miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27的增殖能力的影响,流式细胞术检测转染后胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的变化。q RT-PCR结果显示,胃癌患者血清中miR-181b-5p的水平高于健康人群(P0.05);胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平显著高于胃黏膜细胞GES-1中的水平(P0.01);转染miR-181b-5p inhibitors后其miR-181b-5p的水平显著低于inhibitors阴性对照组(P0.01)。CCK-8结果显示,将miR-181b-5p的水平下调后,胃癌细胞HGC-27的增殖能力明显下降(P0.01)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,胃癌细胞HGC-27的凋亡率显著增高(P0.01)。细胞周期检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,其S期明显缩短,G2/M期延长,细胞增殖受到抑制。以上结果表明,血清miR-181b-5p可能作为胃癌早期诊断的一个分子肿瘤标志物;miR-181b-5p在胃癌的发生和发展过程中可能起到癌基因的作用,并有可能作为胃癌分子治疗的一个新靶点。     

miR-374b-5p靶向调控UHMK1对前列腺癌PC-3细胞的影响

[目的]探讨miR-374b-5p调控UHMK1表达对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及凋亡的作用。[方法]萤光霉素报告检测miR-374b-5p对UHMK1的调控作用,将miR-NC、miR-374b-5p inhibitor和miR-374b-5p mimic转染到前列腺癌PC-3细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,改良的Matrigel Boyden室测定对细胞的侵袭性实施检测,划痕实验对细胞的具体迁移力实施检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测miR-374b-5p和UHMK1 mRNA表达,Western Bloting检测UHMK1蛋白表达。[结果]与对照组比较,miR-374b-5p inhibitor组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);miR-374b-5p mimic组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-374b-5p ...     

载脂蛋白E拟肽EpK对apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

前期设计合成了一种模拟人载脂蛋白E(apoE)结构域的小分子多肽EpK,体外实验证实该拟肽具有抑制巨噬细胞炎症及增强高密度脂蛋白(HDL)介导细胞胆固醇外流的作用.本文拟借助慢病毒体系分泌性表达EpK,研究EpK在体对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.将11月龄雌性apoE-/-小鼠18只,随机分两组,分别经眼球后静脉丛注射p WPI慢病毒(Lv-GFP对照组)和含EpK的重组慢病毒(Lv-EpK组).小鼠普食喂养,间隔采血监测血脂状态,检测血浆对氧磷酯酶(PON1)活性,病毒注射18周后小鼠安乐死,从主动脉根部连续冰冻切片及主动脉胸腹段纵剖面(en face)进行油红O染色分析斑块面积,采用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏相关基因的m RNA表达水平,蛋白质印迹检测血浆中apo A-Ⅰ、PON1及血清淀粉样蛋白A(SAA)水平.结果显示:慢病毒感染小鼠可成功在血循环中检测到EpK,与Lv-GFP对照组比较,Lv-EpK组apoE-/-小鼠的血脂及脂蛋白分布、apo A-Ⅰ水平、PON1活性无明显改变,但EpK组小鼠的主动脉斑块面积较对照组显著减少(主动脉根部斑块面积(0.87±0.07)mm2 vs(1.03±0.08)mm2,P0.05;主动脉胸腹段斑块占管腔比42.0%vs 55.8%,P0.01).EpK可显著降低血中SAA水平,并抑制肝脏炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果说明,EpK拟肽具有减退apoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的作用,其机制可能与其发挥的抗炎作用有关.     

miR-181b-5p 对于卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨Dppa2 基因5'' 端启动子区Oct4 结合位点突变对Dppa2基因启动子活性的影响。方法：PCR 扩增包括Oct4 结合 位点的Dppa2 基因5'' 端转录起始点上游-2439～+293 bp 的启动子序列,片段长度为2732 bp。将该片段连接到pGL3-Basic 载体, 构建野生型pGL3-2439表达载体。采用定点突变法,将-1959～-1957 位碱基的GCA突变成TAG,构建Oct4 结合位点突变型 pGL3-mo2439 表达载体。用上述两种表达载体、PGL3-basic 载体和Oct4 表达载体分别瞬时转染HEK 293 细胞。细胞培养48 h 后,利用双荧光素酶报告系统测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性。结果：经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,证实野生型 (pGL3-2439)和突变型(pGL3-mo2439)载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示,转染Dapp2 基因启动子野生型pGL3-2439 表 达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为16.307,突变型pGL3-mo2439 表达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为10.634。Oct4 结 合位点突变后,Dppa2 基因启动子区转录活性较野生型降低了35 %。结论：Dppa2基因5''端启动子区-1959～-1957 位的Oct4 结 合位点突变可能导致Dppa2 基因启动子活性下降。     

miR-181b-5p靶向调控Nr6a1抑制GC-1spg细胞的增殖与迁移

Micro RNA(mi RNA)是一段长约为22 nt的内源性非编码单链RNA,研究表明mi RNA对正常精子发生和雄性发育必不可少。为了探究mi R-181b-5p在雄性生殖细胞发育中的功能以及寻找其靶基因,首先采用流式细胞术、噻唑蓝检测以及划痕实验分析了mi R-181b-5p在小鼠GC-1spg精原细胞系中的生物学效应,随后利用Targetscan和GO数据库等生物信息学软件预测发现生殖核受体Nr6a1可能为其靶基因,进而通过双荧光素酶报告基因实验以及q PCR证实了mi R-181b-5p与Nr6a1的靶向识别关系,最后采用细胞功能回补实验明确了mi R-181b-5p通过靶向调控Nr6a1来抑制GC-1spg细胞的增殖和迁移。结果表明mi R-181b-5p通过其靶基因Nr6a1在精子发生中起到负调控的作用。     

血清miR-34b-5p、miR-155表达与早产儿急性呼吸窘迫综合征炎症因子和预后的关系分析

摘要 目的：探讨血清微小核糖核酸（miR）-34b-5p、miR-155表达与早产儿急性呼吸窘迫综合征（ARDS）炎症因子和预后的关系。方法：选择2019年2月至2021年3月我院收治的92例ARDS早产儿,根据ARDS病情严重程度将其分为轻度组（31例）、中度组（43例）和重度组（18例）,追踪患儿临床结局,根据院内死亡情况将其分为存活组（51例）和死亡组（41例）。检测所有患儿的血清miR-34b-5p、miR-155表达水平以及白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,比较各组间上述指标差异,分析ARDS早产儿血清miR-34b-5p、miR-155表达与炎症因子的相关性以及miR-34b-5p、miR-155预测ARDS早产儿预后的价值。结果：重度组miR-155表达水平及IL-1β、TNF-α、IL-6水平均高于中度组和轻度组,且中度组高于轻度组（P＜0.05）,重度组miR-34b-5p表达水平低于中度组和轻度组,且中度组低于轻度组（P＜0.05）。死亡组miR-155表达水平及IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于存活组（P＜0.05）,死亡组miR-34b-5p表达水平低于存活组（P＜0.05）。ARDS早产儿miR-155表达水平与IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关,而miR-34b-5p表达水平与IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈负相关（P＜0.05）。联合miR-34b-5p、miR-155预测ARDS早产儿死亡的曲线下面积（AUC）为0.853,高于两指标单独预测的0.688、0.649。结论：ARDS早产儿血清miR-34b-5p、miR-155表达水平与患儿血清炎症因子水平以及预后有关,可作为ARDS早产儿病情评估以及预后预测的潜在指标。     

鼻咽癌组织miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放疗敏感性和预后的关系研究

摘要 目的：探讨鼻咽癌组织微小核糖核酸（miR）-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放射治疗敏感性和预后的关系。方法：选取2017年11月至2019年6月我院收治的84例确诊为鼻咽癌并拟进行放射治疗的患者设为鼻咽癌组,另选取同期收治的42例慢性鼻咽炎患者为对照组,比较鼻咽癌组织及鼻咽部炎症组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平,分析鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。根据鼻咽癌患者放疗敏感性评估结果分为敏感组和抵抗组,比较两组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平。随访3年,Kaplan-Meier法及Cox回归分析法分析miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者生存预后的关系。结果：鼻咽癌组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于对照组（P＜0.05）。不同T分期、N分期、临床分期患者在miR-20b-5p、miR-325-3p高表达组与低表达组中的占比比较存在统计学差异（P＜0.05）。完成7~8周放疗后3个月评估患者放疗抵抗率36.90%,抵抗组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于敏感组（P＜0.05）。miR-20b-5p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-20b-5p低表达患者（P＜0.05）;miR-325-3p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-325-3p低表达患者（P＜0.05）。单因素、多因素Cox回归分析显示,年龄＞60岁、T3/T4期、miR-20b-5p高表达、miR-325-3p高表达是鼻咽癌患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。结论：鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p均异常高表达,其表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期及放疗敏感性有关,且miR-20b-5p、miR-325-3p高表达患者放疗后预后不良风险更大。     

circ_0015756通过调控miR-515-5p/HMGB3轴影响肺癌细胞增殖、凋亡和迁移

为探讨环状RNA0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平.同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、...     

miR-305-3p和miR-71-5p通过调控谷胱甘肽代谢途径参与斜纹夜蛾应对植物次生物质

昆虫和植物在长期进化过程中形成相互作用的关系。其中植物次生物质是植物防御昆虫的主要机制,而昆虫则以解毒酶来应对。为了发现可用于害虫防治的miRNA,通过对农业害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura进食芥菜Brassica juncea后中肠的测序分析,获得了一系列差异表达的miRNA。通过生物信息学分析,发现斜纹夜蛾miR-305-3p靶向了谷胱甘肽代谢中的谷氨酸半胱氨酸连接酶的催化亚基(Slgclc),这是一个谷胱甘肽从头合成的限速酶;而miR-71-5p靶向调控gclc和解毒酶表达的转录因子SlNrf2。用芥菜的次生物质吲哚-3-甲醇处理斜纹夜蛾Spli-221细胞株后,实时荧光定量PCR证明Slgclc和SlNrf2表达上调,miR-305-3p和miR-71-5p表达下调。分别在斜纹夜蛾Spli-221细胞中超表达miR-305-3p及miR-71-5p mimics,Slgclc或SlNrf2转录水平下调,并且miR-71-5p mimic处理抑制了SlNrf2下游基因Slgclc和解毒酶谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)的表达。结果表明:miR-305-3p和miR-71-5p响应植物次生物质而分别促进Slgclc和SlNrf2表达。然而双荧光素酶实验显示miR-305-3p并不与Slgclc直接结合,miR-71-5p也不与SlNrf2直接结合,推测miR-305-3p和miR-71-5p可能间接调控Slgclc和SlNrf2的表达。研究结果表明,斜纹夜蛾miR-305-3p和miR-71-5p通过调控解毒酶GSTs表达及其底物谷胱甘肽的生成,而参与昆虫抵抗植物次生物质。     

宫颈癌组织miR-200b-5p、miR-424-5p表达与临床病理特征、PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：探讨宫颈癌组织微小核糖核酸（miRNA）-200b-5p、miR-424-5p表达与临床病理特征、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路和预后的关系。方法：选取2016年7月～2019年6月西安市中心医院收治的123例宫颈癌患者,采用定量聚合酶链式反应（qPCR）检测癌组织与癌旁组织中miR-200b-5p、miR-424-5p、PI3K信使RNA（mRNA）、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。分析miR-200b-5p、miR-424-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性及与临床病理特征的关系。采用K-M法绘制不同miR-200b-5p、miR-424-5p表达宫颈癌患者生存曲线。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p表达降低,PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达升高（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达均呈负相关,PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈两两相关（P＜0.05）。miR-200b-5p、miR-424-5p表达与宫颈癌分化程度、国际妇产科联盟（FIGO）分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）。随访3年,123例宫颈癌患者累积生存率为62.60%（77/123）。K-M生存曲线分析显示,miR-200b-5p、miR-424-5p高表达组累积生存率分别高于miR-200b-5p、miR-424-5p低表达组（P＜0.05）。结论：宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p低表达,与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后有关。     

miR-216b-5p靶向调控BTN3A2促进胶质瘤细胞LN-229的迁移以及侵袭能力

大量证据表明microRNA（miRNA）通过靶向调控靶基因的表达从而在肿瘤侵袭与转移中发挥重要作用。然而关于microRNA-216b-5p (miR-216b-5p )通过靶向嗜乳脂蛋白第3亚家族膜蛋白A2（butyrophilin subfamily 3 member A2,BTN3A2）促进胶质瘤侵袭与转移的机制尚不明确。本研究通过GSE15824与GSE4290差异表达分析筛选出同时在2个芯片中表达上调的BTN3A2（P＜0.05）。生存曲线结果显示,高表达BTN3A2病人总生存期明显下降（P＜0.001）。表达量分析结果显示,BTN3A2表达随WHO分级升高而升高（P＜0.05）,同时1p/19q未联合缺失与IDH突变型病人BTN3A2表达升高（P＜0.001）。基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）结果显示,BTN3A2与众多癌症相关通路有关（P＜0.05）;Western印迹结果显示,BTN3A2在7例胶质瘤组织和胶质瘤细胞系U87、U251和LN-229中表达上调,过表达miR-216b-5p （miR-216b-5p mimics）后BTN3A2蛋白表达水平降低;Transwell结果显示,转染BTN3A2干扰质粒（si-BTN3A2）和miR-216b-5p mimics后可以抑制LN 229细胞体外迁移与侵袭能力（P＜0.05）;在线预测网站证实,miR-216b-5p 为BTN3A2潜在靶基因;生存曲线结果显示,与低表达miR-216b-5p 病人相比,高表达病人生存率明显上调（P=0.025）;荧光定量RT PCR结果显示,miR-216b-5p 在胶质瘤U87、U251和LN-229细胞中表达下降（P＜0.05）;双荧光素酶结果显示,BTN3A2存在与miR-216b-5p 的结合靶点(P<005);综上所述,BTN3A2可能通过结合miR-216b-5p 促进胶质瘤细胞LN 229的迁移以及侵袭。     

FBXO47 3'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p靶向验证

[目的]构建FBXO47基因3'-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-33b-5p与FBXO47的靶向关系。[方法]采用生物信息学软件预测miR-33b-5p与FBXO47结合位点;利用PCR扩增FBXO47基因3'-UTR序列,将其克隆到GV272载体中,构建FBXO47野生型及突变型双荧光素酶报告质粒;将miR-33b-5p或阴性对照分别与野生型GV272-FBXO47-wt 3'-UTR或突变型GV272-FBXO47-mut 3'-UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。[结果]酶切及测序结果表明,野生型GV272-FBXO47-wt 3'-UTR及突变型GV272-FBXO47-mut 3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性结果表明,相较于对照组,miR-33b-5p可使野生型GV272-FBXO47-wt 3'-UTR的荧光素酶活性降低66%左右;而定点突变GV272-FBXO47-mut 3'-UTR的荧光素酶荧光素酶活性没有显著变化。[结论]成功构建了FBXO47基因3'-UTR的荧光素酶报告基因载体,miR-33b-5p与FBXO47存在靶向性。     

miR-17-5p靶向信号调节基因SIRPα调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌的炎症反应

[目的]验证miR-17-5p对TLRs负向调控因子SIRPα的靶向性,探讨其对抗结核分枝杆菌(MTB)炎症反应的调控作用。[方法]利用生物信息学预测miR-17-5p对SIRPα的靶向性,构建SIRPα野生型和突变型报告载体,利用双荧光素酶报告法、Western Blot、激光共聚焦等技术验证miR-17-5p对SIRPα的靶向性;通过H37Ra感染THP-1巨噬细胞,用miR-17-5p mimics及其inhibitor处理细胞。利用Q-PCR检测H37Ra感染后miR-17-5p的表达;通过免疫荧光、Western Blot和ELISA等技术检测SIRPα和细胞因子TNF-α的表达情况。[结果]H37Ra感染可下调miR-17-5p表达,且随感染复数的增加,下调表达愈加显著;荧光素酶报告法、Western Blot等结果证实miR-17-5p可靶向结合SIRPα3’-UTR,下调SIRPα的表达,进而上调细胞因子TNF-α的表达。[结论]MTB可下调miR-17-5p表达,而miR-17-5p可靶向抑制SIRPα的表达,从而调控巨噬细胞抗MTB的炎症反应。     

miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemES增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemECs增殖、凋亡的影响.方法:RT-qPCR检测人血管瘤内皮细胞HemECs及其旁系组织细胞中miR-125b-5p与MCL-1 mRNA的表达;选取HemECs细胞分为对照组、miR-NC 组、miR-125b-5p mimic 组、miR-125b-5p in...     

血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平与股骨颈骨折患者骨折延迟愈合的关系及其预测价值分析

摘要 目的：探讨血清微小核糖核酸（miR）-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平与股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的关系及对术后骨折延迟愈合的预测价值。方法：选择2020年1月~2022年10月在徐州医科大学附属医院行内固定治疗的292例新鲜股骨颈骨折患者为研究对象。于术后4周复查时,检测患者血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平;并根据其骨折愈合情况分为延迟组（n=36）和愈合组（n=256）。采用多因素Logistic回归分析股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p对股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的预测价值。结果：术后4个月复查时,骨折延迟愈合发生率为12.33%。两组年龄、吸烟史、合并糖尿病组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。愈合组血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平均高于延迟组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、合并糖尿病、血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平降低是股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线结果显示,三者联合检测的曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.841（0.738~0.936）,高于各指标单独应用时的AUC,三者联合检测的灵敏度和特异度亦高于单一指标检测。结论：血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p在股骨颈骨折术后骨折延迟愈合患者中呈低表达,是骨折延迟愈合的独立危险因素,三者联合检测对股骨颈骨折患者骨折延迟愈合具有较高的预测价值。     

miR-106b-5p靶向调控SIRT7/SMAD4信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和迁移的影响机制探究

该文探讨了miR-106b-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其机制。采用qRT-PCR检测OSCC组织与细胞系中mi R-106b-5p表达情况,将SCC15、OECM1细胞分为Control组、miR-NC组、miR-106b-5p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p、anti-miR-106b-5p+si-NC组、anti-miR-106b-5p+si-SIRT7组,分别检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力, Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、SIRT7、SMAD4蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因实验与RIP实验验证miR-106b-5p与SIRT7的靶向关系。结果显示, miR-106b-5p在OSCC组织与细胞中表达水平升高(P<0.05),过表达mi R-106b-5p可显著促进OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,抑制miR-106b-5p表达可显著抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实, miR-...     

miR-491-5p靶向调控SHOC2对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-491-5p对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。方法培养永生化食管上皮细胞株HET-1A和人食管癌细胞株EC109,EC9706,KYSE510,qRT-PCR检测细胞中miR-491-5p和富含亮氨酸重复蛋白SHOC2(SHOC2)mRNA水平。EC109细胞分为空白对照组、miR-491-5p组、miR-NC组、miR-491-5p+pcDNA-SHOC2组和miR-491-5p+pcDNA组,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测CyclinD1、Vimentin、E-cadherin以及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-491-5p与SHOC2之间调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验。结果食管鳞癌细胞EC109、EC9706和KYSE510中miR-491-5p表达水平低于HET-1A细胞(0.32±0.06、0.62±0.10、0.61±0.08比1.00±0.08),差异具有统计学意义(F=106.340,P<0.001);SHOC2 mRNA表达水平高于HET-1A细胞(2.85±0.16、1.73±0.10、1.45±0.06比1.02±0.09),差异具有统计学意义(F=464.949,P<0.001)。miR-491-5p组EC109细胞培养72 h后的OD值、细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、Vimentin、p-MEK和p-ERK蛋白水平均低于miR-NC组(0.70±0.06比1.42±0.08,65.01±10.36比150.01±12.48,70.03±10.26比140.02±11.85,0.30±0.03比0.93±0.16,0.41±0.05比0.86±0.08,0.32±0.06比0.95±0.11,0.40±0.06比0.92±0.13),差异具有统计学意义(F=236.565、159.440、120.706、101.071、98.619、130.766、77.046,P均<0.001),E-cadherin蛋白水平高于miR-NC组(0.89±0.13比0.48±0.08),差异具有统计学意义(F=816.432,P<0.001)。miR-491-5p在EC109细胞中负调控SHOC2表达,SHOC2过表达逆转了miR-491-5p过表达对EC109细胞增殖、迁移和侵袭及MAPK/ERK信号通路的影响。结论miR-491-5p可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调SHOC2表达抑制MAPK/ERK信号通路活性有关。     

PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

miR-195-5p调节TGF-β1/Smad3信号通路对心力衰竭大鼠心肌细胞的影响

[目的]观察miR-195-5p调节TGF-β1/Smad3信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞的影响.[方法]将80只SD大鼠随机分为对照组、HF组、miR-195-5p-agomir组、miR-NC组,每组各20只,阿霉素建立HF大鼠模型.比较心功能、心肌细胞miR-195-5p表达、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白、...